百合多糖抑制博來霉素致肺纖維化小鼠肺組織MMP-9及TIMP-2的表達

駱亞莉，程小麗，王雅莉，李能蓮，舍雅莉，李 屹

(1.甘肅中醫(yī)學院基礎課部病理學教研室，甘肅蘭州730000;2.蘭州大學基礎醫(yī)學院遺傳學研究所，甘肅蘭州730000)

肺纖維化死亡率高，百合對其治療的研究鮮見。本實驗觀察百合多糖可否影響肺組織基質金屬蛋白酶-9(matrix metalloproteinases，MMP-9)及其抑制劑-2(tissue inhibitor of metalloproteinases，TIMP-2)的表達從而發(fā)揮干預肺纖維化形成的作用。

1 材料與方法

1.1 材料:SPF 級昆明種小鼠84 只，雌雄各半。甘肅中醫(yī)學院實驗動物中心提供，質量合格證號SCXK(甘)2011-0001。博萊霉素(bleomycin，BLM)粉針劑購于哈爾濱萊博通藥業(yè)，批號110424。0.9%氯化鈉注射液溶解，終濃度為1.6 g/L。百合飲片購自甘肅蘭州惠特藥業(yè)，醇沉法提取百合多糖(lily polysaccharide，LP)，純度60%，蒸餾水配制為10 g/L。強的松(prednisolone acetate，PA)浙江仙琚制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號110428，蒸餾水配制為1.82 g/L。

兔抗小鼠MMP-9、TIMP-2 單克隆抗體、DAB 顯色試劑盒均購于武漢博士德公司。羥脯氨酸(hydroxyproline，HYP)試劑盒購于南京建成生物工程有限公司。

1.2 方法:動物隨機分為百合多糖組(BLM +LP)、模型組(BLM)、強的松組(BLM + PA)、對照組(control)，各21 只。除對照組外均經(jīng)氣管注入BLM 0.05 mL，對照組注入等量0.9%氯化鈉注射液。24 h后治療組分別用0.5 mL百合多糖及強的松灌胃，劑量按臨床用量換算。第7、14、28 天按試劑盒說明檢測肺組織MMP-9、TIMP-2 的表達。第28 天行HE染色并測HYP 含量。

用SPSS 14.0 軟件行One-Way ANOVA，組間比較用t檢驗。

2 結果

2.1 動物體質量(g):模型組體質量為25 ±2 g顯著低于對照組38 ±3 g (P＜0.05)。強的松干預組及百合多糖干預組體重顯著回升，分別為34 ±1 g及33 ±2 g (P＜0.05)。

2.2 肺組織HYP 含量(mg/g):模型組肺組織HYP 含量1.15 ±0.23 mg/g 顯著高于對照組0.51 ± 0.09 mg/g(P＜0.05)。強的松干預組及百合多糖干預組肺組織HYP 含量顯著低于模型組，分別為0.70 ± 0.13 mg/g 及0.73 ±0.05 mg/g(P＜0.01)。

2.3 病理變化:模型組肺泡間隔顯著增寬，有較多的單核細胞、淋巴細胞浸潤，肺泡腔明顯縮小，肺間質被膠原纖維和成纖維細胞替代，肺間質纖維化形成。百合多糖組及強的松組肺泡間隔增寬較模型組明顯減輕，炎性細胞浸潤少，肺泡腔有囊狀改變。

2.4 MMP-9、TIMP-2 的表達:各組均可見二者陽性表達，對照組少量染色陽性，MMP-9 主要分布于肺泡巨噬細胞和支氣管上皮細胞，TIMP-2 在肺泡和支氣管上皮細胞表達較強。模型組MMP-9 陽性表達主要分布于肺泡、支氣管上皮細胞，TIMP-2陽性表達分布于肺泡及間質巨噬細胞、肺泡及支氣管上皮細胞、成纖維細胞。治療組二者表達均降低(表1，圖1)。

表1 不同時間點MMP-9 及TIMP-2 平均吸光度Table 1 The average optical density of MMP-9 and TIMP-2 protein at different time points(A value，n=6)

圖1 第28 天MMP-9 及TIMP-2 蛋白表達Fig 1 The expressions of MMP-9 and TIMP-2 protein at 28th d(10 ×40)

3 討論

百合可潤肺、補肺氣，其多糖具抗氧化、增強免疫力等作用［1］。

報道稱，MMPs 及其抑制劑TIMPs 在以膠原為主的細胞外基質的降解與重塑過程中發(fā)揮重要作用，低MMPs 高TIMPs 表達促使膠原不易降解，引起肺纖維化［2］。

本實驗結果表明在肺纖維化早期，大量炎癥細胞聚集并釋放炎性介質，促進MMP-9 合成，TIMP-2 隨MMP-9 蛋白表達升高而升高，維持MMP-9 /TIMP-2 比例，膠原降解;隨肺纖維化發(fā)展，炎性細胞分泌減少，MMP-9 合成減少，TIMP-2表達升高，二者比例失衡，膠原降解減少而大量沉積，與參考文獻相符。百合多糖能抑制纖維化模型肺組織MMP-9 與TIMP-2 蛋白表達，改善二者失衡，減少膠原沉積，從而延緩肺纖維化的發(fā)展。

［1］王多寧，張小莉，楊穎，等．百合多糖對羥自由基的清除作用［J］．陜西中醫(yī)學院學報，2006，29:53－55．

［2］Dancer RC，Wood AM，Thickett DR．Metalloproteinases in idiopathic pulmonary fibrosis［J］．Eur Respir J，2011，38:1461－1467．