CD54和CD62P在急性腦梗死患者血清中的表達

喻 敏 李華軍

(中國人民解放軍95924部隊衛(wèi)生所，湖北 武漢 430313)

腦血管病是嚴重危害老年人的身體健康和生命的主要疾病。隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)急性腦梗死病灶是由缺血中心區(qū)、周圍的缺血豐富帶組成，腦組織缺血后大量白細胞浸潤，細胞內(nèi)鈣超載、大量氧自由基生成，神經(jīng)細胞產(chǎn)生不可逆的損害，引起一系列炎癥反應(yīng)及損傷。其中血液成分的改變，血液中有形成分如(黏附分子)與多種炎性反應(yīng)參與等在腦血管淤積〔1〕，阻塞血管，而導(dǎo)致腦梗死的發(fā)生。本研究擬利用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)對急性腦梗死患者外周血細胞間黏附分子(CD54)和血小板黏附分子(CD62P)的表達進行研究。

1 材料與方法

1.1 病例選擇 急性腦梗死:男60例，女30例，共90例;年齡55～70歲，平均63歲。符合第四屆全國腦血管病會議制定標準。(1)根據(jù)病史、發(fā)病時癥狀、體征及神經(jīng)科體格檢查、影像學(xué)檢查(頭部CT或頭部MRI平掃)病程在7 d內(nèi)的急性腦梗死病例;(2)神經(jīng)功能缺失程度計分大于分;(3)無嚴重肝腎疾病、血液系統(tǒng)疾病、出血性疾病依據(jù)前循環(huán)腦梗死、后循環(huán)腦梗死的發(fā)生分為:前循環(huán)腦梗死(發(fā)病48 h～7 d):男40例、女15例、年齡55～68歲平均61.5歲;后循環(huán)腦梗死(發(fā)病48 h～7 d):男20例、女15例、年齡55～70歲 平均62.5歲;正常對照組為我院收集體檢中心體檢均為健康人員，除外神經(jīng)疾病，共23例，其中男10例、女13例、年齡55～80歲，平均69歲。

1.2 研究方法 標本采集及測定方法:所有檢測對象晨起后空腹采集靜脈血3～5 ml，30 min內(nèi)制備滅活，置于－20℃冰箱內(nèi)儲存。采用酶聯(lián)免疫吸附法測定血清中CD54和CD62P水平;酶標試劑盒為上海富眾(亞平寧)生物科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)。操作的流程均按照說明書進行試驗，應(yīng)用ELISA對抗體夾心法及ELISA間接法〔2〕。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法處理 應(yīng)用SPSS10.0軟件包進行統(tǒng)計分析軟件分析數(shù)據(jù)，組間進行t檢驗，各項指標的相關(guān)性采用直線回歸分析。

2 結(jié)果

腦梗死患者 CD54〔(455.31±56.26)ng/ml〕和 CD62P〔(1 479.43± 106.5)ng/ml〕水平與健康對照組 〔(184±46.1)、(577.03±58.23)ng/ml〕比較明顯升高(P＜0.01)。

3 討論

在急性腦梗死的發(fā)病過程中，神經(jīng)細胞完全缺血缺氧后，十幾秒出現(xiàn)電位變化，導(dǎo)致大腦皮層生物電活動完全消失，腦內(nèi)動脈血流中斷持續(xù)5 min，神經(jīng)細胞就可以出現(xiàn)不可逆性損害，細胞內(nèi)ATP供應(yīng)不足，釋放大量結(jié)合鈣，出現(xiàn)嚴重的細胞內(nèi)鈣超載〔3〕。大量氧自由基生成，炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，造成神經(jīng)變性、壞死等腦組織嚴重的病理變化〔4〕。CD54屬于黏附因子免疫球蛋白超家族，存在內(nèi)皮細胞表面，在體內(nèi)分布廣泛。發(fā)生病變情況下，如內(nèi)皮細胞、Th細胞、神經(jīng)膠質(zhì)細胞。大量研究證實，腦缺血損傷是一個炎癥反應(yīng)過程，外周血黏附性增高可以與缺血損傷細胞凋亡關(guān)系密切，腦梗死發(fā)生的嚴重程度有關(guān)〔5〕。CD54主要介導(dǎo)細胞黏附及活化，而Th細胞及血管內(nèi)皮細胞黏附后引起一系列細胞反應(yīng)及鈣超載。本研究表明，急性腦梗死患者血清中CD54水平明顯高于對照組，與病變程度有明顯關(guān)系，腦梗死病情越嚴重黏附分子水平越高。

CD62P主要分布在內(nèi)皮細胞及α顆粒，是血小板膜表面的一個富含半胱氨酸。高度糖基化的糖蛋白，經(jīng)組胺、補體、氨基酸及凝血酶等刺激后迅速與質(zhì)膜融合，在血小板表面進行表達，開啟了血小板的細胞、內(nèi)皮細胞相互黏附作用。

血中CD62P基礎(chǔ)水平來源于血小板，在病理狀態(tài)下，CD62P水平活化內(nèi)皮細胞分泌組織發(fā)生炎癥或系列損傷時，可通過不同機制增強人內(nèi)皮細胞CD62P。mRNA持續(xù)性轉(zhuǎn)錄，這些均是CD62P參與炎癥反應(yīng)的重要機制〔6〕。CD62P在急性腦梗死發(fā)生發(fā)展中，由于血管內(nèi)皮細胞的損傷，從而導(dǎo)致內(nèi)皮下膠原暴露，使血小板不斷流入暴露的膠原下，使血小板被活化，血小板“膜顆?！痹谒查g出現(xiàn)易位，在血小板表面表達，可對活化的血小板進行識別〔7〕。在本實驗研究中，急性腦梗死患者CD62P的表達明顯高于正常對照組，更進一步揭示了CD62P表達在促使梗死形成。血小板激活中起關(guān)鍵性作用。本實驗研究證明CD62P表達與神經(jīng)功能缺損程度呈正相關(guān)，腦梗死病情好轉(zhuǎn)時CD62P表達量減少或不表達，進展性腦梗死病情進一步加重趨勢時CD62P表達明顯增加。因此通過對CD62P的檢測科判斷腦梗死預(yù)后程度，同時指導(dǎo)治療。綜合上述兩種黏附因子CD54、CD62P的檢測，發(fā)現(xiàn)CD54、CD62P在急性腦梗死發(fā)病的病理生理過程中的重要參與者，它對動脈粥樣硬化斑塊及血栓形成起重要作用。因此，在腦梗死發(fā)病早期，CD54、CD62P是急性腦梗死發(fā)病的病理生理過程中的重要參與者，它對動脈粥樣硬化斑塊及血栓形成起重要作用，所以CD54、CD62P在血清中的含量是診斷和預(yù)后程度的重要指標。

1 Saliba E，Henrot A.Inflammatory mediators and neonatal brain damage〔J〕.Biol Neonate，2001;79(3-4):224-7.

2 Mukherjee MD，Wong MD，Griffin MD，et al.Ten-fold augmentation of endothelial up take of vascular endothelial growth factor with ultrasound after systemic administration〔J〕.JAm Coll Cardiol，2000;35:1678-86.

3 吳 江.神經(jīng)病學(xué)〔M〕.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008:341-2.

4 高 帆，聶亞雄.P-選擇素與缺血性腦卒中〔J〕.神經(jīng)疾病與精神衛(wèi)生，2009;9(2):174-6.

5 Madri JA，Graesser D.Cell migration in the immune system:the evolving inter-related roles of adhesion molecules and proteinases〔J〕.Dev Immunol，2000;7:103-16.

6 Klaus L.The role of selection in inflammatory and disease〔J〕.Trends Mol Med，2003;9(6):263-8.

7 Andre D，Hartwell D.Hrachovinoval I，et al.Pro-coagulant state reaulting from high level of soluble P-selectin in blood〔J〕.Proc Natl Sei，2000;97(25):13838-40.