腹瀉康片對(duì)小鼠體內(nèi)抑菌作用的實(shí)驗(yàn)研究

嚴(yán) 楓 鄧義德 楊 華 廣西壯族自治區(qū)岑溪市中醫(yī)院（岑溪543200）

隨著社會(huì)生活節(jié)奏的加快，飲食失調(diào)和不潔引起胃腸功能紊亂，導(dǎo)致感染性腹瀉的現(xiàn)象日益增加，目前臨床采用抗生素治療感染性腹瀉比較普遍，不合理使用、濫用抗生素導(dǎo)致耐藥菌株不斷增多，治療難度加大［1，2］，而運(yùn)用中藥治療感染性腹瀉可減少抗生素使用量，一定程度上能緩解抗生素耐藥問題。腹瀉康片處方由秦皮、木香等四味藥材組成，源自臨床應(yīng)用多年的方劑，對(duì)感染性腹瀉有很好的治療效果，具有清熱燥濕，行氣止痛，澀腸止瀉之功效。主要用于感染性腹瀉，癥見瀉下急迫或?yàn)a下不爽，大便色黃穢臭，肛門灼熱。我們對(duì)腹瀉康片藥效學(xué)進(jìn)行了系統(tǒng)的研究，現(xiàn)將腹瀉康片對(duì)小鼠體內(nèi)抑菌作用的實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材 料 1.1 藥 物 腹瀉康片干浸膏粉：由廣西岑溪市中醫(yī)院自制，批號(hào)20111012，常溫密封保存，含量：1g干浸膏相當(dāng)于3.6g生藥。腸康片：張家界元爾藥業(yè)有限公司，批號(hào)：20100802。諾氟沙星：哈藥集團(tuán)三精千鶴制藥有限公司，批號(hào)20110402。

1.2 菌 種 大腸桿菌（ATCC44136）、乙型副傷寒桿菌（H901）、痢疾桿菌為廣西醫(yī)科大學(xué)微生物學(xué)教研室提供。

1.3 動(dòng) 物 SPF級(jí)昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22g，廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，合格證號(hào)：SYXK桂2009－0004。

1.4 試 劑 無(wú)菌水：廣西岑溪市中醫(yī)院自制。普通肉湯瓊脂培養(yǎng)基：杭州微生物試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20100916212。普通肉湯培養(yǎng)基：杭州天和微生物試劑有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20100801。

1.5 儀 器 無(wú)菌操作臺(tái)，蘇州億達(dá)凈化實(shí)驗(yàn)室設(shè)備有限公司；電熱恒溫培養(yǎng)箱，廈門醫(yī)療電子儀器廠；手提式壓力蒸氣滅菌鍋，北京市永光明醫(yī)療儀器廠；電子天平，德國(guó)賽多利斯。

2 方 法 2.1 配制及給藥 受試藥液配制：取28.8g腹瀉康片干浸膏粉，加蒸餾水?dāng)嚢杈鶆蛑?40mL，混懸液濃度為0.432g生藥／mL，即高劑量組給藥濃度。取高劑量濃度依次稀釋50%的中、低劑量組給藥濃度（0.216g生藥／mL、0.108 g生藥／mL）。

給藥：腹瀉康片組給藥體積為20mL／kg，高中低三組給藥劑量分別為8.64g生藥／kg、4.32g生藥／kg、2.16g生藥／kg。腸康片組：0.62g成藥／kg。諾氟沙星組：0.16g／kg。

2.2 最小致死量（mLD）測(cè)定 感染菌的制備：按無(wú)菌法操作，從制備好的菌液中采用麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)法制成分別為大腸桿菌1013、1012、1011、1010、109cfu／mL；乙型副傷寒桿菌1011、1010、109、108、107cfu／mL；痢疾桿菌1010、109、108、107、106cfu／mL不同濃度菌液。

動(dòng)物致死試驗(yàn)：取SPF級(jí)昆明種小鼠150只先按性別分層，苦味酸標(biāo)記編號(hào)，稱重，隨機(jī)分成15組，每組10只，分別腹腔注射不同濃度的細(xì)菌溶液（大腸桿菌、乙型副傷寒桿菌、痢疾桿菌）（0.5mL／只），觀察小鼠在7d內(nèi)的死亡情況，找出一個(gè)最小致死量（mLD），即感染后引起小鼠100%死亡的菌液濃度。

2.3 對(duì)細(xì)菌感染致死小鼠的保護(hù)作用 取SPF級(jí)昆明種小鼠190只先按性別分層，苦味酸標(biāo)記編號(hào)，稱重，隨機(jī)分成19組，每組10只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組，大腸桿菌：模型組、腸康片、諾氟沙星及腹瀉康片高、中、低3個(gè)不同劑量共6組；乙型副傷寒桿菌：模型組、腸康片、諾氟沙星及腹瀉康片高、中、低3個(gè)不同劑量共6組；痢疾桿菌：模型組、腸康片、諾氟沙星及腹瀉康片高、中、低3個(gè)不同劑量共6組；每組動(dòng)物10只。除正常組外，其余各組小鼠置于造模室（溫度30±2℃，相對(duì)濕度80－90%）5天，第6天移出置于屏障環(huán)境（室溫20±2℃，相對(duì)濕度65±5%）。禁食不禁水12h后，除正常組外，其余各組每鼠腹腔注射mLD細(xì)菌0.5mL，除正常組和模型組灌胃蒸餾水外，其他組分別于1、12h給小鼠灌胃給藥1次（灌胃體積：20mL／kg）。以后每隔24h以同樣的方法灌胃7d，并觀察、記錄各組動(dòng)物的存活情況，計(jì)算各組保護(hù)率，第8天處死所有動(dòng)物。

保護(hù)率＝每組存活動(dòng)物數(shù)÷每組動(dòng)物總數(shù)×100%

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS16.0軟件包統(tǒng)計(jì)，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析，多組間比較采用LSD檢驗(yàn)，多組與同一組比較用Dunnett法檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)。

3 結(jié) 果 根據(jù)mLD試驗(yàn)結(jié)果，大腸桿菌對(duì)小鼠的最小致死量mLD為1×1012cfu／mL；乙型副傷寒桿菌對(duì)小鼠的最小致死量mLD為1×109cfu／mL；痢疾桿菌對(duì)小鼠的最小致死量mLD為1×109cfu／mL。結(jié)果見表1～3。

表1 大腸桿菌對(duì)小鼠最小致死量（mLD）的測(cè)定結(jié)果

表2 乙型副傷寒桿菌對(duì)小鼠最小致死量（mLD）的測(cè)定結(jié)果

表3 痢疾桿菌對(duì)小鼠最小致死量（mLD）的測(cè)定結(jié)果

腹瀉康片對(duì)感染小鼠模型保護(hù)率影響的結(jié)果：模型組與空白組相比，保護(hù)率明顯降低差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；諾氟沙星組、各藥物組與模型組相比，保護(hù)率明顯升高差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；大腸桿菌感染實(shí)驗(yàn)中腹瀉康高劑量組、腹瀉康中劑量組與腸康片組相比，保護(hù)率明顯升高（P＜0.01），腹瀉康低劑量組與腸康片組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；乙型副傷寒感染實(shí)驗(yàn)中，腹瀉康高劑量組與腸康片組比較，保護(hù)率明顯升高（P＜0.05），低劑量和中劑量與腸康片比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；痢疾桿菌感染實(shí)驗(yàn)中，腹瀉康高劑量組和腸康片組比較，保護(hù)率明顯升高差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），腹瀉康中劑量組和腸康片組比較，保護(hù)率明顯降低明顯升高差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），低劑量組與腸康片組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表4。

表4 腹瀉康片對(duì)3種不同細(xì)菌感染小鼠模型保護(hù)率的影響（n＝10）

表5 腹瀉康片對(duì)3種不同細(xì)菌感染小鼠模型存活時(shí)間的影響（±s，n＝10）

表5 腹瀉康片對(duì)3種不同細(xì)菌感染小鼠模型存活時(shí)間的影響（±s，n＝10）

注：與空白組比△P＜0.01；與模型組比◇P＜0.01；與腸康片組比▲P＜0.05，◆P＜0.01

感染小鼠存活天數(shù)組 別7 7 7模型組 0.4±0.7△ 0.7±1.1△ 0.9±1.0△腸康片組 3.1±3.2◇ 3.9±3.3◇ 3.1±3.2◇諾氟沙星組 7◇ 5.7±2.8◇ 6.3±2.1◇腹瀉康低劑量組 3.8±3.1◇ 2.9±2.8◇ 3.8±3.2◇腹瀉康中劑量組 5.1±3.1◇◆ 4.3±2.8◇ 4.8±2.8◇◆腹瀉康高劑量組 5.8±2.6◇◆ 5.4±2.6◇▲ 4.9±2.7大腸桿菌 乙型副傷寒桿菌 痢疾桿菌空白組◇◆

腹瀉康片對(duì)3種不同細(xì)菌感染小鼠模型存活時(shí)間影響的結(jié)果：與空白相比，感染致死量大腸桿菌、乙型副傷寒桿菌、痢疾桿菌的小鼠模型小鼠存活時(shí)間顯著縮短差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組相比，諾氟沙星組和各藥物組小鼠存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；大腸桿菌致死量感染實(shí)驗(yàn)中，腹瀉康高、中劑量組與腸康片組比小鼠存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），腹瀉康低劑量組與腸康片組比較無(wú)差異（P＞0.05）；乙型副傷寒桿菌致死量感染實(shí)驗(yàn)中，腹瀉康高劑量組與腸康片組比小鼠存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），中劑量組與腸康片組比較無(wú)差異（P＞0.05）；痢疾桿菌致死量感染實(shí)驗(yàn)中，腹瀉康高、中劑量組與腸康片組比小鼠存活時(shí)間明顯延長(zhǎng)（P＜0.01），腹瀉康低劑量組與腸康片組比較無(wú)差異（P＞0.05）；腹瀉康片各組之間，隨著劑量增加感染小鼠存活時(shí)間延長(zhǎng)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果見表5。

4 討 論 感染性腹瀉是由多種病原微生物及其產(chǎn)物引起的以腹瀉為主要表現(xiàn)的腸道疾病，為當(dāng)今全球重要的公共衛(wèi)生問題之一［3－5］。本方源自臨床用于治療感染性腹瀉的經(jīng)驗(yàn)方，方中君藥為秦皮，文獻(xiàn)也有報(bào)道秦皮煎劑對(duì)痢疾桿菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌均有抑制作用：秦皮甲素、秦皮乙素、秦皮苷均有明顯抑菌作用［6－7］。體外試驗(yàn)表明，秦皮對(duì)金黃色葡萄球菌、福氏痢疾桿菌、宋內(nèi)氏痢疾桿菌有顯著的抑制作用，對(duì)傷寒桿菌、副傷寒桿菌也有一定程度的敏感性［8－10］。秦皮體內(nèi)抗菌試驗(yàn)顯示，秦皮可降低由傷寒桿菌引起的小鼠急性腹腔感染的死亡率［11］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，腹瀉康片低、中、高3個(gè)不同劑量均可延長(zhǎng)大腸桿菌、乙型副傷寒桿菌、痢疾桿菌感染小鼠的存活時(shí)間和減少感染小鼠的死亡率，與感染模型組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。腹瀉康高劑量組對(duì)感染大腸桿菌和痢疾桿菌小鼠模型保護(hù)率與腸康片組比，保護(hù)率顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），腹瀉康高劑量組對(duì)感染乙型副傷寒桿菌小鼠模型保護(hù)率與腸康片組比，保護(hù)率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果提示腹瀉康片對(duì)大腸桿菌、乙型副傷寒桿菌、痢疾桿菌感染小鼠具有一定的保護(hù)作用，有望開發(fā)成治療感染性腹瀉的中藥新藥。

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