精液液化延遲患者精漿KLK2、KLK3、KLK5的變化

邵雪峰

江蘇省太倉(cāng)市第一人民醫(yī)院泌尿外科，江蘇 太倉(cāng) 215400

精液液化延遲患者精漿KLK2、KLK3、KLK5的變化

邵雪峰

江蘇省太倉(cāng)市第一人民醫(yī)院泌尿外科，江蘇 太倉(cāng) 215400

目的：研究精漿KLK2、KLK3、KLK5在精液液化過(guò)程中所起的作用與意義。方法：選取液化延遲患者43例為液化延遲組，液化正?；颊?8例為對(duì)照組。測(cè)定精漿KLK2、KLK3、KLK5水平，兩組對(duì)比。結(jié)果：液化延遲組精漿KLK2、KLK3明顯低于對(duì)照組，P＜0.05。KLK5略低于對(duì)照組，P＝0.067。結(jié)論：KLK2、KLK3、KLK5的濃度變化與精液液化時(shí)間具有密切相關(guān)性，在精液液化過(guò)程中起重要生理作用。

精液液化；激肽釋放酶；不育

人激肽釋放酶（Human kallikrein－related peptidases，KLKs）是一組絲氨酸蛋白酶。精漿KLK2、KLK3、KLK5由前列腺分泌，具有蛋白水解作用，在精液液化過(guò)程中起重要作用。本文通過(guò)對(duì)比精液液化延遲患者與正?；颊呔珴{KLK2、KLK3、KLK5濃度的變化，來(lái)研究其在精液液化過(guò)程中所起的作用與意義。

1 對(duì)象與方法

1.1 病例資料 按WHO規(guī)定，新采集的精液標(biāo)本在室溫（25℃）60 min內(nèi)發(fā)生液化，若超過(guò)60 min仍未液化，則稱為精液液化延遲。在2010年至2012年我院門診行精液分析的患者中，選取液化延遲患者82例為病例組（液化延遲組），年齡25～37歲，平均（29±7）歲；選取液化正常者64例為對(duì)照組，年齡24～35歲，平均（28±5）歲。

1.2 方法 禁欲3～5天，手淫取精，記錄液化時(shí)間。如精液1.5小時(shí)不液化，加入糜蛋白酶促液化。精液液化后按試劑盒步驟，ELISA法檢測(cè)精漿KLK2、KLK3、KLK5，試劑盒購(gòu)自上海藍(lán)基生物科技有限公司。

1.3 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （±s）表示，兩均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩組精漿KLK2、KLK3、KLK5檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。液化延遲組患者精漿KLK2、KLK3水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。液化延遲組患者精漿KLK5略低于對(duì)照組，但差異不夠顯著。

表1 兩組精漿KLK2、KLK3、KLK5的比較

3 討論

正常精液是一種混合物，其中60%以上由精囊分泌，20%～30%來(lái)自前列腺，附睪液及精子約占10%，少量由尿道球腺分泌。精液液化是由一系列的蛋白水解酶所介導(dǎo)，而這些蛋白水解酶主要由前列腺所分泌［1－2］。當(dāng)前列腺出現(xiàn)病變，這些蛋白水解酶分泌不足，可導(dǎo)致不育［3－4］。人激肽釋放酶 （KLKs）屬絲氨酸蛋白酶，是精液中主要的蛋白水解酶。目前發(fā)現(xiàn)KLKs共有15個(gè)成員，存在于不同組織和生物液體中。精液KLKs由前列腺組織的腺泡和管狀上皮細(xì)胞合成分泌，大部分的KLKs在人精液中都能檢測(cè)到，并且通過(guò)高度受控的級(jí)聯(lián)蛋白激活機(jī)制在精液液化中起重要作用［5］。

KLK3即PSA，已有研究證實(shí)，精液液化延遲與精漿KLK3水平降低有關(guān)［6－7］，本研究中，精液液化延遲患者精漿KLK3明顯低于對(duì)照組，結(jié)果與之相符。由于精囊腺分泌的凝固蛋白SgⅠ、SgⅡ及纖維蛋白形成團(tuán)塊阻礙精子活動(dòng)，精液射出后在5到20分鐘內(nèi)凝固?；罨腒LK3具有極強(qiáng)的類胰蛋白酶和類酯酶樣活性，主要裂解凝固蛋白SgⅠ、SgⅡ等，從而使精液液化。精漿KLK3水平下降可直接導(dǎo)致精液液化延遲。

此外，精液液化延遲組精漿KLK2同樣顯著低于對(duì)照組，KLK5較對(duì)照組也有下降，但差異不夠顯著 （P＝0.067）。KLK2及KLK5也具有一定的蛋白水解作用［8］，并且在KLK3級(jí)聯(lián)激活過(guò)程中起到重要作用。起初前列腺分泌的KLK2、3、5與Zn離子可逆性結(jié)合而處于失活狀態(tài)［9］，當(dāng)其與精囊腺分泌物混合，Zn與Sg蛋白結(jié)合而再分布，KLK5自動(dòng)激活，并介導(dǎo)一系列的級(jí)聯(lián)蛋白水解反應(yīng)激活KLK3［8］。此外，KLK2也可通過(guò)去除7個(gè)氨基酸的方式自動(dòng)激活，繼而激活KLK3［10］。目前發(fā)現(xiàn)KLK5可通過(guò)自身裂解的方式失活，繼而使KLK3失活，以此下調(diào)KLK3的活性。KLK2也可被KLK5抑制失活。除KLK5之外，目前尚未發(fā)現(xiàn)其他促使KLK3失活的途徑［11］。

綜上所述，KLK3在精液液化過(guò)程中起到重要作用，KLK3的活化與KLK2、KLK5的關(guān)系密切。本研究中精液液化延遲組KLK2、3、5較對(duì)照組均下降，可能的原因?yàn)榍傲邢俟δ艿拖?、腺管堵塞，或其他一些病理因素，?dǎo)致KLKs合成分泌量下降、級(jí)聯(lián)激活過(guò)程受到影響。因此，精漿KLK2、3、5的檢測(cè)具有重要意義，可作為診治男性不育、精液液化延遲的重要參考指標(biāo)。

［1］Robert，M.and Gagnon，C..Semenogelin I：a coagulumforming，multifunctional seminal vesicle protein.Cell.Mol.Life Sci.1999，55，944－960.

［2］Lwaleed，B.A.，Greenfield，R.，Stewart，A.，Birch，B.，and Cooper，A.J..Seminal clotting and fibrinolytic balance：a possiblephysiological role in themale reproductive system.Thromb.Haemost.2004，92，752－766.

［3］Mandal，A.and Bhattacharyya，A.K..Relationshipbetween the coagulation－liquefaction property of humanejaculates and their volume，sperm count and motility.Clin.Reprod.Fertil.1987，5，367－371.

［4］Mandal，A.and Bhattacharyya，A.K..Biochemical parametersof slowly liquefying human ejaculates.Arch.Androl.1988，20，141－145.

［5］Emami，N.and Diamandis，E.P..New insights into thefunctionalmechanisms and clinical applications of the kallikrein－related peptidase family.Mol. Oncol.2007，1，269－287.

［6］楊國(guó)宗，朱培元，胡毓安，等.不育病人精漿前列腺特異性抗原的檢測(cè)及意義［J］.中華男科學(xué)，2003，9（8）：596－598.

［7］N Emami，A Scorilas，A Soosaipillai，etal.Association between kallikreinrelated peptidases（KLKs）and macroscopic indicators of semen analysis：their relation to sperm motility［J］.Biol.Chem.，2009，390.921－929.

［8］M.Brattsand，K.Stefansson，C.Lundh，Y.Haasum，T.Egelrud，Aproteolytic cascade of kallikreins in the stratum corneum，J.Invest.Dermatol.2005，124 198－203.

［9］G.M.Yousef，E.P.Diamandis，The new human tissue kallikrein genefamily：structure，function，and association to disease，Endocr.Rev.2001，22：184－204.

［10］T.K.Takayama，B.A.McMullen，P.S.Nelson，M.Matsumura，K. Fujikawa，Characterization of hK4（prostase），a prostate specificserine protease：activation of the precursor of prostate specific antigen（PSA）and single－chain urokinase－type plasminogen activator anddegradation of prostatic acid phosphatase，Biochemistry 2001，40：15341－15348.

［11］I.P.Michael，G.Pampalakis，S.D.Mikolajczyk，J.Malm，G.Sotiropoulou，E.P.Diamandis，Human tissue kallikrein 5 is a member of aproteolytic cascade pathway involved in seminal clot liquefaction andpotentially in prostate cancer progression，J.Biol.Chem.2006，281：12743－12750.

Variation of semen KLK 2，KLK 3，KLK5 in patients of delayed semen liquefaction

SHAO Xue－feng
Department of Urology，The first people’s hospital of Taicang

Objective：To research the effect and relationship of semen KLK2，KLK3，KLK5 during semen liquefaction.Methods：semen KLK2，KLK3，KLK5 were checked and compared between 43 delayed liquefaction patients and 38 healthy men as control group.Results：semen KLK2 and KLK3 were decreased significantly in delayed liquefaction patients，P＜0.05.Semen KLK5 was lower in delay liquefaction patients than the control group，P＝0.067.Conclusion：KLK2，KLK3，KLK5 play important roles in semen liquefaction.

semen liquefaction，kallikrein－related peptidases，infertility

R698.2

A

1007－8517（2013）10－0079－02

2013.04.12）