如意金黃散控制早期淺表皮膚感染的基礎(chǔ)研究

吳穎秀

（天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，天津300150）

皮膚和淺表組織化膿性感染在臨床上較為常見(jiàn)，多為化膿性細(xì)菌侵入毛囊或皮脂腺引起，屬于中醫(yī)外科“癤”、“癰”的范疇。其病原菌多為金黃色葡萄球菌，可造成局限性組織壞死，引起全身化膿性感染及轉(zhuǎn)移性膿腫，同時(shí)容易對(duì)抗抗生素產(chǎn)生耐藥性［1］。因此，在盡量減少抗生素應(yīng)用的基礎(chǔ)上，促進(jìn)感染早期炎性反應(yīng)的控制尤為重要。而外用中成藥制劑的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用，則為此提供了一種新的思路。本實(shí)驗(yàn)旨在觀察中成藥如意金黃散酊劑對(duì)家兔淺表皮膚感染模型的治療作用，并對(duì)其抗炎機(jī)制進(jìn)行初步探討。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 取12個(gè)月新西蘭大白兔30只，體重（3.4±0.4）kg，雌雄不拘，雌性無(wú)孕，由天津中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均預(yù)先飼養(yǎng)2天，適應(yīng)動(dòng)物房環(huán)境條件。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 如意金黃散 （天津同仁堂股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z11020906），主要成分：姜黃、大黃、黃柏、蒼術(shù)、厚樸、陳皮、甘草、生天南星、白芷、天花粉。莫匹羅星軟膏 （中美天津史克制藥有限公司，批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H10930194），卡波姆940（上海人民制藥廠，批號(hào)：01050），無(wú)水乙醇，金黃色葡萄球菌（ATCC25923廣東環(huán)凱微生物科技有限公司）。

1.3 如意金黃散酊劑制備方法 如意金黃散按標(biāo)準(zhǔn)劑量秤取如意金黃散粉劑100g，溶于8倍無(wú)水乙醇內(nèi)浸泡48h，分兩次回流提取，每次2～3h，濾過(guò)殘?jiān)占继崛∫杭闯扇缫饨瘘S散酊劑。

1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)備 全自動(dòng)生化分析儀 （強(qiáng)生，VITROS5，1FS），酶標(biāo)儀 （Labsystems Multiskan MS，352型），洗板機(jī) （Thermo Labsystems，AC8型），恒溫箱 （GNP.9080型，隔水式恒溫培養(yǎng)箱儀器。家兔IL－1βELISA試劑盒，家兔TNF－αELISA試劑盒，以上均購(gòu)自美國(guó)GBD公司。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 動(dòng)物分組及模型建立 新西蘭大白兔30只按金黃散治療組、抗生素組及空白對(duì)照組隨機(jī)分為3組，每組各10只。按體重給予3%戊巴比妥鈉靜脈麻醉，腹位固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，背部去毛備皮，清水沖凈擦干局部皮膚。常規(guī)碘伏消毒術(shù)區(qū)，鋪無(wú)菌巾，自背部中部距棘突2cm兩側(cè)分別皮下注射0.2ml金黃色葡萄球菌液 （細(xì)菌濃度為10萬(wàn)個(gè)／ml）造成2處早期皮膚局部感染模型以防保證造模質(zhì)量。

1.5.2 治療方法 自造模成功后第二日起各組動(dòng)物行換藥治療；金黃散治療組采用無(wú)菌紗布浸如意金黃散酊劑外敷至以注射部位為中心直徑2cm范圍，每日3次；抗生素組以0.2g／cm2莫匹羅星軟膏涂抹相同部位及范圍，每日3次；空白對(duì)照組不作任何處理。三組均以無(wú)菌紗布固定包扎，注意防止彼此間交叉感染，共觀察7d。

1.5.3 療效標(biāo)準(zhǔn) 愈合：炎癥完全消退或范圍較前明顯減小。未愈：炎癥范圍較前無(wú)明顯變化或炎癥進(jìn)一步擴(kuò)散，形成局部膿腫。

1.5.4 觀察指標(biāo)

1.5.4.1 造模及局部感染控制情況評(píng)估 造模后12h后觀察局部紅腫情況，有無(wú)破潰、成膿情況，并選擇性剔除無(wú)意義樣本，并在治療后根據(jù)2.3療效標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)。

1.5.4.2 早期感染區(qū)域面積計(jì)算 取治療后第1d、2d、3d為時(shí)間點(diǎn)，以透明硫酸紙覆蓋并描記出感染區(qū)域輪廓并裁下稱重，稱得單位面積硫酸紙 （1×1cm2）為4.8mg。按以下公式計(jì)算感染區(qū)域面積：感染區(qū)域面積（cm2）＝所裁硫酸紙重量／4.8。

治療前后耳緣動(dòng)脈取血，用家兔TNF－αELISA試劑盒、家兔IL－1βELISA試劑盒測(cè)定血液樣本中的TNF－α、IL－1β含量。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所得數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)，計(jì)量資料利用ANOVA檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （χ±S）表示，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 造模情況 三組造模后家兔背部注射位置大部分出現(xiàn)局部以針孔為中心的局部紅腫，空白對(duì)照組20處紅腫范圍中8處已形成淺表膿腫，7處紅腫范圍擴(kuò)散但未形成膿腫，5處未見(jiàn)明顯變化，金黃散治療組20處紅腫范圍中7處已形成淺表膿腫，10處紅腫范圍擴(kuò)散但未形成膿腫，3處未見(jiàn)明顯變化，抗生素組20處紅腫范圍中9處已形成淺表膿腫，7處紅腫范圍擴(kuò)散但未形成膿腫，4處未見(jiàn)明顯變化，且每只家兔背部感染均≥1處。剔除各組未形成感染樣本，各組局部感染例數(shù)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 金黃散酊劑對(duì)皮膚淺表感染家兔模型感染的早期控制情況 金黃散治療組愈合率明顯高于抗生素治療組及空白對(duì)照組，其中金黃散治療組與空白對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01），而金黃散治療組與抗生素治療組比較以及抗生素治療組與空白對(duì)照比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （見(jiàn)表2）。

表1 皮膚淺表感染家兔模型感染家兔造模情況 （n＝20）

表2 金黃散酊劑對(duì)皮膚淺表感染家兔模型感染的早期控制情況 （%）

2.3 早期感染區(qū)域面積計(jì)算 考慮4d后部分家兔感染完全消失，故取換藥后3天感染區(qū)域面積進(jìn)行早期觀察。觀察顯示三組感染區(qū)域面積均有不同程度縮小，其中金黃散治療組面積縮小最為明顯。在第2d差異較其他兩組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05或P＜0.01），第3d金黃散治療組感染區(qū)域面積較其他兩組均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異 （P＜0.01），而抗生素治療組與空白對(duì)照組比較差異亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.01）。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 感染區(qū)域面積 （χ±S，cm2）

2.4 金黃散酊劑對(duì)IL－1β、TNF－α表達(dá)的影響 三組治療后IL－1β、TNF－α均呈下降趨勢(shì)，其中金黃散治療組治療前后IL－1β、TNF－α低于其他兩組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05或P＜0.01）。而抗生素組與空白對(duì)照組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05）。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 金黃散酊劑對(duì)IL－1、TNF－α表達(dá)的影響 （pg／mL）

3 討論

隨著細(xì)菌耐藥性的不斷增強(qiáng)，如何在保證療效的基礎(chǔ)上盡量減少抗生素的使用成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)亟需解決的重要問(wèn)題之一。研究表明，部分清熱解毒中藥的藥理作用與抗炎有關(guān)，在聯(lián)合應(yīng)用時(shí)能夠提高其抗菌效價(jià)［1］。隨著中藥制劑在外用控制感染以及抗炎消腫方面等作用逐漸得到認(rèn)可，中藥及中成藥制劑逐漸成為外科控制感染和避免抗生素不合理應(yīng)用的重要力量。

如意黃散源于明·陳實(shí)功 《外科正宗》，稱之為 “瘡家良便方”。由姜黃、大黃、黃柏、蒼術(shù)等十味藥組成，具有清熱解毒，消腫止痛等功效，對(duì)于癰疽、發(fā)背、疔腫、跌撲損傷、丹毒等頑惡腫毒外用箍圍具有明顯療效，并作為復(fù)方成藥制劑為 《中華人民共和國(guó)藥典》收錄?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，如意金黃散具有增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬功能，提高血清溶菌酶含量，促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，降低毛細(xì)血管通透性的作用，從而使入侵機(jī)體的微生物得以清除，使炎癥及感染得以迅速緩解［2］。而以最大限度提取其有效成分，從而促進(jìn)局部吸收是提高療效的重要手段。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)無(wú)水乙醇萃取如意金黃散溶液所制金黃散酊劑，能夠溶解并充分吸收金黃散粉劑中的有效成分，并在局部范圍內(nèi)集中、長(zhǎng)久地形成一個(gè)促進(jìn)藥物的充分釋放的區(qū)域，大大增強(qiáng)了局部吸收效果，使得家兔皮膚早期感染能夠得到有效控制，感染區(qū)域迅速縮小。

TNF－α是由活化的單核巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、枯否氏細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞分泌的多肽分子，在創(chuàng)傷條件下主要由細(xì)菌內(nèi)毒素誘導(dǎo)合成［3］，是大量感染和非感染性炎癥早期出現(xiàn)的一種細(xì)胞因子，在激活的眾多細(xì)胞因子中起核心作用，是激活細(xì)胞因子級(jí)聯(lián)反應(yīng)的重要介質(zhì)［4］，在創(chuàng)傷早期明顯升高。IL－1β是由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子，主要作用于淋巴細(xì)胞的單核因子，具有廣泛的生物學(xué)活性，具有促炎、促凝、調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)等作用，在細(xì)菌感染時(shí)表達(dá)可明顯增加［5］。實(shí)驗(yàn)顯示，外用如意金黃散酊劑能夠迅速降低TNF－α及IL－1β等炎性因子的表達(dá)，將早期感染迅速控制在一個(gè)相對(duì)穩(wěn)定的范圍內(nèi)，從而防止感染進(jìn)一步擴(kuò)散造成對(duì)機(jī)體的打擊，有效縮短了感染時(shí)間。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，傳統(tǒng)中成藥制劑如意金黃散酊劑應(yīng)用于早期皮膚感染，能夠深入提取并保留使其有效成分，使其抗炎功效在原有基礎(chǔ)上進(jìn)一步增強(qiáng)，同時(shí)避免了抗菌藥物的不必要使用而造成的細(xì)菌耐藥等副作用，具有簡(jiǎn)便廉驗(yàn)的特點(diǎn)，值得推廣并進(jìn)一步深入研究。

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