植物多酚的分離純化及抗氧化、降脂降糖功能研究

伊娟娟，左麗麗，王振宇，2，*

(1.哈爾濱工業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，黑龍江哈爾濱150090;2.東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，黑龍江哈爾濱150040)

植物多酚廣泛存在于水果、蔬菜、豆類、谷物類等天然植物的根、莖、葉、花、果實及果皮中，具有多羥基結(jié)構(gòu)為植物體主要次生代謝物，是藥用植物的有效成分，具有藥用保健功能［1-2］?，F(xiàn)已有大量的實驗研究報道多數(shù)天然植物提取的多酚類化合物具有強效的自由基清除力，從而能預(yù)防各種自由基導(dǎo)致的相關(guān)疾病的發(fā)生［2-4］。酚類化合物具有多種生理功能，包括改善心血管疾病、防癌、抗氧化、抗腫瘤、抗輻射、抗病毒、抗高血糖、降血脂、調(diào)節(jié)抗氧化酶系的表達及抗炎等［5-6］多種生理功能。這都是因為天然植物中含有的大量對身體有益的活性化合物，包括植物多酚，維生素C，胡蘿卜素和生育酚等多種生物活性成分。日常飲食中有目的性經(jīng)常攝食富含多酚活性成分的食物能夠降低各種自由基導(dǎo)致的慢性病的風(fēng)險，例如心血管疾病、癌癥、心臟病等［7-8］。多酚類化合物因天然存在于多種植物中，資源廣泛，生理功能強大，應(yīng)用前景廣闊，而深受國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注，對其開發(fā)應(yīng)用也成為時下研究的熱點，如開發(fā)植物多酚應(yīng)用于醫(yī)療行業(yè)作為保健品、防止治療心血管疾病等藥物，美容護膚品，食品行業(yè)的抗氧化劑等產(chǎn)品。

1 植物多酚的組成

植物多酚是一種重要的天然抗氧化劑，其結(jié)構(gòu)以苯酚為基本骨架，以苯環(huán)的多羥基取代為特征，具有強效的自由基清除力，且具有抗氧化防衰老、降血脂、降血糖、抗病毒［9］等多項生理功能，其具有的生理功能與其結(jié)構(gòu)特征、組成成分密不可分。相關(guān)資料表明多酚類物質(zhì)按其苯酚環(huán)結(jié)構(gòu)不同分為:類黃酮類(Flavonoids)、酚酸類(Phenolic acids)、酚醇類(Phenolic alcohols)、芪類(Stilbenes)主要包含白藜蘆醇(Resveratrol)、木酚素類(Lignans)等類別;按C 骨架結(jié)構(gòu)不同分為:簡單酚類、苯醌類(C6)，羥基苯甲酸類(C6-C1)，苯乙酮類、苯乙酸類(C6-C2)，羥基肉桂酸類、苯丙烯類、香豆素類、色酮類(C6-C3)，萘醌類(C6-C4)，氧雜蒽酮類(C6-C1-C6)，芪類、蒽醌類(C6-C2-C6)，黃酮、異黃酮、黃烷酮、黃烷醇、黃酮醇、花色苷(C6-C3-C6)，木脂素類(C6-C3)2，雙黃酮類(C6-C3-C6)2，木質(zhì)素類(C6-C3)n，縮合單寧(C6-C3-C6)n等類別。其結(jié)構(gòu)不同表現(xiàn)出不同的生理功能，這體現(xiàn)出一定的構(gòu)效關(guān)系。

2 植物多酚的提取及純化工藝

2.1 植物多酚的提取工藝

目前，研究植物多酚的分離提取法有溶劑法、微波浸提法、超聲波浸提法、超臨界流體萃取法、離子沉淀法、雙水相萃取法、柱層析法等。本文將著重介紹以下幾種方法。

2.1.1 生物酶法 包怡紅等［10］采用酶法并以超聲波輔助提取紅松樹皮中的多酚類化合物，以多酚得率、DPPH·清除率為參考標(biāo)準(zhǔn)優(yōu)化超聲波酶法的最佳工藝條件為:酶解溫度45℃，酶添加量3.5%，酶解時間90min，pH4.8，在此條件下多酚得率可達77.99mg/g，對DPPH·清除率為63.17%，分離效果比傳統(tǒng)溶劑法更佳。王華斌等［11］人也采用酶法提取石榴皮中多酚，為確定酶法提取石榴皮中多酚的最佳工藝，采用單因素實驗考察不同濃度的纖維素酶、果膠酶、復(fù)合酶(不同質(zhì)量比的纖維素酶和果膠酶)、酶解時間、酶解溫度及酶解液pH 對石榴皮多酚得率的影響。實驗結(jié)果表明，對石榴皮多酚得率影響次序依次為酶解時間＞酶濃度＞pH ＞酶解溫度。當(dāng)復(fù)合酶(纖維素酶和果膠酶質(zhì)量比為2∶1)質(zhì)量濃度為0.25mg/mL，酶解時間150min，酶解溫度50℃，初始酶解液pH6.0時，多酚得率23.87%。劉軍海等［12］采用的是復(fù)合酶提取茶多酚，得出最佳工藝為:提取溫度60℃，提取時間80min，pH 為4.6，酶用量為0.20%，在此工藝下茶多酚提取率為13.6%。

2.1.2 超聲波浸提法 Selin Sahin 等［13］用超聲波輔助提取(UAE)橄欖葉多酚，設(shè)置提取參數(shù)如溶劑濃度范圍為0～100%乙醇(EtOH)，固液比25～50mg/mL 和提取時間20～60min，通過響應(yīng)面法(RSM)獲得最佳的參數(shù)組合，本研究提取收率表達為mg 提取物/kg 干葉，總酚含量表達為沒食子酸當(dāng)量(GAE)/g 干葉，結(jié)果為201.2158mg 提取物/g 干葉，25.0626mg GAE/g 干葉，DPPH·清除率高達95.5610%(固液比500mg∶10mL、提取時間60min，EtOH 50%)。Muhammad K.等［14］也采用超聲波助提法提取橘皮中多酚(二氫黃酮苷)，確定最優(yōu)條件:溫度為40℃，功率為150W，乙醇∶水為4∶1(v/v)。總酚含量相當(dāng)于275.8mg 沒食子酸當(dāng)量/100g FW，二氫黃酮濃度為70.3mg 柚皮甙和205.2mg 的橘皮苷/100g FW 及提取率為10.9%。

2.1.3 超臨界流體萃取法 景秋菊等［15］以乙醇為提取溶劑采用超臨界流體萃取紅松種殼內(nèi)活性成分，最佳固液比1∶12，萃取時間60min，提取溫度35℃;并對紅松種殼的醇提物進行抗氧化功能研究，結(jié)果顯示，其中部分產(chǎn)物具有較強的抗氧化性能，分別具有抗超氧陰離子能力，SOD 活性和清除羥自由基的能力。石莉莉等［16］采用超臨界CO2流體提取花生殼中多酚類物質(zhì)，根據(jù)HA120-50-01 型超臨界流體萃取裝置操作規(guī)程進行超臨界流體萃取，萃取物經(jīng)過濾、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)及干燥后得到提取物，其中多酚類物質(zhì)得率為6.19%。張青松［17］也采用超臨界CO2流體萃取技術(shù)，篩選7.5%乙醇為最佳夾帶劑，對萃取釀酒后葡萄皮渣中白藜蘆醇萃取工藝條件進行研究。結(jié)果表明，在38℃、13MPa、萃取17min 條件下，白藜蘆醇平均得率達0.087%。魏福祥等［18］通過單因素和正交實驗對超臨界CO2流體萃取蘋果多酚工藝進行優(yōu)化，最佳萃取工藝條件為:萃取壓力35MPa、萃取溫度50℃、萃取時間3h、物料粒度40 目、夾劑95%乙醇、CO2流速45kg/h，得率為0.1%。

2.1.4 微波浸提法 Li Yinping 等［19］采用微波助提法(MAE)快速分離提取葡萄籽中多酚化合物，經(jīng)單因素及交互實驗在最初五因素(提取液醇濃度，液固比，時間，微波功率和溫度)中選擇最具有顯著影響的三個因素(提取液醇濃度，液固比和時間)，利用CCRD 實驗得出最佳優(yōu)化提取條件為醇濃度為47.2%，液固比是45.3∶1，時間是4.6min，通過Folin-Ciocalteau 法測定總酚含量是粗提物的92%。宋薇薇等［20］人用微波輔助法提取石榴皮多酚類化合物，確定了石榴皮多酚提取的最優(yōu)工藝條件:40%(體積分?jǐn)?shù))乙醇作溶劑，料液比(g∶mL)1∶35，微波功率為242W，提取時間60s，提取三次，多酚粗提物得率26.52%。Brachet A［21］采用微波輔助提取方法從可可葉中提取可卡因和苯甲酰芽子堿，考察了提取溶劑、樣品濕度、樣品粒度、微波功率及照射時間等參數(shù)。所得提取物與傳統(tǒng)方法相當(dāng)，但耗時卻只有30s，縮短了提取時間，提高了效率。Xuejun Pan 等［22］采用微波提取茶葉中茶多酚和咖啡因，其最佳工藝條件為預(yù)浸泡時間90min，固液比1∶20，乙醇濃度50%，微波作用時間4min，得茶多酚的提取率29.59%，咖啡因提取率4.04%，較常規(guī)提取方法節(jié)省時間。

2.2 植物多酚的純化工藝

Wang Li 等［23］采用色譜柱法(CCE)提取分離綠茶中多酚、咖啡因和茶氨酸等物質(zhì)。通過多次洗滌后得到高純度的多酚(99%)，咖啡因(98%)和茶氨酸(98%)。Liu Dan 等［24］采用高壓電子放電(HVED)法提取葡萄籽多酚并用超濾法濃縮。通過傳導(dǎo)性裂變指數(shù)Z 和提取物中的多酚濃度來評估實驗效率。實驗證明，HVED 提取的多酚最大濃度可達到8.3gGAE/100wdb。Chandreyee Datta 等［25］采用Amberlite IR-400 型陰離子交換樹脂吸附生姜根莖中的多酚類物質(zhì)，且通過Folin-Ciocalteau 法測定總酚含量。在pH4.0 ～6.0 變化范圍中，總酚吸附率在pH4.5 和5.5 可達到91%和92%。在溫度25～40℃變化范圍，總酚吸附率25℃時達到最大92%。隨著溫度的增長，吸附率也明顯增加，但在40℃時只得到70%的吸附率。Cui Hai-Yan 等［26］運用正丁醇-乙酸乙酯-水(1 ∶1 ∶2，v/v/v)溶劑系統(tǒng)的高速逆流色譜(HSCC)裝置分離純化山楂樹提取物中的活性多酚。優(yōu)化在速度850r/min 流速1.5mL/min，溫度25℃純化條件時，500mg 的粗提物可在260min 內(nèi)得到9.7mg純度為94.8%的產(chǎn)物。Cao Xueli 等［27］采用溶劑系統(tǒng)是己烷-乙酸乙酯-1%水合乙酸(0.5∶9.5∶10，v/v/v)的高速逆流色譜(HSCCC)系統(tǒng)并結(jié)合高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(HPLC-MS)對蘋果渣中多酚分離鑒定，最佳的分離方法是利用濃度0%～100%的水合乙醇(增加梯度10%)作為洗提劑的交聯(lián)葡聚糖LH-20 色譜柱分離。HPLC 分析顯示，多酚主要存在于40%與50%乙醇洗脫的梯度之間。He Jian 等［28］使用混合陽離子交換色譜的新型固相萃取技術(shù)(SPE)從水果蔬菜中分離純化高純度花青素。使HPLC 與光電二極管陣列(PAD)和質(zhì)譜(MS)探測器相連接，并運用紅外線傅立葉變換(FT-IR)光譜學(xué)，紫外可見光譜分析顯示獲得了比用C18墨盒純化的純度還高的花青素。且在分離得到的12 種花青素中有8 種純化后純度高達99%(紫外可見色譜)。表明這種新型的方法有效的去除了非花色苷酚類物質(zhì)，在保證最佳復(fù)原率和最低消耗的前提下顯著地提高了花青素的純度和收率。

3 植物多酚的生理功能

3.1 抗氧化功能

天然多酚類生物活性物質(zhì)具有潛在的保健功效，研究表明多酚類化合物能夠清除體內(nèi)過剩的自由基，主要是它結(jié)構(gòu)中能提供氫原子或螯合劑來發(fā)揮抗氧化作用。Sindhu Mathew［29］等研究樟樹皮提取物(CBE)的抗氧化活性和含有的多酚類化合物有關(guān);其表現(xiàn)出很強的自由基清除能力尤其清除DPPH和ABTS 自由基的能力強。氫氧陰離子和超氧陰離子也可被清除。CBE 也表現(xiàn)出具有金屬螯合能力及過氧化抑制能力，以上特性均體現(xiàn)出CBE 有非常好的抗氧化活性;另外，Y Choi［30］等研究香菇提取物中釋放和結(jié)合的多酚和黃酮類化合物的生理活性，也通過對其ABTS 和DPPH 自由基清除力分析，提取物表現(xiàn)出良好的抗氧化活性及清除自由基的功能。蘇曉雨等［31］利用從紅松種子中提取的多酚物質(zhì)進行體內(nèi)和體外抗氧化實驗，結(jié)果表明紅松種子提取物可以抑制由γ-射線引起的氧化損傷，可以增加超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽酶(GSH)的水平，降低丙二醛(MDA)的含量，表現(xiàn)出很好的抗氧化活性。

O.Benavente-Garcia 等［32］從橄欖葉提取物中分離出的多酚及黃酮類化合物清除ABTS 自由基的能力和它們結(jié)構(gòu)中的相關(guān)官能團有關(guān)，主要和B 環(huán)鄰苯二酚、3 羥基官能團和2，3 雙鍵共軛含氧官能團有關(guān)。對于其它的開環(huán)多酚化合物，它們清除ABTS 自由基的能力主要和它們結(jié)構(gòu)中自由羥基官能團的數(shù)量和位置有關(guān)。而且，當(dāng)混合時化合物的官能團表現(xiàn)出和開環(huán)中一樣的協(xié)同作用。Maria 等［33］發(fā)現(xiàn)胃消化能顯著影響大豆中生物活性物質(zhì)的釋放，增加總酚類物質(zhì)濃度(福林酚法35%和14%)，總異黃酮含量(22%)和總抗氧化活性(76%)。這表明體內(nèi)胃腸消化(包括透析)對大豆酚類化合物、異黃酮等物質(zhì)的抗氧化活性有顯著影響。

在深入研究和相關(guān)理論基礎(chǔ)上均表明，多酚類物質(zhì)有很好的抗氧化能力，延緩衰老進程，提高生命力及生存等能力，對防止疾病和人的健康有積極的作用［34］。

3.2 降血脂作用

Rishipal R 等［35］用花生皮(PE)水溶性多酚喂食Wister 鼠10 周后，高脂老鼠體重和附睪脂肪顯著降低，且血液中和肝臟內(nèi)甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)水平也明顯降低而糞便膽汁酸含量增加。肝臟脂肪酸合成酶(HMG-CoA 還原酶、酰基輔酶A-膽固醇)活性降低，固醇受體元素結(jié)合蛋白SREBP-1C、乙酰輔酶α 羧化酶(ACC1)活性下降，但過氧化物酶增殖物激活的γ 受體(γ-PPAR)有所增加，使高脂大鼠體內(nèi)膽固醇和脂質(zhì)含量有所改善。趙磊等［36］通過高脂飼料法建立了高血脂大鼠模型，用香蕉皮多酚灌喂高脂大鼠40 天后，與正常對照組相比TG(1.14±0.21)mmol/L，TC(3.06 ± 0.24)mmol/L，LDL- C(2.97 ±0.12.)mmol/L 水平明顯升高，HDL-C(0.89 ±0.11)mmol/L 水平降低，表明香蕉皮多酚具有一定的降血脂預(yù)防動脈粥樣硬化形成的作用。

Hiroshi S 等［37］喂食高脂小鼠核桃活性提取物(WP，45%多酚)，口服WP(100mg/kg 和200mg/kg)能顯著降低肝重量和總TG 含量及抑制油酸誘導(dǎo)的HepG2 細胞的 TG 積累，?；o酶 A 氧化酶(ACOX1)活性通過喂食WP(50～200mg/kg)有所增強。另外，添加100μg/μL 的WP 能顯著提高α(PPAR-R)的mRNA 的表達，證實了核桃內(nèi)核薄膜內(nèi)富含的鞣花單寧具有降脂功能。Yang Deng-Jie等［38］鑒定出龍眼花水提物(LFWE)中含有大量的多酚類物質(zhì)如酚酸和類黃酮，并用LFWE 喂食高脂大鼠后，老鼠體重、附睪脂肪量、TG、肝動脈粥樣化指數(shù)，脂質(zhì)含量均有所減少;食用2.5% LFWE 導(dǎo)致高脂鼠脂肪酸合成酶活性降低而減少脂肪酸的合成，增加了糞便排泄物中TG 含量。因此，證實了富含多酚的LFWE 確實具有體內(nèi)降血脂功效。

Yin Peipei 等［39］用板栗花刺果提取物(CMPE)喂食STZ 糖尿病大鼠(口服劑量300mL/kg)，每天兩次連續(xù)12 天后，CMPE 使血清葡萄糖、TG、TC、低密度脂蛋白-膽固醇(LDL-C)水平以及在脾臟和肝臟組織的MDA、GSH 水平大幅度減少。結(jié)果表明CMPE有開發(fā)成降血脂藥物的潛能。Zou Bo 等［40］研究柿子單寧酸(HMWPT)發(fā)現(xiàn)此類化合物能明顯降低TG、TC 和LDL-C 含量及血清載脂蛋白-B(Apo-B)、MDA 水平，而高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)含量增加。此外，100mg/kg 體重/天的HMWPT 處理能顯著提高血清卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(LCAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活性且總抗氧化作用能力(T-AOC)增強，糞便膽汁酸含量也明顯增加。這些結(jié)果表明HMWPT 具有良好的降血脂功效。

3.3 降血糖作用

A Prathapan 等［41］對木橘果肉提取物(AME)進行糖尿病相關(guān)參數(shù)評估，AME 表現(xiàn)出顯著的自由基清除活性及抑制超氧化物、羥基和一氧化氮自由基的能力且與α 生育酚(EC50值為(220.15 ±0.91)μg/mL)標(biāo)準(zhǔn)物比較，AME 可以顯著抑制脂質(zhì)過氧化(302.42 ±1.25)μg/mL 反應(yīng)。AME 也可劑量依賴性抑制α 淀粉酶(430.51 ± 1.61)μg/mL 和新型α-葡糖苷酶(294.4 ± 0.85)μg/mL 活性并發(fā)揮重要的抗糖化潛能。

Diana E 等［42］研究吸附到脫脂大豆粉(DSF)上的濃縮葡萄多酚對高血糖鼠血糖水平的影響。實驗表明1g 附著DSF 的葡萄多酚濃縮液含1.6～10.4mg的花青素，7.5 ～93.1mg 的原花青素及20.5 ～144.5mg總多酚。結(jié)果顯示吸附DSF 的葡萄多酚能顯著降低C57BL/6J 高血糖鼠的血糖水平。Pradeep Visen等［43］研究證實了歐洲白蠟樹種子提取物活性物質(zhì)的降血糖作用。Elisa Vega-Avila 等［44］人也研究了長春花多酚活性物質(zhì)的降血糖的活性，和甲糖寧比較長春花、葉、莖、根提取物活性物質(zhì)都能更好的降低四氧嘧啶誘導(dǎo)(75mg/kg)糖尿病鼠的血糖水平。

Sang C 等［45］通過給注射鏈脲霉素STZ(50mg/kg體重)誘導(dǎo)的2 型糖尿病大鼠喂食雙孢菇提取物(ABP200mg/kg 體重)有顯著降低血漿葡萄糖、TG、TC、LDL 濃度(分別為24.7%、39.1%、22.8% 和33.1%)的效果，肝臟內(nèi)TG、TC 及丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性也分別降低了20.8%、36.2%、11.7%和15.7%，且伴隨HDL 含量顯著升高。

M.S.Deutschlander 等［46］從 Euclea undulata var.mvrtina 根皮中用丙酮提取出4 種化合物，結(jié)果鑒定出一種新的三萜烯為α-香樹酯醇-3 氧-(5 羥基)阿魏酸和三種化合物分別為樺木醇、羽扇豆醇和表兒茶素，體外C2C12 肌細胞實驗表明，在濃度200.0μg/mL，IC50值為4.79 的條件下，表兒茶素能降低血糖水平，而三萜烯有抑制葡糖苷酶的效果。Adam J.等［47］用黑果梨多酚活性物質(zhì)，特別是花青素苷(56.6%)喂食高血脂鼠后，測定麥芽糖酶和蔗糖酶活性均有所下降，粘膜乳糖酶活性增加，抗氧化性能有所改善，特別是改善了器官組織(肝臟、腎臟和肺)中脂質(zhì)過氧化指標(biāo)物(TBARS)的活性，膽固醇和血糖濃度也不同程度的有所下降。

4 展望

目前，隨著對多酚研究的增多以及技術(shù)開發(fā)水平的深入，多酚的分離提取工藝已經(jīng)日漸精深，國內(nèi)外對其生理功能和藥效價值的研究也更加全面，但植物資源利用深加工程度低，加工過程中一些副產(chǎn)品中植物多酚利用率低，且缺乏工業(yè)化生產(chǎn)體系，因此應(yīng)在充分利用現(xiàn)有的技術(shù)手段和科研條件的前提下，逐步完善以上不足?？蒲泄ぷ髡咭矐?yīng)該從長遠角度出發(fā)更加深入的研究植物多酚的生物活性及功能，不斷以新的方法探討新的作用機制，力爭從多途徑多位點著手開發(fā)出更有效的延緩衰老、防止和治療高血脂、高血糖等現(xiàn)代慢性疾病的天然保健品。只有對植物多酚此類物質(zhì)更加全面、清晰的認(rèn)識，才能更加充分、合理、科學(xué)地利用此寶貴的自然資源，才能更安全的將其應(yīng)用于各食品、醫(yī)藥保健以及化妝品行業(yè)。綜上，對植物多酚的精細化加工和高附加值深度開發(fā)利用(如生理活性、食品及營養(yǎng))是目前的主要研究方向和應(yīng)用發(fā)展趨勢。

［1］S D'Angelo，A Morana，A Salvatore，et al.Protective effect of polyphenols from Glycyrrhiza glabra against oxidative stress in Caco-2 cells［J］.Journal of Medicinal Food，2009，12( 6) :1326-1333.

［2］B O M baebie，H O Edeoga，A J Afolayan.Phytochemical analysis and antioxidants activities of aqueous stem bark extract of Schotia latifolia Jacq［J］.Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine，2012，2(2) :118-124.

［3］Yang J Y，Li Y，Wang F，et al.Hepatoprotective Effects of Apple Polyphenols on CCI4-Induced Acute Liver Damage in Mice［J］.Journal of Agricultural and Food Chemistry，2010，58(10) :6525-6531.

［4］Francisco Cabello Hurtado，Morgane Gicquel，Marie Andrée Esnault.Evaluation of the antioxidant potential of cauliflower( Brassica oleracea) from a glucosinolate content perspective［J］.Food Chemistry，2012，132(2) :1003-1009.

［5］Xu C M，Zhang Y L，Cao L，et al.Phenolic compounds and antioxidant properties of different grape cultivars grown in China［J］.Food Chemistry，2010，119(4) :1557-1565.

［6］Amit Kumar Dixit，Deepti Bhatnagar，Vineet Kumar，et al.Antioxidant potential and radioprotective effect of soy isoflavone against gamma irradiation induced oxidative stress［J］.Journal of Functional Foods，2012，4(1) :197-206.

［7］Ercan Bursal，˙Ilhami Gül?in.Polyphenol contents and in vitro antioxidant activities of lyophilised aqueous extract of kiwifruit( Actinidia deliciosa) ［J］.Food Research International，2011，44(5) :1482-1489.

［8］ Liu Yan，Liu Ming，Li Bin，et al.Fresh raspberry phytochemical extract inhibits hepatic lesion in a Wistar rat model［J］.Nutrition ＆ Metabolism，2010，7(1) :1-8.

［9］A M Freitas，MTR Almeida，CR Andrighetti Frohner，et al.Antiviral activity - guided fractionation from Araucaria angustifolia leaves extract［J］.Journal of Ethnopharmacology，2009，126(3) :512-517.

［10］包怡紅，王碩，王文瓊，等.超聲波酶法提取紅松樹皮中多酚類化合物的研究［J］.2013(3) :232-235.

［11］王華斌，王珊，傅力.酶法提取石榴皮多酚工藝研究［J］.中國食品學(xué)報，2012，12(6) :56-65.

［12］劉軍海，楊海濤，刁宇清.復(fù)合酶法提取茶多酚工藝條件研究［J］.食品與機械，2008(3) :74-77.

［13］Selin Sahin，Ruya Samli.Optimization of olive leaf extract obtained by ultrasound-assisted extraction with response surface methodology［J］.UltrasonicsSonochemistry，2013，20 ( 1 ) :595-602.

［14］Muhammad Kamran Khan，Maryline Abert-Vian，Anne-Sylvie Fabiano- Tixier，et al.Ultrasound- assisted extraction of polyphenols(flavanone glycosides)from orange( Citrus sinensis L.)peel［J］.Food Chemistry，2010，119(2) :851-858.

［15］景秋菊.紅松種殼中抗氧化物質(zhì)的分離純化及功能研究［D］.哈爾濱:東北林業(yè)大學(xué)，2006，34.

［16］石莉莉，羅金岳.超臨界CO2提取花生殼中多酚類物質(zhì)［J］.生物質(zhì)化學(xué)工程，2006，40(5) :21-24.

［17］張青松，李勝，方艷.超臨界CO2萃取葡萄皮渣中白藜蘆醇的研究［J］.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2009，44(6) :128-131.

［18］魏福祥，曲恩超.超臨界CO2從蘋果渣中萃取蘋果多酚的工藝研究［J］.食品研究與開發(fā)，2006，27(7) :60-63.

［19］Li Yinping，George K Skouroumounis，Gordon M Elsey，et al.Microwave - assistance provides very rapid and efficient extraction of grape seed polyphenols［J］.Food Chemistry，2011，129(2) :570-576.

［20］宋薇薇，焦士蓉，周佳，等.石榴皮多酚的微波輔助提取及提取物抗氧化與抑菌作用研究［J］.現(xiàn)代食品科技，2008，24(1) :23-27.

［21］Brachet A，Christen P’Veuthey J L，dal.Focused microwave-assisted extraction of cocaine and benzoylecgonine from coca leaves［J］.Phytoehem Anal，2002，13(3) :162-164.

［22］Pan X，Niu G，Liu H.Microwave- assisted extraction of tanshinones from Salvia miltiorrhiza bunge with analysis by highperformance liquid chromatography［J］.Journal of Chromatography A，2001，922:371-375.

［23］Wang Li，Gong Li-Hong，Chen Chang-Jian，et al.Columnchromatographic extraction and separation of polyphenols，caffeine and theanine from green tea［J］.Food Chemistry，2012，131(4) :1539-1545.

［24］ Liu Dan，Eugène Vorobiev，Raphaelle Savoire，et al.Intensification of polyphenols extraction from grape seeds by high voltage electrical discharges and extract concentration by dead - end ultrafiltration ［J］.Separation and Purification Technology，2011，81(2) :134-140.

［25］ Chandreyee Datta，Asmita Dutta，Debjani Dutta，et al.Adsorption of polyphenols from ginger rhizomes on an anion exchange resin Amberlite IR-400-Study on effect of pH an Temperature，Procedia［J］.Food Science，2011，1(11) :893-899.

［26］Cui Hai-Yan，Jia Xiao-Yan，Zhang Xia，et al.Optimization of high-speed counter-current chromatography for separation of polyphenols from the extract of hawthorn( Crataegus laevigata)with response surface methodology［J］.Separation and Purification Technology，2011，77(2) :269-274.

［27］Cao Xueli，Wang Cong，Pei Hairun，et al.Separation and identification of polyphenols in apple pomace by high- speed counter-current chromatography and high- performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry［J］.Journal of Chromatography A，2009，1216(19) :4268-4274.

［28］ He Jian，M Monica Giusti.High - purity isolation of anthocyanins mixtures from fruits and vegetables-A novel solidphase extraction method using mixed mode cation - exchange chromatography［J］.Journal of Chromatography A，2011，1218(44) :7914-7922.

［29］ Sindhu Mathew，T Emilia Abraham.Studies on the antioxidant activities of cinnamon ( Cinnamomum verum) bark extracts，through various in vitro models［J］.Food Chemistry，2006，94(4) :520-528.

［30］Y Choi，S M Lee，J Chun，et al.Influence of heat treatment on the antioxidant activities and polyphenolic compounds of Shiitake( Lentinus edodes) mushroom［J］.Food Chemistry，2006，99(2) :381-387.

［31］蘇曉雨.紅松種殼組成及多酚提取分離與抗氧化抗腫瘤功能研究［D］.哈爾濱工業(yè)大學(xué)，2010:132

［32］ O Benavente - Garc??a，J Castillo，J Lorente，et al.Antioxidant activity of phenolics extracted from Olea europaea L.leaves［J］.Food Chemistry，2000，68(4) :457-462.

［33］Maria Janeth Rodriguez-Roque，Maria Alejiandra Rojas-Grau，Pedro Elez-Martinea，et al.Soymilk phenolic compounds，isoflavones and antioxidant activity as affected by in vitro gastrointestinal digestion［J］.Food Chemistry，2013，136( 1) :206-212.

［34］Choucroun P，Gillet D，Dorange G，et al.Comet assay and early apoptosis ［J］.Mutation Research - Fundamental and Molecular Mechanisms of Mutagenesis，2001，478(1-2) :89-96.

［35］Rishipal R Bansode，Priscilla Randolph，Steven Hurley，et al.Evaluation of hypolipidemic effects of peanut skin- derived polyphenols in rats on Western-diet［J］.Food Chemistry，2012，135(3) :1659-1666.

［36］趙磊，朱開梅，王曉，等.香蕉皮多酚對高脂血癥大鼠降血脂作用的實驗研究［J］.中國實驗方劑學(xué)雜志，2012，18(13) :201-204.

［37］Hiroshi Shmoda，Junji Tanaka，Mnsunori Kikuchi，et al.Effect of Polyphenol- Rich Extract from Walnut on Diet-Induced Hypertriglyceridemia in Mice via Enhancement of Fatty Acid Oxidation in the Liver［J］.Agricultural Food Chemistry，2009，57(5) :1786-1792.

［38］Yang Deng- Jie，Chang Yuan- Yen，Hu Chin- Lin，et al.Antiobesity and Hypolipidemic Effects of Polyphenol- Rich Longan( Dimocarpus longans Lour.) Flower Water Extract in Hypercaloric- Dietary Rats［J］.Agricultural Food Chemistry，2010，58(3) :2020-2027.

［39］Yin Peipei，Zhao Shan，Chen Siyu，et al.Hypoglycemic and Hypolipidemic Effectsof Polyphenols from Burs of Castanea mollissima Blume［J］.Molecules，2011，16(11) :9764-9774.

［40］Zuo Bo，Li Chun-mei，Chen Jin-yu，et al.High molecular weight persimmon tannin is a potent hypolipidemic in highcholesterol diet fed rats［J］.Food Research International，2012，48(2) :970-977.

［41］ A Prathapan，Mahesh S Krishna，V M Nisha，et al.Polyphenol rich fruit pulp of Aegle marmelos ( L.) Correa exhibits nutraceutical properties to down regulate diabetic complications - An in vitro studys ［J］ .Food Research International，2012，48(2) :690-695.

［42］Diana E Roopchand，Peter Kuhn，Alexander Poulev，et al.Biochemical analysis and in vivo hypoglycemic activity of a grape polyphenol-soybean flour comples［J］.Agricultural Food Chemistry，2012，60(36) :8860-8865.

［43］Pradeep Visen，Binduja Saraswat，Aastha Visen，et al.Acute effect of Fraxinus excelsior L.seed extract on postprandial glycemia and insulin secretion on healthy volunteers［J］.Journal of Ethnopharmacology，2009，126(2) :226-232.

［44］Elisa Vega Avila，Jose Luis Cano Velasco，F(xiàn)rancisco J，et al.Hypoglycemic activity of aqueous extracts from Catharanthus roseus［J］.Evidence - Based Complementary and Alternative Medicine，2012，2012:1-7.

［45］Sang Chul Jeong，Yong Tae Jeong，Byung Keun Yang，et al.White button mushroom ( Agaricus bisporus) lowers blood glucoseandcholesterollevelsindiabeticand hypercholesterolemic rats［J］.Nutrition Research，2010，30(1) :49-56.

［46］ M S Deutschlander，N Lall，M Van Venter，et al.Hypoglycemic evaluation of a new triterpene and other compounds isolate Euclea undulata Thunb Var.myrtina( Ebenaceae) root bark［J］.Journal of Ethnopharmacology，2011，133(3) :1091-1095.

［47］Adam Jurgonski，Jerzy Jusjiewicz，Zenon Zenon Zdunczyk，et al.Ingestion of Black Chokeberry Fruit Extract Leads to Intestinal and Systemic Changes in a Rat Model of Prediabetes and Hyperlipidemia［J］.Plant Foods Hum Nutr，2008，63 ( 4) :176-182.