β片層阻斷肽聯(lián)合人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對APP轉(zhuǎn)基因鼠的治療作用*

孫鳳仙，王 曼，徐艷玲，林來祥，徐淑梅△

（1.天津醫(yī)科大學(xué)生理學(xué)教研室，2.內(nèi)分泌研究所，天津 300070）

老年癡呆癥即阿爾茨海默病（Alzheimer’s Disease，AD），是一種發(fā)生于老年和老年前期以進(jìn)行性認(rèn)知障礙和記憶力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。其病理變化主要表現(xiàn)為β-淀粉樣蛋白（βamyloid peptide，Aβ）沉積于腦內(nèi)所形成的老年斑（senile plaque，SP）、過度磷酸化的tau蛋白纏結(jié)形成的神經(jīng)元纖維纏結(jié)（neurofibrillary tangle，NFT）及細(xì)胞凋亡等。

Aβ由β-淀粉樣前體蛋白（β-amyloid precursor protein，APP）經(jīng)β分泌酶和γ分泌酶水解產(chǎn)生，Aβ1-42錯誤折疊聚集可形成老年斑。眾多證據(jù)表明Aβ的神經(jīng)毒性作用是在多種因素導(dǎo)致AD發(fā)病的共同通路上，Aβ的神經(jīng)毒性與其沉積有關(guān)，而Aβ二級結(jié)構(gòu)中β-折疊的形成是聚集必需的，因此抑制Aβ的聚集成為治療AD的一個重要途徑。β片層阻斷肽是一類專門針對Aβ設(shè)計(jì)并合成的多肽，能夠抑制Aβ錯誤折疊和聚集，阻斷其神經(jīng)毒性，是一類新型的治療老年癡呆的候選藥物。

AD患者腦中膽堿能神經(jīng)元大量丟失，乙酰膽堿受體數(shù)目減少，造成認(rèn)知功能障礙［1］。因此補(bǔ)充腦內(nèi)丟失的神經(jīng)元也是治療AD的一條途徑。有研究表明，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞（human umbilical cord mesenchymal stem cell，hUCMSC）體外誘導(dǎo)可分化形成神經(jīng)元細(xì)胞［2］，從而解決了從腦組織分離神經(jīng)干細(xì)胞所遇到的臨床操作問題，更能避免免疫排斥反應(yīng)，使得自體移植治療阿爾茨海默病成為可能。有實(shí)驗(yàn)證實(shí)細(xì)胞凋亡是AD模型腦內(nèi)神經(jīng)元死亡丟失的主要方式［3］，當(dāng)補(bǔ)充神經(jīng)元后，可能會反饋調(diào)節(jié)細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白。在本實(shí)驗(yàn)研究了β片層阻斷肽H102聯(lián)合hUCMSC移植對APP轉(zhuǎn)基因鼠的行為學(xué)、細(xì)胞凋亡、腦內(nèi)tau蛋白中磷酸化及相關(guān)酶的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

14月齡APP695V7171轉(zhuǎn)基因小鼠32只，14月齡C57BL／6J小鼠8只，雌雄隨機(jī)提供，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究中心。H102用由上海吉爾生化有限公司固相合成法合成，高效液相色譜法純化，經(jīng)質(zhì)譜儀（MS）分析鑒定純度均＞95%，DAB顯色試劑盒、即用型SABC免疫組化試劑盒購自武漢博士德生物公司；NP-40購自Sigma-Aldrich公司；Bcl-2、Bcl-x1、Bax、Bad抗體及磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體anti-P-Tau（Thr231）、糖原合酶激酶（GSK-3β）抗體、蛋白磷酸酯酶（PP-1）抗體、蛋白磷酸酯酶（PP-2A）抗體購于北京博奧森生物科技有限公司。MT-200 Morris水迷宮視頻跟蹤分析系統(tǒng)購自成都泰盟科技有限公司。

1.2 hUCMSC的分離及培養(yǎng)

取足月妊娠剖宮產(chǎn)健康胎兒的臍帶，用 DHank’s緩沖液充分沖洗后，剪成大小約1 mm3的組織塊，移至0.1%膠原Ⅳ中，攪拌消化并用10%FBS終止消化，用細(xì)胞篩過濾離心，加入DMEM／F12（含10%胎牛血清、25 mmol／L谷氨酰胺、100 U／ml青霉素及 100μg／ml鏈霉素培養(yǎng)液）。將培養(yǎng)皿置于37℃含有5%CO2的飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。隔3～4 d更換培養(yǎng)基一次，連續(xù)培養(yǎng)10～13 d。當(dāng)細(xì)胞貼壁生長至80%～90%融合后原代培養(yǎng)結(jié)束，離心收集分裝單細(xì)胞懸液，傳代培養(yǎng)。收集第三代細(xì)胞，每106個細(xì)胞加2μl的CM-Dil進(jìn)行標(biāo)記，37℃孵育5min，4℃冰箱放置15min后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞。

1.3 給藥方法

將32只AD小鼠隨機(jī)分為4組，分別是：模型組，hUCMSC組，H102組，H102＋hUCMSC組（n＝8）。并設(shè)同月齡同背景C57BL／6J小鼠8只為正常對照組。10%水合氯醛（4 ml／kg）腹腔注射麻醉動物后，固定于腦立體定位儀上，參照George′s小鼠腦立體定位圖譜，定位側(cè)腦室（坐標(biāo) P-0.58，R1，H-1.5），植入不銹鋼導(dǎo)藥管套管，用牙科粉固定套管，縫合皮膚。手術(shù)1周后，用微量注射器自導(dǎo)藥管給藥，H102組及H102＋hUCMSC組每天側(cè)腦室注射80μmol／L的H102生理鹽水溶液3μl，hUCMSC組及 H102＋hUCMSC組，在給藥的第1天經(jīng)側(cè)腦室注射hUCMSC（5×105cells／μl）3μl，對照組和模型組側(cè)腦室注射等體積生理鹽水，給藥后管芯封閉套管。

1.4 Morris水迷宮測試 （Morris Water Maze，MWM）

給藥2周和4周后，行Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)。（1）定位航行實(shí)驗(yàn)：將平臺置于水迷宮的第三象限中央，每天相同時段小鼠游泳訓(xùn)練2次，每次90 s，記錄小鼠尋找并爬上平臺所需時間即逃避潛伏期。若小鼠在90 s內(nèi)未找到平臺，則將其引至平臺停留20 s，逃避潛伏期記為90 s，歷時5 d。（2）空間探索實(shí)驗(yàn)：于水迷宮的第6日撤去平臺，在相同時段每只小鼠游泳1次（每次90 s）。記錄小鼠在平臺所在象限停留時間（Residence time in the third quadrant，RTQ）、跨越隱匿平臺的次數(shù)及游泳朝向角等指標(biāo)，測試小鼠的記憶能力。

1.5 免疫組化染色

第4周Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，小鼠斷頭取腦，一半腦組織放入4%多聚甲醛溶液內(nèi)固定，一半腦組織分離海馬與皮層放入液氮中備用。

組織切片常規(guī)脫蠟至水，枸櫞酸緩沖液微波沸騰抗原修復(fù)，3%H2O2室溫孵育10 min，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶活性，正常山羊血清室溫孵育15 min，滴加稀釋的一抗（1∶200，），4℃過夜，生物素化二抗工作液室溫避光孵育15 min，辣根酶標(biāo)記物工作液室溫避光孵育15min，DAB顯色劑顯色，鏡下控制染色程度，蘇木素復(fù)染，封片觀察。陰性對照組用0.01 mol／L磷酸鹽緩沖液（PBS）代替一抗進(jìn)行免疫組化染色，其余步驟同上。

1.6 Western blot分析

于液氮中取出分離的小鼠海馬和皮層組織，加入適量的裂解液勻漿，BCA法測定蛋白后調(diào)定各組蛋白為等濃度，加適量上樣緩沖液，煮沸變性3 min。10%聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白后濕轉(zhuǎn)到硝酸纖維素膜上，膜用5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，加入稀釋的一抗（1∶400），4℃過夜，加入稀釋的二抗（1∶2 000），室溫下孵育1 h，然后化學(xué)發(fā)光法曝光。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，利用SPSS 13.0數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，各組采用單因素方差分析法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié)果

2.1 行為學(xué)測試結(jié)果

2.1.1 逃避潛伏期的比較 模型組小鼠的逃避潛伏期（82.95±6.73）s顯著長于正常組（46.38±14.32）s（P＜0.01）；hUCMSC 2周組小鼠（80.65±12.80）s與模型組相比無差異；hUCMSC 4周組（56.01±10.37）s、H102組（49.92±9.72）s及 H102＋hUCMSC組（49.37±8.74）s顯著縮短了模型組的逃避潛伏期（P＜0.01）；H102組、H102＋hUCMSC組效果顯著好于 hUCMSC 4周組（P＜0.01，圖 1A）。

2.1.2 第三象限停留時間（RTQ） 模型組小鼠在第三象限停留的時間（16.5±4.57）s明顯少于正常組（31.79±5.75）s（P＜0.01）；hUCMSC 2周組（21.13±2.85）s較模型組略有延長（P＞0.05）；hUCMSC 4周組（22.29±3.75）s、H102組（30.56±7.58）s及 H102＋hUCMSC組（33.80±7.06）s與模型組比較延長較為顯著（P＜0.01）；H102組、H102＋hUCMSC組較hUCMSC 4周組延長更為明顯（P＜0.01，圖 1B）。

2.1.3 小鼠跨越隱匿平臺的次數(shù)及入水朝向角的比較 正常組小鼠跨越隱性平臺的次數(shù)是模型組的9.5倍（P＜0.01）；與模型組相比，hUCMSC 2周組略有增加（P＞0.05），hUCMSC 4周組（7.38±1.41）次、H102組（10.38±3.25）次及 H102＋ hUCMSC組（10.75±2.60）次顯著增多（P＜0.01）；H102組與H102＋hUCMSC組較hUCMSC 4周組增多的更為顯著（P＜0.01，圖 1C）。

模型組小鼠的入水朝向角（81.33±6.35）°顯著大于正常組（25.90±8.0）°（P＜0.01）；hUCMSC 2周組（80.87±10.80）°較模型組略有減小（P＞0.05）；hUCMSC 4周組（52.54±8.71）°、H102組（33.20±8.22）°及 H102＋hUCMSC組（31.00±10.83）°較模型組顯著減?。≒＜0.01），其中 H102組及 H102＋hUCMSC組較hUCMSC 4周組減小得更為明顯（P＜0.01，圖 1D）。

2.2 免疫組化法測定細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白及tau蛋白磷酸化相關(guān)蛋白的表達(dá)

2.2.1 Bad、Bax的免疫組化檢測 由結(jié)果可以看出模型組小鼠腦內(nèi)Bad、Bax陽性細(xì)胞面積比值（皮層：0.35±0.05，0.34±0.02；海馬：0.39±0.02，0.46±0.04）顯著高于正常組（皮層：0.13±0.04，0.09±0.01；海馬：0.18±0.032，0.21±0.01（P＜0.01）；hUCMSC 4周組（皮層：0.23±0.093，0.12±0.002；海馬：0.28±0.02，0.34±0.02）、H102組（皮層：0.13±0.04，0.10±0.01；海馬：0.18±0.02，0.21±0.05）及H102＋hUCMSC組（皮層：0.13±0.05，0.10±0.01；海馬：0.17±0.03，0.21±0.01）小鼠腦內(nèi) Bad、Bax陽性細(xì)胞比值顯著降低（P＜0.01）；H102組、H102＋hUCMSC組與hUCMSC 4周組相比降低的更為顯著（P＜0.01，圖 2見彩圖頁Ⅳ）。

Fig.1 Effect of drugs on behavior ofmice in morris watermaze test（±s，n＝8）

2.2.2 Bcl-2、Bcl-xl的免疫組化檢測 模型組小鼠腦內(nèi) Bcl-2、Bcl-xl陽性細(xì)胞面積比值（皮層：0.08±0.02，0.11±0.01；海馬：0.21±0.02，0.21±0.12）顯著低于正常組（皮層：0.33±0.05，0.34±0.02；海馬：0.41±0.02，0.43±0.02）（P＜0.01）；hUCMSC 4周組（皮層：0.24±0.02，0.22±0.02；海馬：0.32±0.03，0.35±0.04）、H102組（皮層：0.32±0.04，0.33±0.01；海馬：0.38±0.05，0.42±0.01）、H102＋hUCMSC組（皮層：0.33±0.02，0.34±0.02；海馬：0.41±0.02，0.42±0.02）較模型組蛋白表達(dá)顯著增加（P＜0.01），其中 H102組及 H102＋hUCMSC組蛋白表達(dá)明顯多于 hUCMSC 4周組（P＜0.01，圖2見彩圖頁Ⅳ）。

Fig. 2 Expressions of apoptosis relevant proteins in brain after four weeks（DAB ×400）

2.2.3 磷酸化 tau蛋白及GSK-3β的免疫組化檢測模型組小鼠腦組織中P-tau蛋白及GSK-3β的陽性細(xì)胞面積比（皮層：0.41±0.06，0.44±0.04；海馬：0.48±0.05，0.45±0.05）顯著高于正常組（皮層：0.11±0.01，0.11±0.15；海馬：0.11±0.02，0.11±0.01）（P＜0.01）；H102組（皮層：0.23±0.05，0.20±0.02；海馬：0.19±0.02，0.12±0.01）及 H102＋hUCMSC組（皮層：0.20±0.01，0.19±0.02；海馬：0.18±0.02，0.11±0.01）腦組織中 P-tau蛋白及 GSK-3β的陽性細(xì)胞面積比較模型鼠明顯降低（P＜0.01，圖3見彩圖頁Ⅳ）。

Fig. 3 Expressions of P-tau relevant proteins in brain after four weeks（DAB ×400）

2.2.4 PP-1及PP-2A的免疫組化檢測 模型組小鼠腦內(nèi)PP-1及PP-2A蛋白的陽性細(xì)胞面積比（皮層：0.09±0.02，0.10±0.01；海馬：0.12±0.02，0.10±0.02）較正常組（皮層：0.34±0.04，0.42±0.05；海馬：0.50±0.02，0.50±0.02）明顯降低（P＜0.01）；H102組（皮層：0.29±0.02，0.26±0.04；海馬：0.49±0.01，0.46±0.03）及 H102＋hUCMSC組（皮層：0.30±0.01，0.46±0.03；海馬：0.50±0.01，0.47±0.03）較模型組顯著提高（P＜0.01，圖 3見彩圖頁Ⅳ）。

2.3 Western blot測定細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白及tau磷酸化相關(guān)蛋白的表達(dá)

2.3.1 Bad、Bax及 Bcl-2蛋白表達(dá) 模型組小鼠腦內(nèi)Bad及Bax蛋白表達(dá)量分別是正常組的9.6倍、8.5倍（P＜0.01）；H102組 Bad及 Bax表達(dá)較模型組顯著減少（P＜0.01），為模型組的 11.8%、14.1%；H102＋hUCMSC組也明顯降低了模型鼠Bad及Bax表達(dá)（P＜0.01），分別為模型組的 10.7%、12.1%（圖4）。模型組小鼠腦內(nèi)Bcl-2蛋白含量顯著少于正常組（P＜0.01），為正常組的 20.2%；H102組及H102＋hUCMSC組較模型組Bcl-2表達(dá)顯著增加（P＜0.01），分別為模型組的 3.9倍、4.4倍（圖 4）。

2.3.2 磷酸化tau蛋白及PP-2A蛋白表達(dá) 與正常組相比較，APP轉(zhuǎn)基因模型組小鼠腦內(nèi)P-tau蛋白表達(dá)明顯增加（P＜0.01），為正常組的 2.8倍；H102組、H102＋hUCMSC組較模型組P-tau水平均顯著降低（P＜0.01），分別為模型組的 42.5%、41.0%；與H102組相比，H102＋hUCMSC組腦內(nèi) P-tau略有減少（P＞0.05，圖5）。模型組小鼠腦內(nèi) PP-2A的表達(dá)顯著低于正常組（P＜0.01），為正常組的 42.4%；H102組、H102＋hUCMSC組較模型組明顯提高了模型鼠腦內(nèi) PP-2A的表達(dá)（P＜0.01），為模型組的2.1倍、2.3倍（圖 5）。

Fig.4 Expressions of Bcl-2，Bad and Bax in brain after four weeks（±s，n＝8）

Fig.5 Expressions of P-tau and PP-2A in brain after four weeks（±s，n＝8）

3 討論

老年癡呆的一個重要的病理學(xué)特征就是老年斑。老年斑是由Aβ錯誤折疊聚集而形成，Aβ聚集在AD的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵性的作用，因此抑制Aβ的聚集是治療AD的一個重要途徑。β片層阻斷肽H102可與Aβ1-42的疏水氨基酸結(jié)合形成復(fù)合物，抑制了Aβ內(nèi)部β-折疊的形成和β-折疊間的相互結(jié)合，減少Aβ聚合物的沉積，從而抑制其下游病理過程。本實(shí)驗(yàn)中H102給藥組的學(xué)習(xí)記憶能力、Bcl-2、Bcl-xl、PP-2A及 PP-1的含量明顯高于模型組，Bad、Bax、P-tau及 GSK-3β的含量明顯低于模型組，說明β片層阻斷肽H102有治療AD的作用。

在AD患者腦內(nèi)tau蛋白發(fā)生異常高度磷酸化，聚集形成不可溶的纖維狀纏結(jié)，進(jìn)而引起神經(jīng)損害，最終導(dǎo)致AD患者神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變，智能廣泛退化、記憶力缺失等一系列行為學(xué)的改變，因此tau蛋白在神經(jīng)退行性病變過程中同樣起著重要作用。tau蛋白的異常磷酸化主要與糖原合酶激酶 3β（glycogen synthase kinase-3β，GSK-3β）和蛋白磷酸酶（protein phosphatase，PP-1及 PP-2A）的調(diào)節(jié)失衡有關(guān)。已知在體外，GSK-3β可使tau蛋白中某些位點(diǎn)異常磷 酸 化，如 Ser199、Ser396、Ser400、Ser404、Ser422，特別是 Thr231磷酸化［4，5］，而蛋白磷酸酯酶PP-2A、PP-1可以使磷酸化的tau蛋白在不同位點(diǎn)去磷酸化。AD患者的腦組織中，GSK-3β的活性明顯增加［6］，PP-1、PP-2A活性下降，且 PP-2A還可通過使GSK-3β去磷酸化而激活 GSK-3β，因此 PP-2A在tau蛋白磷酸化反應(yīng)上起著重要作用［7］。

有學(xué)者證明，Aβ的低聚物可激活GSK-3β、促進(jìn)tau蛋白的過度磷酸化［8］。本實(shí)驗(yàn)中我們通過APP轉(zhuǎn)基因小鼠側(cè)腦室注射藥物H102及聯(lián)合干細(xì)胞移植檢測了P-tau蛋白、GSK-3β、PP-2A及 PP-1酶類的變化，由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，H102注射組、H102與干細(xì)胞聯(lián)合應(yīng)用組腦組織中的P-tau、GSK-3β較模型組小鼠明顯降低，而PP-2A、PP-1顯著增多，說明通過抑制Aβ聚集可以減少NFT的形成。因此，本研究豐富與補(bǔ)充了Aβ級聯(lián)假說與tau蛋白學(xué)說，為臨床上以tau蛋白、GSK-3β、PP-2A、PP-1為靶點(diǎn)，治療某些神經(jīng)退行性疾病和精神性疾病以及篩選自主研制創(chuàng)新生物藥提供了廣闊的前景。

與認(rèn)知、記憶有關(guān)的中樞膽堿能神經(jīng)元主要分布在基底前腦的Meynert核和內(nèi)側(cè)隔核，通過邊緣系統(tǒng)和大腦皮層調(diào)節(jié)學(xué)習(xí)記憶過程。在AD患者腦內(nèi)的膽堿能神經(jīng)元減少，導(dǎo)致乙酰膽堿的合成、儲存和釋放減少，造成學(xué)習(xí)記憶能力的減退，從而造成了認(rèn)知功能障礙。若將能合成乙酰膽堿的細(xì)胞植入前腦基底核或海馬，理論上講是可以起到明顯的治療作用。且有大量實(shí)驗(yàn)已經(jīng)證明某些部位的神經(jīng)母細(xì)胞或分裂后的年幼神經(jīng)元能夠部分重建神經(jīng)環(huán)路和功能。

2000年，Woodbury等［9］首次報道了人和嚙齒類動物臍帶MSC可在體外分化形成神經(jīng)元表型的細(xì)胞。謝岷等研究表明，正常鼠和缺氧缺血性腦病損傷新生大鼠的腦組織上清液均能在體外誘導(dǎo)臍帶MSC發(fā)生神經(jīng)分化，為臍帶MSC治療神經(jīng)退行性疾病帶來了希望和曙光。進(jìn)一步的研究表明臍帶MSC體外誘導(dǎo)可分化形成膽堿能神經(jīng)元表型的細(xì)胞，Mohsen Marzban等通過靜脈注射hUCMSC治療大鼠腦損傷模型，發(fā)現(xiàn)治療組腦內(nèi)神經(jīng)營養(yǎng)因子分泌增多［10］。

神經(jīng)元凋亡普遍存在于各種腦神經(jīng)系統(tǒng)疾病的病理過程中。老年癡呆患者腦內(nèi)存在大量凋亡的神經(jīng)元，這是神經(jīng)元減少、認(rèn)知記憶功能減退的主要原因之一。在調(diào)節(jié)神經(jīng)元凋亡的相關(guān)蛋白中，Bad、Bax兩種蛋白可促進(jìn)細(xì)胞凋亡；Bcl-2、Bcl-xl是抗凋亡分子，具有抑制細(xì)胞凋亡的作用。Aβ對神經(jīng)元有直接導(dǎo)致凋亡的作用，也可能通過促進(jìn)自由基的形成、破壞細(xì)胞內(nèi)的鈣離子穩(wěn)態(tài)，降低K＋通道的功能，增強(qiáng)活性分子的介導(dǎo)作用誘導(dǎo)神經(jīng)元凋亡。

在本次實(shí)驗(yàn)中，注射hUCMSC 4周后明顯改善了AD小鼠的記憶能力，降低了促細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白Bad、Bax含量，增加了抑制細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白Bcl-2、Bcl-xl的含量，這有力地說明了hUCMSC發(fā)揮了作用，其機(jī)制可能是hUCMSC在腦中分化為成熟的有功能的細(xì)胞，而且在細(xì)胞之間建立了聯(lián)系，可以協(xié)同參與信號的傳遞，也可能是通過分泌神經(jīng)生長因子等營養(yǎng)因子來發(fā)揮作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示抑制凋亡的相關(guān)蛋白如Bcl-2，Bcl-xl蛋白在模型組顯著減少，在H102組、H102＋hUCMSC組明顯的增加，而促進(jìn)細(xì)胞凋亡的相關(guān)蛋白如Bad，Bax蛋白在模型組顯著增加，在H102組、H102＋hUCMSC組明顯的減少。這有力地說明了H102在阻止細(xì)胞凋亡的過程中起到了明顯的作用，H102與hUCMSC組聯(lián)合應(yīng)用較單獨(dú)給藥組在抑制細(xì)胞凋亡作用上略有提高。

由于hUCMSC定向分化成膽堿能神經(jīng)元的量較少，如果在體外將臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化形成膽堿能神經(jīng)元再進(jìn)行移植可能會取得更為理想的效果。移植干細(xì)胞治療AD的方法有待進(jìn)一步研究。

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