乙酰甲喹對雞急性亞急性毒性研究

劉迎春，曾振靈

（1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所 農(nóng)業(yè)部動物寄生蟲學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200241;2華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)獸醫(yī)藥理實(shí)驗(yàn)室 廣州 510642）

乙酰甲喹 (mequindox)，又名痢菌凈，化學(xué)名為3-甲基-2-乙?；?喹噁啉- N1，N4 -二氧化物，為卡巴氧類似物，為中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所最早合成的一類新獸藥[1]。臨床上乙酰甲喹對仔豬黃、白痢[2]、豬痢疾[3]及禽大腸桿菌病均具有較好的療效，另外，由于其價格低廉，被廣泛用于養(yǎng)殖業(yè)疾病的防治。但是在養(yǎng)殖戶使用過程中，由于對乙酰甲喹藥理學(xué)性質(zhì)了解不是很透，從而導(dǎo)致中毒事件時有發(fā)生[4,5]。國內(nèi)對于乙酰甲喹毒性方面的報道均是根據(jù)中毒病例進(jìn)行分析，關(guān)于乙酰甲喹對雞的急性毒性以及亞急性毒性方面的研究國內(nèi)外鮮有報告，鑒于同類其他藥物及乙酰甲喹對動物存在肝、腎等內(nèi)臟毒性，且對腎上腺及醛固酮系統(tǒng)有損害[6]，本研究擬測定各臟器系數(shù)以及血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、肌酐等反應(yīng)肝、腎功能的生化指標(biāo)，評價乙酰甲喹對雞的臨床毒副作用與不良反應(yīng)，從而為獸醫(yī)臨床更合理的應(yīng)用此藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器魅力1800全自動生化分析儀（美國MDSIN公司）。

1.2 藥物乙酰甲喹（含量99.5%，批號20060801，江蘇天成保健品有限公司），給雞灌服前用0.5%羧甲基纖維素鈉制成混懸液備用。

1.3 試驗(yàn)動物500只1日齡科寶-500白羽雞，購自正大康地（東莞）有限公司，飼喂不含任何藥物的空白飼料。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.4.1 急性毒性試驗(yàn)分組 試驗(yàn)雞飼喂至3 w齡，隨機(jī)抽取體重相近的10只進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，以確定試驗(yàn)雞對乙酰甲喹的最大耐受量。飼養(yǎng)至第4 w齡選擇體重相近的70只，隨機(jī)分為7組，每組10只，其中6組劑量組，1組空白對照組，灌服前將乙酰甲喹用0.5%羧甲基纖維素鈉配制為最高濃度為240 mg/mL混懸液，并依次倍比稀釋至6個濃度，稀釋倍數(shù)為1.25。然后以最大容許量，不同濃度一次性給雞灌藥，6個劑量組濃度分別為78.6、98.3、122.9、153.6、192.0、240.0 mg/kg 體重，灌藥后對其體重、精神狀況觀察2 w，記錄死亡雞只并剖檢。

1.4.2 亞急性毒性試驗(yàn)分組 試驗(yàn)雞飼養(yǎng)至第7 w齡選取體重相近的250只，隨機(jī)分為5組，每組50只，其中4組劑量組，1組空白對照組，拌料給藥。根據(jù)急性毒性試驗(yàn)結(jié)果，飼料添加乙酰甲喹濃度依次為 75、150、300、600 mg/kg。其中飼喂至第 5 w，各組均改為空白飼料，觀察其恢復(fù)情況。

1.4.3 血樣采集 亞急性毒理試驗(yàn)分別于給藥后第1、2、3、4、5 w采集雞心血，每組隨機(jī)取10只，10 mL/只，采血前對每只雞稱重。采集血液靜置、分離血清后進(jìn)行血清生化指標(biāo)測定。

1.4.4 組織病理學(xué)觀察及臟器系數(shù)測定 對采集血樣后的每組10只試驗(yàn)雞剖檢，觀察病變并分別取其心、肝、脾、肺、腎及生殖器官稱重后，每組取2只雞臟器用10%中性福爾馬林固定，送往本校獸醫(yī)病理實(shí)驗(yàn)室制備病理切片。臟器系數(shù)=臟器重（g）/活體重（kg）。

1.4.5 血清生化指標(biāo)測定及方法 丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、白蛋白（ALB）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、血中尿素氮（BUN）、血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、肌酐（GREA）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、總蛋白（TP）、總膽紅素（TBIL）、總膽固醇（TC）。檢測試劑盒均有（默克）公司提供，測定方法均根據(jù)試劑盒說明進(jìn)行。

1.4.6 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 13.0軟件進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)和多重比較。

2 結(jié)果與討論

2.1 臨床與組織形態(tài)學(xué)觀察急性毒理試驗(yàn)在高劑量組 240.0 mg/kg 體重，給藥第 3 d 便出現(xiàn)雞只死亡，剖檢發(fā)現(xiàn)肝臟出現(xiàn)紫紅色病變，膽囊充盈，腺胃與肌胃交界處出現(xiàn)彌漫性出血嚴(yán)重者呈黑褐色糜爛、潰瘍，腎臟腫大充血，腸道出現(xiàn)鼓氣并有出血點(diǎn)，心肌變軟。存活雞只精神沉郁，采食量明顯下降，羽毛凌亂，翅膀下垂，扎堆，拉黃綠色稀糞。各組死亡情況見表1。亞急性毒理試驗(yàn)過程中600 mg/kg組在給藥第2 w開始出現(xiàn)雞只死亡。其他劑量組未見雞只死亡及明顯中毒現(xiàn)象。

表1 急性毒性試驗(yàn)各組的死亡率Table1 Mortality in acute toxicity group

2.2 乙酰甲喹對實(shí)驗(yàn)雞臟器系數(shù)影響乙酰甲喹對臟器系數(shù)的影響結(jié)果見表2。從表2可以看出飼喂添加有乙酰甲喹的飼料第1 w與對照組相比除各劑量組腎臟均出現(xiàn)顯著性差異（p＜0.05），C組與D組脾臟與對照組差異顯著（p＜0.05），各組其他臟器與對照組差異不顯著（p＞0.05）；第3 w C組與D組心臟與對照組差異顯著（p＜0.05），A組，B組與C組腎臟與對照組差異顯著（p＜0.05），C組肺臟與對照組差異顯著（p＜0.05）；第4 w與第5 w各組臟器系數(shù)與對照組差異均不顯著（p＞0.05）。

表2 亞急性毒性試驗(yàn)中乙酰甲喹對雞臟器系數(shù)的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）Table 2 Organ coeffi cient of chickens given mequindox for subacute toxicity （± S .D.）

表2 亞急性毒性試驗(yàn)中乙酰甲喹對雞臟器系數(shù)的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）Table 2 Organ coeffi cient of chickens given mequindox for subacute toxicity （± S .D.）

注 ： * 表明p＜0.05 差異顯著 ; ** 表明p＜0.01 差異極顯著Notes： * indicates p＜0.05 signifi cant difference; ** indicates p＜0.01 very signifi cant difference

臟器Organs時間Time (d)對照組Control group試驗(yàn)組（mg/kg 飼料）Experiment groups （mg/kg feeds）0 75 (A) 150 (B) 300 (C) 600 (D)7 4.32±0.69 3.27±1.00心14 21 28 35 4.91±1.02 3.91±0.59 5.89±1.27 3.81±0.88 3.84±0.37 4.26±0.41 3.71±0.56 4.96±0.44 3.59±0.27 4.48±0.68 4.49±0.45 4.27±0.75 3.94±0.37*3.64±0.50 4.16±1.81 4.08±0.13 4.88±0.89 4.29±1.29*3.37±0.16 4.23±1.31肝脾肺腎7 14 21 28 35 7 14 21 28 35 7 14 21 28 35 7 14 21 28 35 17.97±2.86 20.33±3.45 24.42±5.02 18.78±2.20 17.33±1.64 0.97±0.24 1.39±0.32 1.56±0.47 1.21±0.32 1.24±0.41 4.79±1.03 4.94±0.57 5.55±1.12 3.91±0.79 5.22±1.80 3.85±1.02 5.21±0.72 5.40±1.34 4.69±0.19 4.76±0.70 20.92±2.95 17.30±1.61 14.09±2.38 18.71±3.93 18.62±5.38 1.36±0.46 1.20±0.23 1.88±0.59 1.30±0.32 1.81±0.98 4.77±0.76 4.62±0.80 4.48±0.33 4.48±1.11 4.12±0.38 5.39±0.59*5.70±1.01 6.11±0.64*5.82±0.77 5.53±0.90 17.74±1.63 20.43±6.12 19.27±2.69 19.47±3.30 18.27±8.17 1.32±0.15*1.31±0.62 0.99±0.24 1.76±1.26 1.14±0.24 3.94±0.86 5.34±1.49 3.67±0.48 4.33±0.59 4.39±0.61 5.80±0.540*6.32±1.10 6.89±1.24*5.89±0.63 5.60±3.61 17.51±0.80 20.26±4.79 22.05±4.28 17.81±2.51 16.94±5.67 1.50±0.50*1.30±0.42 1.39±0.41 1.26±0.38 1.18±0.53 4.05±0.74 4.08±1.04 4.92±0.99*4.24±0.72 4.61±1.68 6.21±0.42*6.31±1.00 7.39±1.46*6.01±0.56 6.58±1.17 18.84±1.85 19.23±4.50 1.26±0.47 1.11±0.28 5.47±1.20 4.09±0.39 6.29±0.67*6.62±0.92 7生殖器官14 21 28 35 0.23±0.07 0.38±0.10 0.47±0.11 0.57±0.56 0.96±1.13 0.27±0.04 1.15±1.43 0.35±0.05 0.77±0.33 0.66±0.35 0.23±0.11 0.37±0.30 0.74±0.57 0.76±0.44 0.30±0.13 0.43±0.21 0.41±0.24 0.44±0.10 1.59±1.39 1.02±0.88 0.20±0.15 0.28±0.12

2.3 乙酰甲喹對實(shí)驗(yàn)雞只體重增重影響實(shí)驗(yàn)雞給藥后每組增重情況如圖1所示。從圖 1可知對照組增重均高于各給藥組，說明乙酰甲喹對雞的生長有不同程度的抑制作用。

圖1 亞急性毒性試驗(yàn)中乙酰甲喹對雞每周增重的影響Fig.1 Weight increasing of chickens given meqindox every week for subacute toxicity test

2.4 乙酰甲喹血液生化指標(biāo)影響乙酰甲喹對實(shí)驗(yàn)雞血液生化指標(biāo)影響結(jié)果，見表 3。從表中可以看出乙酰甲喹對血液中天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）與總膽紅素（TBIL）有嚴(yán)重影響，第1 w C、D組AST與對照組差異顯著（p＜0.05），第1、2 w除A組外其他各組TBIL與對照組差異顯著（p＜0.05），第3、4、5 w各給藥組AST，TBIL（除A組）與對照組差異均顯著（p＜0.05），D組與對照組差異均顯著（p＜0.05），丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT），堿性磷酸酶（ALP），白蛋白（ALB），谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT），血中尿素氮（BUN），血糖（GLU）、甘油三酯（TG）、肌酐（GREA）與對照組差異均不顯著（p＞0.05）；第1 w D組總蛋白（TP）與對照組差異顯著（p＜0.05），第2 w B 組、C組與D組總蛋白（TP）與對照組差異顯著（p＜0.05）；第1 w B組與C組與對照組差異顯著（p＜0.05）；第2 w B組、C組與D組對照組差異顯著（p＜0.05）；給藥后第2 w A組、B組與C組總膽固醇（TC）與對照組差異顯著（p＜0.05），D組差異極顯著（p＜0.01）。

表3 亞急性毒性試驗(yàn)中乙酰甲喹對雞血清生化指標(biāo)的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）Table 3 Blood biochemistry of chickens given mequindox for subacute toxicity test (± S .D.)

表3 亞急性毒性試驗(yàn)中乙酰甲喹對雞血清生化指標(biāo)的影響（平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤）Table 3 Blood biochemistry of chickens given mequindox for subacute toxicity test (± S .D.)

7 127.95±18.45*204.70±41.51*AST 14 21 28 35 87.16±11.57 263.20±32.59 285.93±26.63 359.60±150.13 340.75±34.39 82.933±33.51 261.22±36.41 199.20±124.23*250.06±94.97*255.72±74.97*92.07±23.81 293.84±14.15 300.30±27.28*256.76±79.02*509.63±321.34*124.60±33.66*261.00±67.52 333.98±64.14*177.33±40.80*223.10±188.99*ALT ALP TP 7 14 21 28 35 7 14 21 28 35 7 14 21 28 35 7.2±2.73 3.54±3.24 4.73±7.26-3.08±5.62 4.93±4.81 1504.34±744.79 1327.76±1226.49 1007.83±647.28 639.74±130.66 1055.03±749.94 51.40±3.69 38.16±19.83 64.90±15.53 58.84±3.63 66.85±17.24 4.40±1.13 0.94±1.79 2.94±2.20 0.28±2.65 4.34±8.16 1432.10±795.69 1249.18±385.27 685.02±484.25 735.70±282.04 782.44±310.17 50.93±4.43 41.76±7.57 56.96±8.88 60.94±11.30 60.72±10.14 5.17±1.33 1.74±1.02 3.80±2.72-0.2±3.96 0.9±3.14 1223.53±304.89 878.70±203.55 849.95±201.62 673.90±336.12 629.63±168.63 55.10±5.93 62.80±3.19*59.38±6.53 53.80±6.60 57.65±27.37 7.80±1.69 1.78±2.16 2.10±0.76-7.45±9.01 2.54±12.18 1006.70±474.18 786.70±259.28 1107.68±529.28 597.20±182.03 795.05±994.88 48.30±6.08 51.86±3.54*58.96±14.62 57.70±11.53 49.95±3.78 4.25±1.20 2.23±0.42 1023.30±442.22 910.3±162.71 42.65±1.91*56.80±7.60*

續(xù)表

2.5 本研究發(fā)現(xiàn)乙酰甲喹對肉雞具有較大毒性，急性毒性實(shí)驗(yàn)研究表明半數(shù)致死量為205.2 mg/kg。亞急性毒性實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)乙酰甲喹對肉雞腎臟具有嚴(yán)重影響，對雞的生長有不同程度的抑制作用。飼料拌藥濃度為600 mg/kg飼料時，飼喂兩周雞只死亡率達(dá)到100%，所以建議治療用藥時，飼料添加濃度不要超過150 mg/kg飼料。

乙酰甲喹對雞急性毒理性結(jié)果表明當(dāng)給每kg實(shí)驗(yàn)雞一次性灌服240 mg乙酰甲喹時，死亡率到達(dá)80.0%，隨著劑量減少死亡率明顯降低，乙酰甲喹對靶動物雞的半數(shù)致死量為205.21 mg/kg，95%可信限為 185.78～226.46 mg/kg。

乙酰甲喹對雞增重方面的影響從結(jié)果可以看出，給雞飼喂含有乙酰甲喹的飼料，對其增重有不同程度的抑制作用，添加濃度為600 mg/kg飼料時影響最為嚴(yán)重，臨床上推薦飼料添加濃度為50 mg/kg飼料，從雞只安全角度考慮添加濃度不應(yīng)超過150 mg/kg飼料。

乙酰甲喹對雞臟器系數(shù)影響從測定臟器系數(shù)看，大劑量的乙酰甲喹主要對雞只腎臟產(chǎn)生嚴(yán)重影響，解剖過程中可發(fā)現(xiàn)給藥雞腎臟明顯腫大，其次在高濃度組發(fā)現(xiàn)肝臟呈紫紅色病變，膽囊充盈明顯，個別公雞出現(xiàn)睪丸異常腫大，從動物某些臟器所具有的特異的代償機(jī)能考慮，如果對臟器沒有實(shí)質(zhì)性的損害，其臟器系數(shù)可能變化不大，臟器的組織形態(tài)學(xué)變化早于臟器系數(shù)與生化指標(biāo)的變化，因此臟器組織形態(tài)學(xué)的變化可以做為較為靈敏的方法來檢查藥物對臟器的影響，從我們所得到的組織切片可以看出乙酰甲喹對腎臟、肝臟以及脾臟都有不同程度的影響。

乙酰甲喹對雞血液生化指標(biāo)的影響本試驗(yàn)測定的血清生化指標(biāo)AST、ALT、ALP、TP、ALB、GGT、TBIL、BUN、CREA、GLU、TG、TC結(jié)果表明，乙 酰 甲 喹 對 ALT、ALP、ALB、GGT、BUN、GLU、TG 、GREA指標(biāo)與空白組差異不顯著，但是與空白對照組相比BUN指標(biāo)具有升高趨勢，BUN多因腎功能不全（急性或慢性）、脫水和休克等引起腎血流量減少或伴有腎功能障礙的氮代謝的變化。從血清生化指標(biāo)測定結(jié)果分析乙酰甲喹使AST在血液中含量受到嚴(yán)重影響，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶廣泛分布于體內(nèi)各個組織器官中，與各個組織細(xì)胞進(jìn)行旺盛的氨基酸代謝相適應(yīng)，天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶在細(xì)胞內(nèi)主要存在于線粒體和細(xì)胞質(zhì)中。肝臟損傷時天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶很容易釋放入血液中，使血液中天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶升高。本實(shí)驗(yàn)中通過天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶升高說明乙酰甲喹對實(shí)驗(yàn)雞肝臟有不同程度的損傷。

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