RP-HPLC測(cè)定藥流凈顆粒中三七皂苷R1與人參皂苷Rg1、Rb1的含量

楊學(xué)芳 蘇萬福 唐曉霞 吳 菲

江蘇濟(jì)川制藥有限公司，江蘇 泰興 225441

RP-HPLC測(cè)定藥流凈顆粒中三七皂苷R1與人參皂苷Rg1、Rb1的含量

楊學(xué)芳 蘇萬福 唐曉霞 吳 菲

江蘇濟(jì)川制藥有限公司，江蘇 泰興 225441

目的：建立藥流凈顆粒中三七皂苷R1與人參皂苷Rg、Rb1的含量測(cè)定方法。方法：采用反相高效液相色譜法，色譜柱為Phenomenex Luna C18（2）（5μm，250mm×4.60mm），流動(dòng)相為乙腈（A）和水（B），梯度洗脫；A相含量隨時(shí)間的變化為17%（0～8min），17%～22%（8～15min），22%（15～28min），22%～26%（28～38min），26%～31%（38～40min），31%～38%（40～50min），38%（50～60min）；流速為1ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm，柱溫為20℃。結(jié)果：三七皂苷R1濃度為76～1211μg/ml、人參皂苷Rg1濃度為83～1334μg/ml、人參皂苷Rb1濃度為95～1514μg/ml時(shí)，線性關(guān)系良好（rR1＝0.9998、rRg1＝0.9999、rRb1＝0.9999）；加樣回收率（n＝3）分別為98.36%、99.83%、98.81%。結(jié)論：本方法準(zhǔn)確、快速、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好，可用于藥流凈顆粒的質(zhì)量控制。

三七；三七皂苷R1；人參皂苷Rg1；含量

三七為五加科植物，含有大量的三七皂苷、三七多糖、黃酮等有效成分。具有散瘀止血，消腫定痛的作用。用于咯血，衄血，外傷出血，胸腹刺痛，跌撲腫痛［1］。其制劑藥流凈顆粒以三七為主要含量測(cè)定指標(biāo)，包括三七在內(nèi)的十余種中藥。目前有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道測(cè)定三七皂苷的方法有薄層掃描法、高效液相色譜法 （HPLC）等［2－3］。筆者采用RP－HPLC法測(cè)定三七中活性成分三七皂苷R1、人參皂苷Rg1及Rb1的含量，方法快速，結(jié)果準(zhǔn)確，可用于三七藥材及其制劑的質(zhì)量控制。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 美國(guó)Agilent高效液相色譜系統(tǒng)（G1312A二元泵、G1314A檢測(cè)器METTLER AB135－S電子分析天平；BOLONG USC－502超聲儀。

1.2 試藥 三七皂苷R1對(duì)照品（110745－200415）、人參皂苷Rg1對(duì)照品（110703－200726）、人參皂苷Rb1對(duì)照品（110704－200420）均購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所。藥流凈顆粒為我公司自制產(chǎn)品；乙腈為色譜純 （MERCK）；水為雙蒸水；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 色譜柱：Phenomenex Luna C18（2）（5μm，250×4.60mm）柱；流動(dòng)相：乙腈（A）和水 （B），梯度洗脫；A相含量隨時(shí)間的變化為17%（0～8min），17%～22%（8～15min），22%（15～28min），22%～26%（28～38min），26%～31%（38～40min），31%～38%（40～50min），38%（50～60min）；檢測(cè)波長(zhǎng)：203nm；流速：1m l/min；進(jìn)樣量：20μl；柱溫：20℃。結(jié)果3個(gè)指標(biāo)理論塔板數(shù)均不低于6000。見圖1、圖2、圖3。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1，分別為15.14、16.68、18.92mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，即得濃度分別為1.514、1.668、1.892mg/ml的母液，精密量取上述混合對(duì)照品溶液1.6、1.2、0.8、0.5、0.25、0.10ml，分別置2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得系列濃度的對(duì)照品溶液，置于4℃冰箱保存。

2.2.2 藥流凈顆粒樣品溶液的制備［4］取本品內(nèi)容物，研細(xì)，取約3g，精密稱定，加熱水50ml使溶解，用水飽和正丁醇萃取6次，每次50ml，合并正丁醇液，用氨試液洗滌2次，每次80ml，取正丁醇層，蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，濾過，取續(xù)濾液即得。

2.3 線性關(guān)系考察 分別將“2.2.1”項(xiàng)下制備的不同濃度的系列對(duì)照品溶液按 “2.1”項(xiàng)下色譜條件依次連續(xù)進(jìn)樣，分別重復(fù)2次，以對(duì)照品溶液濃度 （X，μg/ml）對(duì)峰面積 （Y）進(jìn)行線性回歸，呈良好的線性關(guān)系 （見表1）。

表1 3種皂苷的線性關(guān)系

2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下制備的人參皂苷系列混合對(duì)照品溶液中的第1、4、6三個(gè)點(diǎn)作為低、中、高三個(gè)濃度點(diǎn)，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，根據(jù)所得峰面積考察其精密度，結(jié)果3種皂苷的日內(nèi)精密度低濃度點(diǎn)RSD%均＜2%，中、高濃度點(diǎn)RSD%均＜1.5%

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取制備的藥流凈顆粒制劑樣品溶液，分別在0、2、4、6、8、24h測(cè)定3種皂苷的峰面積，考察其穩(wěn)定性。藥流凈顆粒制劑樣品溶液中3種皂苷R1、Rg1、Rb1峰面積RSD%分別為1.39%、1.56%、1.41%；表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取同一批次藥流凈顆粒制劑樣品5份，各約3g，按“2.2.2”項(xiàng)下方法分別制成樣品溶液，進(jìn)行分析。三七中3種皂苷R1、Rg1、Rb1的平均含量和RSD%（n＝5）分別為0.580mg/g（RSD%＝1.56%），2.379mg/g（RSD%＝1.40%），2.241mg/g（RSD%＝1.63%）。

2.7 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同一批藥流凈顆粒制劑樣品3g共9份，每3份為一組，按低、中、高3個(gè)水平分別加入對(duì)照品一定量 （樣品各成分含量的80%、100%、120%），按“2.2.3”項(xiàng)下制備，進(jìn)樣分析，結(jié)果3種皂苷R1、Rg1、Rb1的回收率和RSD%（n＝3）分別為98.36%（RSD＝1.10%），99.83%（RSD＝1.58%），98.81%（RSD＝1.13%）。結(jié)果表明，本方法回收率結(jié)果良好。

2.8 樣品測(cè)定 取3個(gè)批次的藥流凈顆粒（批號(hào)分別為100122，100124，100127）按“2.2.2”項(xiàng)下制備3批樣品的供試品溶液，依 “2.1”項(xiàng)下色譜條件分析計(jì)算樣品含量，結(jié)果見表2。

表2 各批次藥流凈顆粒中3種皂苷含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 色譜柱的選擇 在色譜柱的選擇上主要考察了250mm ×4.6mm與150mm×4.6mm兩種規(guī)格，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)柱較短柱而言，分離度有明顯提高，而分析時(shí)間只是略有延長(zhǎng)，仍然在預(yù)期時(shí)間內(nèi)將3種皂苷分離完全，故選用250mm× 4.6mm色譜柱。

3.2 柱溫箱溫度的選擇 試驗(yàn)的過程中，我們發(fā)現(xiàn)溫度對(duì)3種皂苷分離的影響較大，適當(dāng)?shù)慕档蜏囟?，有利于提高各目?biāo)峰的分離度，但不可過低的降低溫度，否則會(huì)增加流動(dòng)相的黏度，從而影響分離效果，試驗(yàn)考察了4個(gè)溫度30、20、10℃，結(jié)果表明，20℃時(shí)分離效果最好，因此將其選為最佳溫度。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）［S］中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：11－12.

［2］何元?jiǎng)P.雙波長(zhǎng)薄層掃描測(cè)定血塞通片中人參皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1的含量［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥雜志，2003，64：292－294.

［3］蘇靜，朱衛(wèi)泉.RP-HPLC梯度洗脫法測(cè)定血塞通片中三七皂苷R1、人參皂苷Rb1及人參皂苷Rg1的含量［J］.藥物分析雜志，2005，25（2）：212－214.

［4］梁懿，蒙連瓊.田七痛經(jīng)膠囊檢測(cè)方法的研究 ［J］.藥物分析雜志，2008，28（2）：278－281.

R282.71

A

1007－8517（2013）09－0017－02

2013.03.13）

楊學(xué)芳，女，執(zhí)業(yè)中藥師，助理工程師，中藥分析。E－mail：yangxuefang－1234＠163.com。