SIRT3表達(dá)水平與肝癌患者預(yù)后關(guān)系

尚 麗，李淑紅，趙 霞，王麗萍，呂永川，王彥風(fēng)

（河北省衡水市第四人民醫(yī)院消化內(nèi)科，河北衡水053000）

·論 著·

SIRT3表達(dá)水平與肝癌患者預(yù)后關(guān)系

尚 麗，李淑紅，趙 霞，王麗萍，呂永川，王彥風(fēng)

（河北省衡水市第四人民醫(yī)院消化內(nèi)科，河北衡水053000）

目的探討去乙酰化酶（sirtuin 3，SIRT3）在肝癌組織中的表達(dá)與肝癌患者預(yù)后的關(guān)系。方法取原發(fā)性肝癌腫瘤組織80例，用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)腫瘤組織SIRT3的表達(dá)水平，生存曲線分析采用Kaplan-Meier方法，組間生存率比較采用Log-rank檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)果研究發(fā)現(xiàn)肝癌患者中SIRT3高表達(dá)組術(shù)后生存率低，相反，SIRT3低表達(dá)組術(shù)后生存率高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論原發(fā)性肝癌組織中SIRT3表達(dá)水平與患者生存率呈負(fù)相關(guān)，SIRT3表達(dá)在原發(fā)性肝癌的預(yù)后中具有重要作用。

SIRT-3；原發(fā)性肝癌；預(yù)后

原發(fā)性肝癌是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率和病死率均位居世界前列，每年有大約50萬(wàn)人死于該?。?］。其治療手段包括根治性手術(shù)切除、射頻消融、肝動(dòng)脈灌注化療栓塞術(shù)、放療等，目前原發(fā)性肝癌的臨床診斷治療有了快速發(fā)展，但其易復(fù)發(fā)、預(yù)后差的情況仍未明顯改觀，并且其致病原因及發(fā)病機(jī)制尚未完全明確［2］。目前認(rèn)為肝癌的發(fā)生是一個(gè)多因素、多步驟、多基因共同參與的復(fù)雜過程，其發(fā)病重要的危險(xiǎn)因素除了包括慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎、酒精損害外，氧化損傷、染色體不穩(wěn)定性、基因的單核苷酸多態(tài)性等因素都與原發(fā)性肝癌發(fā)病過程有關(guān)［3］。越來(lái)越多的學(xué)者建議在基因及分子水平尋找新的治療手段，以提高原發(fā)性肝癌患者的生存率。本研究探討SIRT3蛋白在肝癌組織中的表達(dá)量高低與肝癌患者預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1．1 研究資料：選擇2007年9月—2008年9月間，在河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院肝膽外科住院的手術(shù)患者80例，臨床診斷為原發(fā)性肝癌，行手術(shù)切除前均未進(jìn)行化療或放療，行原發(fā)性肝癌根治手術(shù)，術(shù)后病理皆明確診斷為肝細(xì)胞癌，手術(shù)切除的腫瘤組織標(biāo)本－80℃超低溫冰箱保存。80例患者中男性69例，女性11例，年齡23～74歲，平均55.8歲。收集

患者肝炎病史、飲酒史、家族史等，登記患者凝血功能、肝功能、甲胎蛋白、鐵蛋白等實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果，并記錄患者腫瘤數(shù)目、大小、病理類型、分化程度等病理學(xué)資料；術(shù)后每3個(gè)月電話隨訪1次患者術(shù)后生存情況，共隨訪3年。

1．2 研究方法：取手術(shù)切除的肝癌組織標(biāo)本放入10％甲醛中固定24h，常規(guī)石蠟包埋，切成4μm厚切片。用免疫組織化學(xué)SP法測(cè)定肝癌組織標(biāo)本中SIRT3表達(dá)。依次經(jīng)脫蠟、梯度水化、0.01mmol/L的枸櫞酸緩沖液微波抗原熱修復(fù)、3％H2O2溶液室溫下孵育10min、PBS振洗、山羊血清封閉、PBS振洗，滴入多克隆兔抗人SIRT-3抗體（香港Abcam公司）（1∶100）、濕盒內(nèi)4℃孵育過夜。再用PBS振洗、滴加親和素過氧化物酶復(fù)合物37℃濕育30min。最后用PBS振洗，光學(xué)顯微鏡下DAB試劑盒顯色。蘇木精復(fù)染、脫水、中性樹膠封片。用PBS代一抗做陰性對(duì)照，免疫組織化學(xué)染色有棕黃色或棕褐色顆粒者為陽(yáng)性表達(dá)。光學(xué)顯微鏡下觀察不同組別肝癌組織中SIRT3表達(dá)情況。

1．3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷：免疫組織化學(xué)結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)，光鏡下，SIRT3蛋白表達(dá)主要定位在細(xì)胞線粒體。由2名病理學(xué)專家用HSCORE法判定SIRT3表達(dá)量的高低。

1．4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)數(shù)資料以百分率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；生存曲線分析采用Kaplan-Meier方法，組間生存率比較采用Log-rank檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

研究結(jié)果顯示，患者性別、年齡與術(shù)后生存時(shí)間無(wú)關(guān)（P＞0.05），而腫瘤大小、腫瘤數(shù)目、Child分級(jí)、腫瘤分期、有無(wú)門脈瘤栓均與患者的生存時(shí)間有關(guān)（P＜0.01）。表明腫瘤大小、腫瘤數(shù)量、Child分級(jí)、TNM臨床分期、有無(wú)門靜脈瘤栓均與原發(fā)性肝癌患者的預(yù)后有關(guān)。見表1。

表1 肝癌患者臨床特征和術(shù)后生存率的關(guān)系Table 1 Correlation between clinical characteristics and post-operative survival in hepatocellu lar carcinoma patients（n，％）

SIRT3蛋白大部分存在于線粒體基質(zhì)中，少量存在于細(xì)胞核中，陽(yáng)性染色的線粒體中呈現(xiàn)出黃色細(xì)顆粒。根據(jù)SIRT3表達(dá)量高低，原發(fā)性肝癌患者分為SIRT3高表達(dá)組和SIRT3低表達(dá)組。SIRT3在2組肝癌患者中的表達(dá)量存在顯著差異（圖1）。SIRT3高表達(dá)組生存曲線較低，說明其生存率較低，而SIRT3低表達(dá)組的生存曲線較高，說明其生存率較高，SIRT3高表達(dá)組患者生存率顯著低于低表達(dá)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.045）。

3 討 論

Sirtuins是一類高度保守的煙酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide ade nine dinucleotide，NAD＋）依賴的去乙?；傅募易濉irtuins共有7個(gè)同源蛋白，分別命名為SIRT1～7，由于它們基因的高度保守性，它們?cè)谌祟惛鞣N組織中都有分布。Sirtuins在抗凋亡、能量代謝、細(xì)胞氧化狀況、有絲分裂調(diào)控等方面發(fā)揮重要的作用，是調(diào)節(jié)細(xì)胞壽命的關(guān)鍵因素，是腫瘤、退行性疾病等疾病的發(fā)病機(jī)制［4－5］。

SIRT3是Sirtuins重要成員之一，大部分存在于線粒體基質(zhì)中，少量存在于細(xì)胞核中［6］。SIRT3是線粒體中主要的去乙酰化酶。它通過調(diào)控多種線粒體蛋白的乙?；揎?，從而影響細(xì)胞內(nèi)的活性氧水平和能量代謝水平，而活性氧對(duì)生物大分子（特別是DNA）的氧化損傷被認(rèn)為是啟動(dòng)和促進(jìn)腫瘤發(fā)生的重要因素。SIRT3已被確認(rèn)是調(diào)節(jié)能量平衡的關(guān)鍵，SIRT3的缺乏會(huì)導(dǎo)致線粒體過度乙?；斐删€粒體功能改變，進(jìn)而造成細(xì)胞能量代謝、有絲分裂等方面出現(xiàn)異常。SIRT3在乳腺癌及其他多種腫瘤中的表達(dá)水平均有不同程度的下降，所以SIRT3可能作為線粒體內(nèi)的腫瘤抑制因子存在，它通過抑制活性氧水平及缺氧誘導(dǎo)因子達(dá)到抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用［7－8］。

但是，目前SIRT3在腫瘤中起到抑制還是促進(jìn)作用尚存在爭(zhēng)議。SIRT3可促進(jìn)細(xì)胞分裂速度，加快細(xì)胞增殖；SIRT3的過量表達(dá)使腫瘤細(xì)胞間黏附性下降，易發(fā)生遷移；還可能通過對(duì)代謝產(chǎn)生的各種影響，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的存活。有學(xué)者報(bào)道SIRT1和SIRT3在淋巴結(jié)陽(yáng)性的乳腺癌中轉(zhuǎn)錄水平增高［9］。這與前文中考慮SIRT3為線粒體內(nèi)腫瘤抑制因子的結(jié)論矛盾。SIRT3是否在腫瘤的發(fā)展過程中的不同階段分別起到抑制或促進(jìn)的作用，還有待進(jìn)一步確認(rèn)。

本研究結(jié)果顯示，肝癌組織中SIRT3高表達(dá)生存率較低，而SIRT3低表達(dá)生存率較高，即肝癌組織SIRT3表達(dá)水平高低與原發(fā)性肝癌患者術(shù)后生存時(shí)間與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)?？紤]可能與細(xì)胞中大量活性氧引起細(xì)胞大分子氧化損傷，肝癌腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)較快，引起SIRT3反應(yīng)性的表達(dá)量增高有關(guān)；SIRT3高表達(dá)發(fā)揮其抗凋亡作用，并可以促進(jìn)細(xì)胞分裂速度加快，從而加快了細(xì)胞的增殖、促進(jìn)細(xì)胞存活，也可能是SIRT3高表達(dá)組生存率較低的原因；SIRT3過量表達(dá)還使腫瘤細(xì)胞黏附性下降，遷徙速度加快，使腫瘤較早發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，降低原發(fā)性肝癌患者生存期。

對(duì)SIRT3在腫瘤組織發(fā)生發(fā)展中作用的研究仍處于初級(jí)階段，以往研究多集中在測(cè)定SIRT3在肝癌組織及正常肝組織的表達(dá)水平差異，以明確SIRT3是否作為線粒體內(nèi)的腫瘤抑制因子存在。本研究是探討肝癌SIRT3的表達(dá)水平高低與肝癌患者生存期的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)肝癌組織中SIRT3的表達(dá)水平影響原發(fā)性肝癌患者的預(yù)后，結(jié)果令人鼓舞。

綜上所述，SIRT3在原發(fā)性肝癌發(fā)生和發(fā)展中可能發(fā)揮重要的作用，為以SIRT3為靶點(diǎn)的藥物研制提供了新的方向，為未來(lái)肝癌治療提供了新思路，對(duì)于術(shù)后肝癌患者預(yù)后評(píng)估有很大的潛在價(jià)值。

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（本文編輯：劉斯靜）

圖1 CT下金屬異物

圖2 胃鏡下金屬異物

討 論膽囊結(jié)石患者臨床較為常見，合并十二指腸金屬異物者罕見?；颊咭蚰懩医Y(jié)石引發(fā)膽囊炎，出現(xiàn)上腹疼痛癥狀來(lái)診，檢查發(fā)現(xiàn)十二指腸金屬異物。上消化道異物來(lái)源及分布：①無(wú)意吞服，兒童誤吞，如硬幣、筆帽、金屬墊圈、發(fā)卡、玻璃球等，一般位于胃內(nèi)，少數(shù)可卡在食管；成年人以老年人為主，其中以魚刺、雞骨頭、棗核、活動(dòng)義齒多見，多位于食管內(nèi)。②故意吞服，勞改人員及犯罪嫌疑人，為了逃避改造或打擊，故意吞服一切可以吞服的物品，如鐵絲、螺絲、鐵釘、刮胡刀片、打火機(jī)、簽字筆、勺把、牙刷、筷子等，此類多位于胃內(nèi)［1］。本例異物來(lái)源追尋，經(jīng)詳細(xì)詢問患者，家中有鐵絲制成的金屬洗菜籃，已陳舊并發(fā)現(xiàn)有鐵絲缺失。取出異物，考慮為金屬洗菜籃部分鐵絲斷裂，入菜后誤食，異物插入十二指腸降段后壁?；颊叩奶厥庑栽谟谑改c降段內(nèi)異物并未引起任何不適癥狀，異物尖端也非針尖樣銳利，未刺入腹腔或者血管內(nèi)，給內(nèi)鏡下異物取出創(chuàng)造了有利條件，避免了開腹手術(shù)的痛苦。開腹手術(shù)可一次性解決膽囊切除及十二指腸異物取出，但手術(shù)損傷大，不但要行常規(guī)的膽囊切除，還要將十二指腸前壁切開，尋找并取出異物，術(shù)后需長(zhǎng)時(shí)間恢復(fù)。隨著腹腔鏡及消化內(nèi)鏡的發(fā)展，微創(chuàng)治療成為了臨床醫(yī)生及患者的首選［2］。但首先需要有豐富經(jīng)驗(yàn)的臨床外科醫(yī)生，并做好充分準(zhǔn)備，一旦胃鏡取異物的過程中出現(xiàn)內(nèi)鏡下不可治療的止血、腸漏等特殊情況則立即開腹手術(shù)。其次科室間協(xié)作很重要，胃鏡有可能無(wú)法到達(dá)異物所在位置，最終仍需外科手術(shù)治療，取異物最好在手術(shù)室進(jìn)行，一旦出現(xiàn)如大出血等并發(fā)癥可在第一時(shí)間急救，使患者的風(fēng)險(xiǎn)降到最低［3］。總之良好的外科功底，優(yōu)良的手術(shù)技能，完備的手術(shù)器械，豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)，術(shù)前制定嚴(yán)密的治療預(yù)案是成功治療此類患者的保障。

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（本文編輯：劉斯靜）

ASSOCIATION OF EXPRESSION OF SIRT3W ITH
HEPATOCELLULAR CARCINOMA PROGNOSIS

SHANG Li，LIShuhong，ZHAO Xia，WANG Liping，LV Yongchuan，WANG Yanfeng
（Department of Gastrointestinal，the Fourth People′s Hospital of Hengshui City，Hebei Province，Hengshui053000，China）

Objective To explore the association of the expression of sirtuin 3（SIRT3）with hepatocellular carcinoma prognosis.MethodsSIRT3 in specimens resected from 80 hepatocellular carcinoma（HCC）tissueswere detected by immunohistochemicalmethod.Survival curveswere calculated using the Kaplan-Meiermethod，and comparisons between the curvesweremade using the Log-rank test.ResultsThe survival rate of SIRT3 overexpression group was low，conversely，the survival rate of SIRT3 low expression group was high，the differencewas statistically significant（P＜0.05）.ConclusionThere is a negative correlation between the expression of SIRT3 in HCC tissues and the survival time of patients with HCC，and the expression of SIRT3 may play a very important role in the prognosis of HCC.

SIRT3；hepatocellular carcinoma；prognosis

R735.7

A

1007-3205（2013）05-0515-04

2012－10－22；

2012－11－30

尚麗（1975－），女，河北衡水人，河北省衡水市第四人民醫(yī)院主治醫(yī)師，醫(yī)學(xué)學(xué)士，從事消化內(nèi)科疾病診治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2013.05.008