銀杏葉提取物對(duì)大鼠肺磷形細(xì)胞癌表達(dá)腫瘤壞死因子-α的影響

彭宗玉 張佩娟 趙瑞霞

銀杏葉提取物對(duì)大鼠肺磷形細(xì)胞癌表達(dá)腫瘤壞死因子-α的影響

彭宗玉 張佩娟 趙瑞霞

目的銀杏葉提取物對(duì)大鼠肺磷形細(xì)胞癌分泌和表達(dá)腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的影響。方法用大鼠的肺磷形細(xì)胞癌與不同濃度的銀杏葉提取物進(jìn)行培養(yǎng)，采用逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定方法分別檢測(cè)枯否細(xì)胞TNF-αmRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)。結(jié)果大鼠肺磷形細(xì)胞癌腫瘤壞死因子-α表達(dá)的分泌與銀杏葉提取物濃度的提高呈負(fù)相關(guān)。結(jié)論銀杏葉提取物可以改變大鼠肺磷形細(xì)胞癌TNF-α的表達(dá)，減少肺癌細(xì)胞對(duì)正常肺細(xì)胞的損害，發(fā)揮保護(hù)的作用。

銀杏葉提取物；腫瘤壞死因子-α；大鼠肺磷形細(xì)胞癌

調(diào)節(jié)肺磷形細(xì)胞癌分泌和表達(dá)腫瘤壞死因子-α，對(duì)抗肺癌細(xì)胞對(duì)正常肺細(xì)胞的損害[1]。以往文獻(xiàn)報(bào)告銀杏葉提取物(Ginkgo biloba extract,GBE)具有軟化血管、調(diào)節(jié)正常細(xì)胞的代謝，抗炎、抗氧化應(yīng)激的功能[2]。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖峭ㄟ^銀杏葉提取物作用大鼠肺磷形細(xì)胞癌，觀察隨著銀杏葉提取物濃度的改變，大鼠肺磷形細(xì)胞癌TNF-α表達(dá)的變化及對(duì)正常肺細(xì)胞的影響。

1 材料與方法

1.1 主要試劑銀杏葉提取物、RT-PCR試劑、引物。

1.2 主要儀器CO2培養(yǎng)箱、UVP，倒置相差顯微鏡，低溫離心機(jī)，各種電泳儀等。

1.3 細(xì)胞分離、培養(yǎng)與鑒定及實(shí)驗(yàn)分組成功的分離肺磷形細(xì)胞癌加入含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，接種于培養(yǎng)瓶2h后，洗去非貼壁細(xì)胞。24h后，培養(yǎng)的肺磷形細(xì)胞癌分別加入不同濃度的GBE(15，25，50)μg/ml共同培養(yǎng)24h。實(shí)驗(yàn)共分為四組（1組為對(duì)照組、2組為GBE15ug/ml、3組為GBE25ug/ml、4組為GBE50ug/ml）。

1.4 TNF-α的測(cè)定用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法和逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈反應(yīng)，檢測(cè)腫瘤壞死因子mRNA的分泌表達(dá)。收集各濃度組銀杏葉提取物與肺癌細(xì)胞的培養(yǎng)及對(duì)照組細(xì)胞，按各組細(xì)胞總mRNA提取，溶于無Rnase水中。根據(jù)RT-PCR試劑盒提供的說明書進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)。RT-PCR反應(yīng)產(chǎn)物電泳條帶用數(shù)字成像系統(tǒng)進(jìn)行分析和拍照。計(jì)算TNF-α產(chǎn)物的相對(duì)量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用單因素方差分析，以P＜0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度的GBE對(duì)肺磷形細(xì)胞癌細(xì)胞表達(dá)TNF-αmRNA的影響大鼠肺磷形細(xì)胞癌細(xì)胞TNF-αmRNA和蛋白的表達(dá)與銀杏葉提取物的濃度呈負(fù)相關(guān)，隨著GBE的濃度的增加，TNF-αmRNA表達(dá)逐漸減少，見圖1。

圖1 不同濃度的GBE對(duì)肺磷形細(xì)胞癌細(xì)胞表達(dá)TNF-αmRNA的影響

3 討論

TNF-α首先與一定時(shí)期的腫瘤細(xì)胞質(zhì)膜表現(xiàn)特異性受體結(jié)合，在細(xì)胞表面形成帽狀聚集而入細(xì)胞，進(jìn)入細(xì)胞后沿微管移動(dòng)與溶酶體結(jié)合，在TNF作用下溶酶體破裂，釋放出溶酶體酶致使細(xì)胞自溶，TNF-α可以使中性粒細(xì)胞聚集粘附于內(nèi)皮細(xì)胞，引起肺損傷。同時(shí)又可激活Caspase-8，二者共同作用進(jìn)一步加重肺內(nèi)皮細(xì)胞損傷。二者協(xié)同促使機(jī)體產(chǎn)生更多的氧自由基及炎性介質(zhì)，其代謝產(chǎn)物大量堆積在肺泡內(nèi)皮細(xì)胞上，導(dǎo)致肺組織結(jié)構(gòu)改變和肺功能衰竭[1-5]。銀杏葉提取物具有斂肺平喘、活血化瘀，促進(jìn)血液循環(huán)，具有很強(qiáng)的清除自由基和抗氧化作用，銀杏葉中的黃甙、氨基酸和氨基酸合成膠原蛋白成份對(duì)人體美容，抑制黑色素生長(zhǎng)，保持皮膚光澤與彈性起著不小的作用[6]。本實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)肺磷形細(xì)胞癌細(xì)胞TNF-α蛋白的表達(dá)分泌與銀杏葉提取物的濃度呈負(fù)相關(guān)性，隨著濃度的增加，肺磷形細(xì)胞癌細(xì)胞TNF-αmRNA及其蛋白質(zhì)表達(dá)逐漸減少，因此可推測(cè)銀杏葉提取物抑制肺磷形細(xì)胞癌細(xì)胞釋放TNF-α的分泌與表達(dá)，減輕TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷，對(duì)正常肺細(xì)胞表現(xiàn)出較強(qiáng)的保護(hù)作用。

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R734.2

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1673-5846（2013）01-0036-02

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