紫英顆粒對(duì)慢性盆腔炎大鼠模型治療作用的研究

邱賽紅，尹胭脂，余 娜，曾小艷，李富元，孫必強(qiáng)

（1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長沙410208；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)2012級(jí)碩士研究生班，湖南 長沙410208；3.湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，湖南 株洲412012）

慢性盆腔炎指女性生殖器官、周圍結(jié)締組織及盆腔腹膜所發(fā)生的慢性炎癥。是育齡期婦女最常見的生殖器宮炎癥之一。20～49歲已婚育齡婦女中，其發(fā)病率為4.87%，約占婦科疾病的15%[1-2]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要以對(duì)癥治療和抗菌、抗炎為主。大量的資料表明，中醫(yī)藥對(duì)慢性盆腔炎的治療具有較好的療效，在緩解癥狀、清除病灶、控制病情發(fā)展等方面均表現(xiàn)出了良好的作用趨勢[3-4]。紫英顆粒為北京著名婦科專家柴松巖教授的臨床經(jīng)驗(yàn)方，由紫花地丁、蒲公英等9味藥物組成。初步的臨床觀察證實(shí)，該方對(duì)慢性盆腔炎的治療具有良好的療效。本文報(bào)告采用大鼠制備子宮內(nèi)膜炎癥模型后實(shí)驗(yàn)性治療的藥理作用觀察?，F(xiàn)將試驗(yàn)方法和結(jié)果報(bào)道如下。

1 實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 試驗(yàn)藥物與試劑 紫英顆粒干膏粉由長沙華源醫(yī)藥科技公司提供，相當(dāng)于生藥量5.045 g/g，批號(hào)：20060530；鹽酸左氧氟沙星片，重慶刻爾康制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：060501；白介素-6（IL-6）放射免疫試驗(yàn)盒，北京科美東雅生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20061025。

1.1.2 主要儀器 GC1500型γ-放射自動(dòng)免疫計(jì)數(shù)器（科大創(chuàng)新股份有限公司）；LEICA DM LB2型雙目顯微鏡（德國LEICA公司）；MIAS醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)（北京航空航天大學(xué)科學(xué)儀器廠）。

1.1.3 菌種及來源 大腸埃希菌、乙型溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌，均由湖南中醫(yī)藥大學(xué)微生物教研室臨床微生物檢驗(yàn)室從湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬一醫(yī)院門診婦科病人宮頸分泌物標(biāo)本中分離，經(jīng)鑒定確認(rèn)后用于實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)前用相應(yīng)培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)后稀釋至所需濃度。

1.1.4 動(dòng)物 成年SD雌性大鼠85只。購自上海西普爾—必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK(滬)2003-0002號(hào)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（湘）2003-0001號(hào)。

1.2 方法

1.2.1 動(dòng)物模型 參照文獻(xiàn)[5]方法，取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌，以常規(guī)方法增菌培養(yǎng)后，按2∶1∶1的比例混合成含菌濃度為3×109/mL供造模用。200～220 g雌性大鼠，除正常組外，其余以2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉。仰位固定，腹中線切口找到子宮。注射器抽取混合菌液0.2 mL，針頭刺入一側(cè)子宮，沿子宮壁劃拔后推入一半的菌液，再向前推進(jìn)后同法注入另一半菌液。完畢縫合腹腔。正常組動(dòng)物不做手術(shù)處理。假手術(shù)組只打開腹腔、暴露子宮，不進(jìn)行宮內(nèi)注射。

1.2.2 分組與給藥 造模后2周，將模型動(dòng)物隨機(jī)分為模型組、紫英顆粒高、中、低劑量組、左氧氟沙星組。分別給予紫英顆粒24、12、6 g/kg和左氧氟沙星80 mg/kg灌胃給藥。每天1次，連續(xù)4周。模型組、假手術(shù)組和正常組給服等體積蒸餾水。末次給藥后1 h，以2%戊巴比妥鈉麻醉大鼠后進(jìn)行相關(guān)檢測。

1.2.3 觀察指標(biāo) （1）子宮輸卵管的外觀及腫脹程度：肉眼觀察各動(dòng)物子宮的外觀和腫脹、粘連情況。取下左、右兩側(cè)子宮分別稱質(zhì)量。按下式計(jì)算各動(dòng)物子宮的腫脹度、腫脹率。

腫脹度=造模側(cè)子宮質(zhì)量-對(duì)照側(cè)子宮質(zhì)量

腫脹率=（造模側(cè)子宮質(zhì)量-對(duì)照側(cè)子宮質(zhì)量）/對(duì)照側(cè)子宮質(zhì)量×100%

（2）子宮組織IL-6測定 剪取造模側(cè)子宮一段，稱質(zhì)量后與生理鹽水按1∶9制成組織勻漿。勻漿經(jīng)4℃、3 000 r/min離心15 min，取上清液-15℃保存。按試劑盒要求用放免方法測定勻漿IL-6含量。（3）子宮組織病理學(xué)檢查 取造模側(cè)子宮約1 cm用4%甲醛固定。常規(guī)包埋、切片。HE后光鏡下觀察組織形態(tài)與結(jié)構(gòu)。參照文獻(xiàn)方法[6]，觀察子宮組織的上皮損傷、內(nèi)膜中炎細(xì)胞浸潤、充血水腫及成纖維細(xì)胞增生情況。按無“-”、輕度“+”、明顯“++”、嚴(yán)重“+++”分別記錄病變程度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 子宮組織炎癥腫脹情況

正常組和假手術(shù)組動(dòng)物子宮柔軟、平整。模型組動(dòng)物造模側(cè)子宮較對(duì)照側(cè)明顯增粗，部分形成包塊并與周圍組織粘連，漿膜面可見充血。質(zhì)量分析顯示造模側(cè)子宮均明顯大于未造模對(duì)照側(cè)。紫英顆粒和左氧氟沙星組造模側(cè)子宮的增粗、腫脹和充血程度均較模型組不同程度減輕，腫脹度與腫脹率與模型組比較均有顯著性差異。紫英顆粒的作用隨劑量加大而增強(qiáng)。見表1。

2.2 子宮組織IL-6含量測定

檢測顯示，造模動(dòng)物子宮組織內(nèi)IL-6水平較對(duì)照組明顯增加。紫英顆粒各組的IL-6水平均明顯降低，且作用較左氧氟沙星明顯。見表1。

2.3 子宮組織病理學(xué)檢查

光鏡下，模型組可見子宮上皮細(xì)胞變性壞死、脫落明顯，有較多的炎性細(xì)胞浸潤和充血水腫，成纖維細(xì)胞增生顯著，個(gè)別管腔內(nèi)還有積膿。紫英顆粒和左氧氟沙星組上述病變程度均減輕。12 g/kg以上劑量的紫英顆粒組較模型組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2～3。

表1 紫英顆粒對(duì)混合菌液致大鼠盆腔炎模型子宮炎癥的影響 （±s）

表1 紫英顆粒對(duì)混合菌液致大鼠盆腔炎模型子宮炎癥的影響 （±s）

注：與假手術(shù)組比較★★P＜0.01；與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01；與左氧氟沙星比較△P＜0.05，△△P＜0.01；以下表同。

組 別正常組假手術(shù)組模型組紫英顆粒高組紫英顆粒中組紫英顆粒低組左氧氟沙星組劑量（g/kg）n——24 12 6 0.08 10 11 12 12 12 12 12腫脹度0.02±0.01 0.02±0.01 0.20±0.07★★0.11±0.04**0.11±0.04**0.13±0.06*0.14±0.04*腫脹率（%）8.35±4.69 9.0±5.88 68.62±26.28★★36.13±13.07**38.40±13.07**45.43±23.91*47.69±16.74*IL-6(pg/mL)27.65±6.84 28.21±6.54 64.03±22.42★★39.49±14.87**△△42.08±17.79*△△49.67±12.51△60.09±12.27

表2 紫英顆粒對(duì)子宮組織病理學(xué)上皮、炎性細(xì)胞的影響（只）

表3 紫英顆粒對(duì)子宮組織病理學(xué)內(nèi)膜、成纖維細(xì)胞的影響（只）

3 討論

慢性盆腔炎的發(fā)病多為混合菌感染。且宮腔操作也是造成內(nèi)膜炎癥的常見原因之一。機(jī)械損傷加混合菌液感染的方法制備子宮內(nèi)膜炎模型比較接近臨床實(shí)際，已在相關(guān)研究中被證實(shí)穩(wěn)定和可靠[6]。故本文研究采用了該法制備病理模型。

中醫(yī)理論認(rèn)為，有關(guān)慢性盆腔炎相類疾病的病因及病機(jī)，不外寒、熱、濕、瘀、虛”[4，7-8]。柴松巖教授在總結(jié)多年治療慢性盆腔炎臨床經(jīng)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，結(jié)合《傅青主女科》關(guān)于“夫帶下俱是濕證”的論述，認(rèn)為慢性盆腔炎在癥狀明顯期的病理機(jī)制主要與熱、濕、瘀有關(guān)。由于濕、熱、瘀互結(jié)積于胞宮，致氣血失調(diào)、沖任受阻，故成帶下、腹痛等癥。治療宜清熱、化濕、祛瘀并舉。紫英顆粒即以此為原則組方。研究證實(shí)，紫英顆粒對(duì)子宮內(nèi)膜炎有較好的治療作用，可減輕模型大鼠的子宮腫脹，對(duì)子宮組織的病理學(xué)改變有明顯的改善。表明這種立法、組方的原則是非常有效的。

在慢性盆腔炎病變過程中，IL-6作為炎癥反應(yīng)的免疫效應(yīng)分子有著重要影響，在組織的炎性反應(yīng)中起著誘導(dǎo)和傳遞的作用[9]。研究顯示紫英顆?？山档妥訉m組織中IL-6的水平。我們在前期的研究報(bào)道中證實(shí)，紫英顆粒具有較廣譜的抑菌作用，對(duì)引起婦科炎癥的10種常見致病菌均有較好的抑制作用，且抑菌作用較穩(wěn)定[10]。故由此推測，紫英顆粒治療子宮內(nèi)膜炎有效的作用機(jī)制，有可能與具有較廣譜的抑菌作用及抑制子宮組織中炎性細(xì)胞因子IL-6的表達(dá)有關(guān)。

[1]張新國，李彥新，張曉娜.14 498例農(nóng)村已婚育齡婦女生殖道感染狀況分析[J].中國計(jì)劃生育雜志，2005，112（2）：123.

[2]張催蘭.慢性盆腔炎研究進(jìn)展[J].臨床醫(yī)學(xué)2011，31（3）：115-116.

[3]朱藹美.慢性盆腔炎的中醫(yī)藥治療進(jìn)展[J].中醫(yī)藥信息，2005，22（6）：14～15.

[4]劉 靜，高 慧.慢性盆腔炎的中醫(yī)藥治療進(jìn)展[J].承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2011，28（1）：48-50.

[5]聞 莉，張三元，李 莉，等.大鼠慢性盆腔炎模型的技術(shù)要求及模型特點(diǎn)[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2001，11（8）：484-486.

[6]張小麗，張靜云，陳瑞明，等.盆炎寧對(duì)混合菌液致大鼠慢性盆腔炎治療作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中藥藥理與臨床，2005，21（2）：37-39.

[7]李曉燕，程 涇.慢性子宮內(nèi)膜炎中西醫(yī)研究進(jìn)展[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，6(9)：154-156.

[8]孫英杰.中醫(yī)辨證治療慢性盆腔炎[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2005，23(6)：1 147-1 148.

[9]趙廣興，馬寶璋，袁家麟.慢性盆腔炎輸卵管病理與IL-2、IL-6的關(guān)系[J].遼寧中醫(yī)雜志，2003，30(9)：704-705.

[10]朱傳湘，邱賽紅，胡建中，等.紫英顆粒對(duì)慢性盆腔炎常見致病菌抑菌作用的研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2009，16（4）：39-41.