產(chǎn)單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌致病機(jī)制的研究進(jìn)展

薩仁高娃，胡文忠 ，姜愛麗，馬 杰，3，馮 可，4

(1.大連工業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧大連116034;2.大連民族學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，遼寧大連116600;3.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，甘肅蘭州730070;4.大連理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院，遼寧大連116024)

李斯特菌(Listeria)是一種典型的胞內(nèi)寄生的革蘭氏陽(yáng)性短桿菌，共分為2個(gè)群，7個(gè)種。第一群包括產(chǎn)單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌(L.monocytogenes，LM)、伊氏李斯特菌(L.ivanovii)、無(wú)害李斯特菌(L.innocua，又名英洛克李斯特菌)、韋氏李斯特菌(L.welshmei)及西爾李斯特菌(Lseeligeri);第二群為較少見的格氏李斯特菌(L.grayi)和莫氏李斯特菌(L.murrayi)［1］。其中產(chǎn)單核細(xì)胞增生性李斯特氏菌(簡(jiǎn)稱單增李斯特菌，LM)被認(rèn)為是引起動(dòng)物和人類李斯特菌病的主要致病菌［2］。李斯特菌病臨床表現(xiàn)為人和動(dòng)物腦膜炎、敗血癥及孕婦流產(chǎn)、熱性胃腸炎等，臨床死亡率高［3］。該菌廣泛存在于土壤、動(dòng)物、水產(chǎn)品等中，能在高鹽、低溫、長(zhǎng)時(shí)間干燥、以及pH5.6～9.8等多種環(huán)境條件下生存和繁殖，主要通過(guò)食品(如奶及奶制品、蔬菜、水產(chǎn)品、肉制品等)傳播。20世紀(jì)80年代以來(lái)，LM在加拿大、瑞士、美國(guó)、英國(guó)、法國(guó)等國(guó)家曾多次發(fā)生流行或暴發(fā)流行;我國(guó)各地食品監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示LM污染在食品中普遍存在，并在云南、福建、浙江等省還曾報(bào)道單增李斯特菌(病)在畜禽和人間引起暴發(fā)［4-6］。

1 生物學(xué)特性

1.1 形態(tài)與染色［7］

LM為兩端鈍圓，稍彎曲的小桿菌，大小約為(0.4～0.5)μm ×(0.5～0.2)μm，有時(shí)呈弧形。多單在，有時(shí)呈“V”字型或柵狀排列。粗糙型(R)菌落中的細(xì)菌呈長(zhǎng)絲狀，長(zhǎng)達(dá)50～100μm。在20～25℃下可形成4根周身鞭毛，能運(yùn)動(dòng);在37℃下可形成較少甚至1根鞭毛。

此菌無(wú)莢膜，無(wú)芽孢。革蘭氏染色陽(yáng)性，陳舊培養(yǎng)物有時(shí)可脫色為陰性。常呈兩極染色，無(wú)抗酸性。剛分離出來(lái)的細(xì)菌具有多形性傾向，有時(shí)誤認(rèn)為棒狀桿菌和鏈球菌。在感染動(dòng)物的組織內(nèi)，呈球桿狀。

1.2 培養(yǎng)特性

LM為需氧及兼性厭氧，生長(zhǎng)溫度為1～45℃，最適溫度為30～37℃。本菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上36℃培養(yǎng)24h呈細(xì)小、半透明、微帶珠光的露水樣菌落，直徑約0.2～0.4mm，在斜射光下，菌落呈典型的藍(lán)綠色光澤。在血平板上36℃培養(yǎng)24～96h，菌落呈β溶血［8］。在0.6%酵母浸膏胰酪大豆瓊脂(TSA YE)和改良Mc Bride(MMA)瓊脂上，用45℃角入射光照射菌落，通過(guò)解剖經(jīng)垂直觀察，菌落呈藍(lán)色、灰色或藍(lán)灰色［7］。于37℃在半固體培養(yǎng)基中穿刺培養(yǎng)24h，可看到沿穿刺線呈云霧狀，隨后緩慢擴(kuò)散，在培養(yǎng)基表面下3～5mm處呈現(xiàn)密集的傘狀［9］。

1.3 生化反應(yīng)

由于菌株不同，糖發(fā)酵結(jié)果有差別。本菌一般可分解葡萄糖及(水)楊苷，37℃ 24h時(shí)產(chǎn)酸;對(duì)伯膠糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、鼠李糖、松甜糖、糊精、馬栗苷、山梨醇及甘油等糖類，于3～10d產(chǎn)酸不發(fā)酵;對(duì)棉實(shí)糖、肌醇、衛(wèi)矛醇、側(cè)金盞花醇及甘露醇等則不發(fā)酵。不利用枸椽酸鹽，40%膽汁不溶解，吲哚、硫化氫、尿素、明膠液化、硝酸鹽還原、賴氨酸和鳥氨酸均陰性。VP、甲基紅和精氨酸雙水解陽(yáng)性［10］。陳倩等［11］用VITEK對(duì)LM進(jìn)行系統(tǒng)的生化鑒定，結(jié)果顯示蛋白胨、桿菌肽、奧普托欽、6%NaCl、10%膽汁、七葉苷、紅四氮唑、右旋葡萄糖、水楊素、海藻糖和纖維二糖為陽(yáng)性;半纖維素酶、40%膽汁、精氨酸、尿素、新生霉素、乳糖、甘露醇、棉子糖、山梨醇、蔗糖、阿拉伯糖、丙酮酸、淀粉、菊糖、蜜二糖、松三糖、核糖、木糖為陰性。

1.4 抵抗力

LM可在較極端的環(huán)境中生長(zhǎng)和存活。此菌對(duì)熱的抵抗力較弱，60℃ 30min、80℃ 1min即可全部滅活。對(duì)低溫有較強(qiáng)的耐受性，-20℃低溫仍可部分存活，并可抵抗反復(fù)冷凍［12］。酸堿對(duì)該菌具有較強(qiáng)的抑制作用，pH4.5～6.5生長(zhǎng)活躍［13］，最適宜生長(zhǎng)的 pH是 5.5［13-14］，pH4.0 以下和 pH9.0 以上均不能生長(zhǎng)［12］。對(duì)NaCl的抵抗力強(qiáng)，在含1%～4%NaCl的TSB-YE肉湯中生長(zhǎng)良好;在含8%～12%NaCl的TSB-YE肉湯中生長(zhǎng)停滯;在含16%～20%NaCl的TSB-YE肉湯中菌數(shù)有所下降，但仍有部分殘存。對(duì)化學(xué)殺菌劑及紫外線照射均較敏感:75%酒精30min、1‰新潔爾滅30min、1‰高錳酸鉀15min、紫外線照射30min，均可全部殺滅該菌［12］。超高壓協(xié)同溫度處理可以控制LM的增值，孫新生等［15］建立了超高壓協(xié)同溫度處理煙熏火腿中單增李斯特菌生長(zhǎng)模型，結(jié)果表明，超高壓協(xié)同處理的溫度增高顯著延長(zhǎng)了單增李斯特菌在煙熏火腿修復(fù)生長(zhǎng)的延滯期，接種106cfu/g單增李斯特菌的煙熏火腿在40℃協(xié)同600MPa處理5min后，可使產(chǎn)品在保質(zhì)期內(nèi)計(jì)數(shù)時(shí)低于檢測(cè)線。LM對(duì)慶大霉素、萬(wàn)古霉素、卡那霉素、頭孢噻吩、頭飽唑啉、諾氟沙星、氧氟沙星、紅霉素、四環(huán)素、氯霉素敏感;對(duì)依諾沙星和呋喃妥因耐藥［16］。

1.5 血清型

根據(jù)菌體(O)抗原和鞭毛(H)抗原，LM分為16個(gè)血清型:1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4ab、4b、4c、4d、4e、5、6a、6b 和 7。抗原結(jié)構(gòu)與毒力無(wú)關(guān)，對(duì)人致病的主要為血清型1/2a、1/2b、4b，占全球本病病例約 90%［17-19］。

2 毒力因子

LM是典型的胞內(nèi)寄生菌，不僅可以在吞噬細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)，也能在上皮細(xì)胞和肝細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)?？梢酝ㄟ^(guò)損傷的黏膜經(jīng)神經(jīng)末梢的鞘膜侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)。本菌編碼與胞內(nèi)寄生生活循環(huán)有關(guān)的毒力基因有2簇，稱為李斯特菌毒力島1(LIPI-1)和李斯特菌毒力島2(LIPI-2)。LIPI-1有6個(gè)基因，兩側(cè)分別為prs和ldh位點(diǎn)，從prs下游開始，依次為轉(zhuǎn)錄活化因子編碼基因(prfA)、-(plcA)、-(hly)、-(mpl)、-(actA)、-(plcB)。LIPI-2又稱為內(nèi)化素小島，內(nèi)化素是指一個(gè)富含亮氨酸重復(fù)序列的蛋白質(zhì)家族，分為2個(gè)亞族，亞族1的代表是由inlAB基因編碼的inlA和inlB多肽，亞族2是由相對(duì)分子質(zhì)量較小(25000～30000)的蛋白質(zhì)組成，原形來(lái)自單增李斯特菌的 inlC［20］。

2.1 李斯特菌溶血素(Listeriolysion O，LLO)

LM的毒力基因有很多種，其中具有特異性的毒力基因是溶血素基因(Hemolytic factor gene，hly)，hly基因可編碼LM的溶血素O(LLO)，它的分子量為58ku，屬于膽固醇依賴細(xì)胞溶素家族，參與LM一級(jí)和次級(jí)吞噬小體的逃離［21］。1944年，Harvey等首次報(bào)道了LM可產(chǎn)生溶血素，隨后人們又對(duì)LLO進(jìn)行了諸多方面研究。LLO是LM主要的致病因子，促進(jìn)菌體進(jìn)入宿主胞液［22］，是細(xì)菌得以在胞液內(nèi)增殖的先決條件，它的缺失將會(huì)導(dǎo)致細(xì)菌毒力的全部喪失。目前的研究表明，LLO是一個(gè)多功能毒力因子，能引起宿主細(xì)胞多種反應(yīng)，如細(xì)胞增殖、黏膜細(xì)胞外滲作用、巨噬細(xì)胞中細(xì)胞因子的表達(dá)、樹突狀細(xì)胞的凋亡、磷脂代謝及引起機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)等［23-24］。目前對(duì)hly基因研究很多，由于該基因是LM的特異性毒力基因，因此，可選擇該基因的合適片段建立PCR檢測(cè)方法和核酸探針檢測(cè)方法，可特異性檢測(cè)LM。

2.2 肌動(dòng)蛋白聚集因子(ActA)

作為一種細(xì)胞內(nèi)寄生病原菌，LM進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)中后快速?gòu)?fù)制并表達(dá)一些膜相關(guān)蛋白，這需要基于宿主細(xì)胞肌動(dòng)蛋白的活動(dòng)，并將之傳播到鄰近細(xì)胞。actA基因編碼合成菌體肌動(dòng)蛋白聚集因子ActA，表面蛋白ActA通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞肌動(dòng)蛋白分子的聚合作用促使細(xì)菌在細(xì)胞與細(xì)胞之間的傳遞，同時(shí)也與細(xì)菌被宿主細(xì)胞內(nèi)化有關(guān)［25］。ActA依賴宿主細(xì)胞的細(xì)胞支架產(chǎn)生肌動(dòng)蛋白聚集和聚合物，該聚合物在細(xì)菌的菌體尾部進(jìn)行聚集，而單一的菌體蛋白就足以引起肌動(dòng)蛋白聚集并形成聚合物，并為細(xì)菌提供動(dòng)力。當(dāng)ActA被吸附到細(xì)菌菌體表面后，在誘導(dǎo)期形成ActA細(xì)胞骨架。細(xì)菌如果依賴了ActA后，相比野毒株而言其雖然也可以在胎盤中存活，但是感染鄰近細(xì)胞的能力大為減弱［26］。ActA缺失可導(dǎo)致毒力降低。殷月蘭等［27］成功構(gòu)建了毒力因子 ActA和PC-PLC雙缺失的突變株，結(jié)果顯示，突變株的毒力顯著降低，對(duì)小鼠半數(shù)致死劑量比野生型菌株提高很多。Dussurget等［28］研究顯示，由于ActA缺失突變株的硫酸乙酰肝素識(shí)別功能改變，從而導(dǎo)致對(duì)鼠巨噬細(xì)胞IC-21和中國(guó)蒼鼠卵巢上皮細(xì)胞的黏附和侵襲力顯著降低。

2.3 轉(zhuǎn)錄活化因子(PrfA)

PrfA屬于細(xì)菌轉(zhuǎn)錄激活因子，積極調(diào)節(jié)大多數(shù)已知的LM毒力基因［29］。PrfA調(diào)節(jié)產(chǎn)物包括細(xì)胞表面蛋白，其參與宿主細(xì)胞侵入和細(xì)胞與細(xì)胞間的播散機(jī)制，同時(shí)分泌細(xì)胞膜破壞因子并介導(dǎo)細(xì)菌從細(xì)胞泡的逸出。有證據(jù)表明PrfA結(jié)合多種環(huán)境信號(hào)依照LM的特別需要來(lái)調(diào)節(jié)毒力基因的表達(dá)。Lindback T等［30］人對(duì)從魚肉加工廠分離出的非溶血性的LM菌株測(cè)序prfA基因，發(fā)現(xiàn)有7bp的基因可阻斷prfA蛋白，但將此菌株注射到小鼠腹腔，致死率達(dá)到60%，證明這種阻斷是可逆的。PrfA由233個(gè)氨基酸組成，以活性和非活性兩種形式存在，可能通過(guò)協(xié)同因子將信號(hào)傳導(dǎo)給PrfA轉(zhuǎn)錄系統(tǒng)，使其由一種形式轉(zhuǎn)變成另一種形式。PrfA能夠特異性地識(shí)別被調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游41bp處的回文結(jié)構(gòu)，其調(diào)節(jié)效應(yīng)強(qiáng)弱與回文結(jié)構(gòu)對(duì)稱互補(bǔ)程度有關(guān)［13］。

2.4 磷脂酶C(phospholipase C，PLC)

LM能產(chǎn)生兩種磷脂酶C:磷脂酞肌醇磷脂酶(phosphatidylinositol phospholipase C，PI-PLC)和磷脂酞膽堿磷脂酶C(phosphatidylcholin phospholipase C，PC-PLC)。PI-PLC由plcA基因編碼，PC-PLC由plcB基因編碼。PI-PLC系以活化的形式合成，而PC-PLC則先以非活化的前肽被分泌出來(lái)，然后在胞外由mpl的基因產(chǎn)物Mpl蛋白酶加工。PI-PLC可輔助細(xì)菌逸出初級(jí)吞噬體，而細(xì)菌在細(xì)胞與細(xì)胞之間的擴(kuò)散過(guò)程中，PC-PLC則表現(xiàn)出一定的活性作用［31］。Angelika 等［32］證明，PC-PLC 的活性除了對(duì)在人類上皮細(xì)胞中初級(jí)吞噬體的溶解是必需的，而且對(duì)細(xì)胞與細(xì)胞之間的擴(kuò)散也是必需的。在李斯特菌屬中，只有單增李斯特菌和綿羊李斯特菌分泌PI-PLC?？梢岳胮lcA基因通過(guò)PCR反應(yīng)特異地檢測(cè)出 LM，Rawool針對(duì) plcA基因特異地檢測(cè)出了 LM［33］。

2.5 細(xì)胞壁水解酶(P60)

侵襲蛋白相關(guān)基因(Invasion associated protein gene，iap)也是一種毒力基因可編碼P60蛋白，它是細(xì)胞外蛋白，分子量為60×103，由484個(gè)氨基酸殘基組成，具有細(xì)胞水解酶和酰胺酶活性。它與細(xì)菌侵入成纖維細(xì)胞有關(guān)，突變株毒力顯著下降，可能的原因是突變株在細(xì)胞間擴(kuò)散的能力下降了。iap基因的兩端為保守區(qū)域，中間為可變區(qū)域。P60介導(dǎo)李斯特菌侵襲入非專職吞噬細(xì)胞，能調(diào)整宿主細(xì)胞阻止LM侵染的能力［34］。根據(jù)iap基因建立PCR檢測(cè)方法和ELISA等方法可作為李斯特氏菌屬的特異性檢測(cè)。Yu等［35］構(gòu)建了兩個(gè)單克隆抗體:識(shí)別LM的P60和識(shí)別李斯特菌屬的P6017，并依據(jù)此建立了ELISA系統(tǒng)鑒定LM和李斯特菌屬。

2.6 表面蛋白104(Surface protein 104，P104)

LM表面蛋白P104已被證實(shí)對(duì)于腸道細(xì)胞的黏附非常重要［36］。LM的生長(zhǎng)條件如溫度、pH以及鐵的獲取可以影響其某些毒力因子的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)，a.LM雖可在較低的溫度(4～25℃)下生長(zhǎng)繁殖，但LLO的產(chǎn)生減少甚至不產(chǎn)生，然而將LM放置在37℃下僅需2h，其LLO的表達(dá)水平既可恢復(fù)正常;當(dāng)溫度提高至56℃ 20min時(shí)，LLO的活性減弱，LM對(duì)鼠的致病性也隨之降低;盡管LM可生長(zhǎng)在較高的溫度下(42℃)增加黏附蛋白的表達(dá)，但這與LM毒力的增強(qiáng)并不完全一致，因?yàn)椋瑢?duì)于LM的黏附和感染宿主細(xì)胞來(lái)說(shuō)，所需的黏附分子相對(duì)很少;b.當(dāng)LM在pH4.5～4.9的環(huán)境中，其 LLO的產(chǎn)生減少，對(duì)Caco-2培養(yǎng)細(xì)胞的侵襲性也會(huì)減弱，酸適應(yīng)的LM比非酸刺激的LM更能感染Caco-2細(xì)胞和巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞，并在其中生長(zhǎng)繁殖;培養(yǎng)LM于pH3.5下，可以獲得耐酸的LM，它對(duì)鼠有較強(qiáng)的毒力，降低小鼠游離的中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的免疫作用［37］;c.在富含鐵的介質(zhì)中，LM可通過(guò)增加內(nèi)化素基因的表達(dá)來(lái)增強(qiáng)對(duì)Caco-2細(xì)胞的侵襲性;此外鐵的獲取也可影響ActA 蛋白的表達(dá)［38］。

另外，LM黏附蛋白(LAP)位于細(xì)菌表面和胞漿中，研究發(fā)現(xiàn)LAP缺陷性菌株對(duì)小腸的黏附較野生型明顯降低［39］，推測(cè)LAP在LM腸道感染階段可能起重要作用［40］。

2.7 內(nèi)化素(Internalis，Inl)

內(nèi)化素為內(nèi)化素家族的一群蛋白質(zhì)，包括InlA、InlB、InlC到InlH，其中InlA和InlB為最早鑒定出的與細(xì)菌侵襲相關(guān)的毒力因子［28］，為 LM 所特有［13］，由轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子PrfA調(diào)節(jié)［41］。LM可直接進(jìn)入吞噬細(xì)胞或通過(guò)內(nèi)化素介導(dǎo)進(jìn)入宿主細(xì)胞的吞噬囊泡，并能溶解宿主細(xì)胞的吞噬泡膜，逃離吞噬體，進(jìn)入胞漿，在胞漿中復(fù)制繁殖及在細(xì)胞間傳遞。InlA有800個(gè)氨基酸，而InlB具有630個(gè)氨基酸。InlA是被認(rèn)定的第一個(gè)LM表面蛋白，對(duì)于LM穿入非吞噬細(xì)胞如上皮細(xì)胞來(lái)說(shuō)是必需的，InlB在對(duì)肝細(xì)胞的侵襲過(guò)程中起著重要的作用，即InlA和InlB是LM被非吞噬細(xì)胞內(nèi)化所必需。另外，小的分泌性亞族在體內(nèi)對(duì)傳染過(guò)程有明顯影響。為了解Inl家族之間的關(guān)系，Bergman 等［42］構(gòu)建了inlA、inlB、inlC、inlE、inlG、inlH的突變株，InlB依賴的內(nèi)化不需要其他內(nèi)化素的存在，而 InlA在缺少 InlB時(shí)內(nèi)化要求 InlC和InlGHE的輔助，缺失inlGHE基因簇或者其中的任何一個(gè)，LM對(duì)微脈管內(nèi)皮細(xì)胞HBMEC細(xì)胞系的內(nèi)化能力都增強(qiáng)了2～4倍，缺少WB將完全不能侵襲HB-MEC，把這些相應(yīng)的Inl突變株通過(guò)顯微注射進(jìn)Caco-2細(xì)胞顯示，這些內(nèi)化素似乎沒(méi)有一個(gè)對(duì)LM的細(xì)胞間傳播是必要的。inlB基因編碼合成InlB，InlB失活會(huì)使單增李斯特菌毒力嚴(yán)重下降。Kaclikova［43］針對(duì) inlB基因特異地?cái)U(kuò)增出 343bp片段，該片段成功地應(yīng)用到了各種人工污染的食品中。

近年來(lái)，結(jié)合分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、結(jié)構(gòu)生物學(xué)和組織病理學(xué)等方面的技術(shù)，對(duì)LM的毒力因子已有比較深入的了解。一些新的毒力因子不斷被發(fā)現(xiàn)，如重要性僅次于PrfA的VirR毒力調(diào)控因子、膽酸鹽水解酶(BSH)、具有自溶作用的Auto蛋白、參與InlA和肽聚糖結(jié)合的分揀酶(Sortase)、酰胺酶(Ami)、纖連蛋白結(jié)合蛋白A(FbpA)、己糖磷酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(Hpt)、Vip等。隨著新技術(shù)的發(fā)展及更完善動(dòng)物模型的建立，對(duì)LM的毒力因子及其致病機(jī)理的研究將更加完善。

3 流行病學(xué)

LM被WHO列為4種主要的食源性病原菌之一［44］，在自然界中分布廣泛，土壤、河水、污泥、青貯飼料中均可存在，也可寄生于蜱、蠅、昆蟲、魚及甲殼動(dòng)物體內(nèi)，還能存在于人和動(dòng)物的胃腸道中。據(jù)報(bào)道，健康人類糞便中該菌的攜帶率為0.6%～16%，有20%的人可短期帶菌，4%～8%的水產(chǎn)品、5%～10%的乳及其制品、30%以上的肉制品及15%以上的禽產(chǎn)品均被該菌污染。1983年美國(guó)馬薩者塞洲發(fā)生巴氏消毒奶中毒事件，1985年美國(guó)加利福尼亞洲墨西哥式干酪中毒事件，1995年瑞士西部爆發(fā)了一起軟質(zhì)奶酪引起的中毒事件，在上述事件中，都在患者食物中發(fā)現(xiàn)單增李斯特氏菌(單增李斯特菌)。而2011年9月，美國(guó)發(fā)生了10多年來(lái)最嚴(yán)重的一起單增李斯特菌引起的食源性疾病暴發(fā)事件。此次暴發(fā)涉及到美國(guó)24個(gè)州，通過(guò)流行病學(xué)、溯源和實(shí)驗(yàn)室調(diào)查后發(fā)現(xiàn)這起暴發(fā)與食用來(lái)自科羅拉多州的格蘭納達(dá)波尼地區(qū)的Jensen農(nóng)場(chǎng)種植的香瓜相關(guān)。中國(guó)現(xiàn)已將食品中單增李斯特菌的監(jiān)測(cè)納入食品污染物監(jiān)測(cè)網(wǎng)，隨著對(duì)該菌的重視和檢測(cè)技術(shù)的提高，食品中單增李斯特菌的檢出率明顯提高。本菌可通過(guò)眼及破損皮膚、黏膜進(jìn)入人體而造成感染，孕婦感染該菌后出現(xiàn)類似流感癥狀，通過(guò)胎盤或產(chǎn)道感染胎兒或新生兒，并致流產(chǎn);棲居于陰道、子宮頸也引起感染。獸醫(yī)師及從事相關(guān)職業(yè)的人員易患皮膚型李斯特菌病。

4 展望

LM在自然界廣泛存在，食品在貯藏加工過(guò)程中也很容易被污染，國(guó)內(nèi)外近些年不斷從食物中檢出LM，李斯特菌病已成為僅次于沙門氏菌感染的第二號(hào)致命的食源性疾病。因此，LM的感染過(guò)程及其調(diào)控機(jī)理成為當(dāng)前研究的重點(diǎn)，而感染過(guò)程中的每個(gè)階段均由相應(yīng)的毒力因子調(diào)控，近年來(lái)也探索發(fā)現(xiàn)了多種毒力因子，毒力因子的致病機(jī)制也被不斷的發(fā)現(xiàn)。隨著新技術(shù)的發(fā)展及更完善動(dòng)物模型的建立，對(duì)LM的毒力因子及其致病機(jī)理的研究將更加完善，進(jìn)而給LM的快速檢測(cè)及其控制技術(shù)提供更有利的理論依據(jù)。

［1］James M JAY.現(xiàn)代食品微生物學(xué)［M］.杰伊(美).北京:中國(guó)輕工業(yè)出版社，2001.

［2］李郁，魏建忠，王桂軍.產(chǎn)單核李斯特菌的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2005，15(8):1018-1020.

［3］李翠云.單核細(xì)胞李斯特菌研究近況［J］.中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2010，10(1):120-122.

［4］肖義澤，任麗娟，王金玉，等.云南省首次動(dòng)物源性李斯特菌病暴發(fā)的流行病學(xué)調(diào)查［J］.中華流行病學(xué)雜志，2000，21(3):236.

［5］郭仰霖，曾凡偉，王培玉，等.上杭縣人畜李斯特菌病發(fā)病與帶菌調(diào)查研究［J］.海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，1999，5(3):9-10.

［6］葛素君，許際華，馮濟(jì)富，等.運(yùn)用“染片指引法”對(duì)產(chǎn)單核李斯特菌暴發(fā)食物中毒的診斷及其意義［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2006，16(1):94-95.

［7］陳廣全，張惠媛，曾靜.食品安全檢測(cè)培訓(xùn)教材微生物檢測(cè)［M］.北京:中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社，2010:364.

［8］劉秀峰，劉紅，林劍琴.福州市2000-2004年各類食品中產(chǎn)單核細(xì)胞增生李斯特菌污染情況調(diào)查［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2005，15(7):852-853.

［9］梁銳萍，胡慧強(qiáng)，黃素珍.單核細(xì)胞增生性李斯特菌檢測(cè)研究進(jìn)展［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2005，26(4):44-46.

［10］楊正時(shí)，房海.人及動(dòng)物病原細(xì)菌學(xué)［M］.石家莊:科學(xué)技術(shù)出版社，2003:884-894.

［11］陳倩，駱海明，趙春玲，等.北京市食品中五種食源性致病菌污染狀況調(diào)查研究［J］.中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2003，13(5):570-571.

［12］張秀麗，廖興廣，王秋菊，等.產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特氏菌對(duì)理化因素抵抗力的研究［J］.實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2000，7(4):309-310.

［13］Vazquez-Boland J A，Kuhn M，Berche P，et al.Listeria pathogenesis and molecular virulence determinants［J］.Clinical Microbiology Reviews，2001，14(3):584-640.

［14］Glomski I J，Gedde M M，Tsang A W，et al.The Listeria monocytogeneshemolysin has an acidic pH optimum to compartmentalize activity and prevent damage to infected host cells［J］.The Journal of Cell Biology，2002，156(6):1029-1038.

［15］孫新生，徐幸蓮，韓衍青，等.超高壓協(xié)同溫度處理對(duì)煙熏火腿中單增李斯特菌生長(zhǎng)預(yù)測(cè)模型的建立［J］.食品工業(yè)科技，2012，33(13):118-126.

［16］余淑冰，梁景濤，周強(qiáng)忠，等.食品中單核細(xì)胞增生李斯特菌分離及藥敏實(shí)驗(yàn)的研究［J］.中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué)，2004，4(4):515-516.

［17］唐家琪.自然疫源性疾病［M］.北京:科學(xué)出版社，2005:899-912.

［18］Lukinma A S，Miettinen M，Nakariu M，et al.Listeria monocytogenes isolates from invasive infections:variation of sero and genotypes during an 11-yearperiod in Finland［J］.Journal of Clinical Microbiology，2003，41(4):1694-1700.

［19］Schmid M，Walcher M，Bubert A，et al.Nucleic acid based，cultivation-independent detection of listeria spp.and geno types of L.monocytogenes［J］.FEMS Immunology and Medical Microbiology，2003，35:215-225.

［20］沈正達(dá).細(xì)菌毒力島的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2003，23(7):412-414.

［21］Liu D.Identification，subtyping and virulence determination of Listeria monocytogenes，an important foodborne pathogen［J］.J Med Microbiol，2006，55(6):645-659.

［22］Yin Y L，Zhang C J，DongH，et al.Protective immunity induced by a LLO-deficient Listeria monocytogenes［J］.Microbiology and Immunology，2010，54(4):175-183.

［23］Amy L，Decatur，Daniel A，et al.A PEST-Like sequence in Listeriolysin O essential for Listeria monocytogene pathogenicity［J］.Science，2000(3):992-995.

［24］Shaynoor D，Pascale C.Listeriolysin O:genuine cytolysis optimized for an intracellular parasite［J］.The Journal of Cell Biology，2002，156(6):943-946.

［25］Moors M A，Levitt B，Youngman P，et al.Expression of listeriolysin O and ActA by intracellular and extracellular Listeria monocytogenes［J］.Infect Immunol，1999，67:131-139.

［26］Le Monnier A，Autret N，Join-Lambert O F，et al.ActA is required for crossing of the fetoplacental barrier by Listeria monocytogenes［J］.Infect Immun，2007，75(2):950-957.

［27］殷月蘭，朱國(guó)強(qiáng)，耿士忠，等.產(chǎn)單核細(xì)胞李斯特菌actA/plcB缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性［J］.微生物學(xué)報(bào)，2008，48(3):299-303.

［28］Dussurget O，Pizarro-Cerda J，Cossart P.Molecular determinants of Listeria monocytogenes virulence［J］.Annu Rev Microbiol，2004，58:587-610.

［29］Zhou Q C，F(xiàn)eng F F，Wang L，et al.Virulence regulator PrfA is essential for biofilm formation in Listeria monocytogenes but not in Listeria innocua［J］.Current Microbiology，2011，63(2):186-192.

［30］Lindback T，Secic L，Rorvik L M.A Contingency locus in prf A in a Listeria monocytogenes subgroup allows reactivation of the prf A virulence regulator during infection in mice［J］.Applied and Environmental Micpobiology，2011，77(10):3478-3483.

［31］Aleksandra S，Helene M.Restricted translocation across the cellwall regulates secretion of the broad-range phospholipase C of Listeria monocytogenes［J］.J Bacteriol，2003，185:5953-5958.

［32］Angelika G，Mark D G，Darren E H.Requirement of the Listeria monocytogenes broad-range phospholipase PC-PLC duing infection of human epithelial cells［J］.J Bacteriol，2003，185:6295-6307.

［33］Rawool D B，Malik S V S，Shakuntala I，et al.Comparison of PI-PLC based assays and PCR along with in vivo pathogenicity tests for rapid detection of pathogenic Listeria monocytogenes［J］.International Journal of Food Microbiology，2007，113(2):201-207.

［34］Sashinami H，Hu D L，Li S J，et al.Virulence factor p60 of Listeria monocytogenes modulates innate immunity by inducing tumor necrosis factor alpha［J］.Fems Immunology and Medical Microbiology，2010，59(1):100-107.

［35］Yu K Y，Noh Y，Chung M，et al.Use of monoclonal antibodies thatrecognize p60 foridentification ofListeria monocytogenes［J］.Clin Diagn Lab Immunol，2004，11:446-451.

［36］Pandiripally V K，Westbrook D G，Sunki G R，et al.Surface protein P104 is involved in adhesion of Listeria monocytogenes to human intestinal cell line，Caco-2［J］.J Med Microbiol，1999，48:117-124.

［37］Conte M P，Petrone G，Di Biase A M，et al.Acid tolerance in Listeria monocytogenes influences invasiveness of enterocyte-like cells and macrophage-like cells［J］.Microb Pathog，2000，29:137-144.

［38］Conte M P，Longhi C，Petrone G，et al.Modulation of actA gene expression in Listeria monocytogenes by iron［J］.J Med Microbiol，2000，49:681-683.

［39］Lecuit M，Vandormael P S，Lefort J，et al.A transgenic model for Listeriosis:role of internalin in crossing the intestinal barrier［J］.Science，2001，292:1722-1725.

［40］Jaradat Z W，Wampler J W，Bhunia A W.A Listeria adhesion protein-deficient Listeria monocytogenes strains showed reduced adhesion primarily to intestinal cell lines［J］.Med Microbiol Immunol，2003，192(2):85-91.

［41］Milohanic E，Glaser P，Coppee J Y，et al.Transcriptome analysis of Listeria monocytogenes identifies three groups of genes differently regulated by PrfA［J］.Mol Microbiol，2003，47(6):1613-1625.

［42］Bergmann B，Raftelsbauer D，Kuhn M，et al.InlA-but not InlB-mediated internalization ofListeria monocytogen by nonphagocytic mammalian cells needs thesupportofother imernahns［J］.Mal Microbial，2002，43(3):557-570.

［43］Kaclikova E，Pangallo D，DrahovskáH，et al.Polymerase chain reaction detection of Listeria monocytogenes using oligonucleotide primers targeting actA gene［J］.Food Control，2003，14(3):175-179.

［44］Centers for Disease Control and Prevention.Outbreak of listeriosis northeastern United States［J］.MMWR，2002，25(42):950-951.