氣質(zhì)聯(lián)用法測定黑果小檗中脂肪酸

劉河疆，周曉龍，錢宗耀，王建梅

（新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測技術(shù)研究所，新疆烏魯木齊 830091）

黑果小檗（Breberis heteropoda Shrenk）為小檗科落葉灌木，其莖皮及根含小檗堿，性平，可健胃，清熱解毒，生津止渴[1]。果實含葡萄糖、果糖、蘋果酸、抗壞血酸、有機酸、綠原酸、微量小檗堿、胡蘿卜素、黑果小檗紅色素、脂肪油[2]等。國內(nèi)脂肪酸的氣相色譜-質(zhì)譜檢測分析已有大量報道[3-6]，而關(guān)于黑果小檗的脂肪酸研究較鮮見，為此，筆者通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)對黑果小檗中全部脂肪酸的化學(xué)成分進行分析與測定，旨在為進一步開發(fā)黑果小檗藥用和保健產(chǎn)品提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料和試劑

1.1.1 樣品材料

黑果小檗，采自新疆烏魯木齊南山。

1.1.2 試劑

乙醚、石油醚、氫氧化鉀：分析純；正己烷、甲醇：色譜純。

1.1.3 儀器

Clarus 500 型氣相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用儀：Perkin Elmer 公司；配電子轟擊離子（EI）源；PB303-E 型電子天平：梅特勒-托利多儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海EYELA 公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理

將黑果小檗新鮮果實曬干，將果肉（皮）與種子籽粒分開，然后用研缽各自磨成粉末，備用。各稱取0.5 g于10 mL 試管內(nèi)，依次加入2.5 mL 正己烷-乙醚（體積比2∶1）、2.5 mL 甲醇、2.5 ml 2 mol/L 氫氧化鉀-甲醇溶液，對黑果小檗中脂肪酸進行甲酯化，振搖混勻，靜置25 min 后，加入2.5 mL 蒸餾水。分層后，取上層有機相加入正己烷稀釋，然后用針筒式微孔濾膜過濾器過濾至進樣瓶，進樣量1 μL，進行GC/MS 分析。

1.2.2 儀器條件

氣相色譜（GC）條件：色譜柱：HP-FFAP 柱（30 m×0.25 mm×0.5 μm）；載氣：氦氣（99.999 %）；流速：1.0 mL/min；進樣：1.0 μL，不分流；進樣口溫度：250 ℃；程序升溫：100 ℃，以20 ℃/min 升溫至280 ℃，保持11 min；

MS 條件：離子化方式：電子轟擊（EI）；離子化能量：70 eV；離子源溫度：230 ℃；傳輸線溫度220 ℃；溶劑延遲：3 min；掃描方式：全離子掃描（SCAN），掃描范圍：50 amu～450 amu；

圖1 黑果小檗種子籽粒脂肪酸甲酯總離子流圖Fig.1 Full scan mass chromatogram of fatty acids methyl ester in seed of Breberis heteropoda shrenk

1.2.3 定性定量分析

用GC/MS 進行全離子掃描分析。用NIST05 譜圖庫進行譜圖查詢解析，對黑果小檗中各種脂肪酸的進行定性。用歸一化面積百分比法定量計算黑果小檗中各脂肪酸的含量。

2 結(jié)果與討論

2.1 實驗結(jié)果

通過對甲酯化樣品進樣后的圖譜，經(jīng)查對有關(guān)質(zhì)譜資料和文獻進行分析，得出黑果小檗中脂肪酸組成成分，結(jié)果見圖1、圖2。經(jīng)面積歸一法定量計算黑果小檗果實中各部分脂肪酸的相對百分含量見表1、表2。

圖2 黑果小檗果肉（皮）脂肪酸甲酯總離子流圖Fig.2 Full scan mass chromatogram of fatty acids methyl ester in sarcocarp of Breberis heteropoda shrenk

由表1 和表2 的結(jié)果顯示，黑果小檗果實中脂肪酸分布是不同的：黑果小檗種子籽粒中共鑒定了18 個脂肪酸成分，占色譜總出峰面積的90.001%，其主要成分是亞麻酸，其次為亞油酸、油酸、棕櫚酸、硬脂酸；其果肉（皮）部分，共分離鑒定了10 個脂肪酸成分，占色譜餾分總出峰面積的33.32%，其主要成分是二十四烷酸，其次為亞麻酸、亞油酸、棕櫚酸、油酸、山崳酸、硬脂酸。

表1 黑果小檗種子籽粒中脂肪酸甲酯化學(xué)組分及含量Table 1 Compositions and percentages of fatty acids methyl ester in seed in seed of Breberis heteropoda shrenk

表2 黑果小檗果肉（皮）中脂肪酸甲酯化學(xué)組分及含量Table 2 Compositions and percentages of fatty acids methyl ester in seed in sarcocarp of Breberis heteropoda shrenk

2.2 討論

黑果小檗種子籽粒與果肉（皮）部分相比，種子籽粒中脂肪酸營養(yǎng)和藥用價值更高，其不飽和脂肪酸含量為81.59%，飽和脂肪酸含量僅為8.41%，此外，從表中還可以看出黑果小檗果實中脂肪酸主要為偶數(shù)碳脂肪酸，而奇數(shù)碳脂肪酸含量很低。由于果肉中脂肪酸出峰面積僅占色譜總出峰面積的33.32 %，使得歸一化法計算的含量均較低，黑果小檗果肉（皮）部分非甲酯化有效成分研究，有待今后進一步分析和討論。

3 結(jié)論

亞麻酸、亞油酸是人體所必須的不飽和脂肪酸[7，10]，具有降低膽固醇、調(diào)節(jié)血脂、預(yù)防心腦血管疾病等作用，黑果小檗中亞麻酸、亞油酸等不飽和脂肪酸含量較高，可作為有良好的保健和藥用食品開發(fā)來源。本研究結(jié)果為快速、準(zhǔn)確測定黑果小檗脂肪酸含量提供了參考，同時對其果實中各部分脂肪酸進行了分離鑒定，為進一步開發(fā)黑果小檗提供了科學(xué)依據(jù)。

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