ELISA法檢測(cè)乙肝表面抗原產(chǎn)生假陽(yáng)性的臨床應(yīng)用

姜志康

（上海市崇明縣精神衛(wèi)生中心，上海 202150）

ELISA法檢測(cè)乙肝表面抗原產(chǎn)生假陽(yáng)性的臨床應(yīng)用

姜志康

（上海市崇明縣精神衛(wèi)生中心，上海 202150）

用ELISA法來(lái)檢測(cè)乙肝表面抗原產(chǎn)生假陽(yáng)性在臨床上，已經(jīng)有著廣泛的應(yīng)用。本文的目的是在臨床應(yīng)用中，乙肝表面抗原有“假陽(yáng)性”的產(chǎn)生時(shí)，運(yùn)用ELISA法來(lái)檢測(cè)，對(duì)其進(jìn)行細(xì)致地分析，然后找對(duì)解決問(wèn)題的方法，提高臨床應(yīng)用效果。本文采用的方法是用轉(zhuǎn)速和時(shí)間的不同，對(duì)同一批的標(biāo)本采取離心，然后運(yùn)用ELISA法來(lái)檢測(cè)乙肝表面抗原。通過(guò)嚴(yán)密地論證之后，同一批標(biāo)本通過(guò)增加標(biāo)本的離心時(shí)間和提高離心速度使假陽(yáng)性結(jié)果減少。ELISA法檢測(cè)能夠檢測(cè)出離心是乙肝表面抗原產(chǎn)生“假陽(yáng)性”的重要影響因素，檢測(cè)乙肝表面抗原的假陽(yáng)性在臨床上有著廣泛的應(yīng)用。

ELISA法；檢測(cè)；乙肝表面；抗原；假陽(yáng)性；臨床應(yīng)用

在我國(guó)，乙型肝炎有著很高的發(fā)病率，而且有著嚴(yán)重的傳染性，嚴(yán)重地危害著人們的身體健康和生活質(zhì)量。乙型肝炎的表面抗原（HBsAg）作為乙肝感染的指標(biāo)之一，所以，對(duì)HBsAg進(jìn)行檢查通常是進(jìn)行體檢的內(nèi)容之一，同時(shí)，對(duì)于防治和治療乙肝有著非常重要的意義。對(duì)乙肝表面抗原進(jìn)行檢測(cè)，通常用的ELISA法即酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)夾心法，ELISA有很多的優(yōu)點(diǎn)，如簡(jiǎn)單的操作、可靠的技術(shù)、方便的試劑、檢測(cè)地點(diǎn)隨意等優(yōu)點(diǎn)，進(jìn)入到新世紀(jì)以來(lái)，隨著科技的發(fā)展，ELISA技術(shù)也在不斷地成熟，其特異性和靈敏度得到了非常明顯地提高，因此雖然HBsAg檢測(cè)新技術(shù)，不斷地建立應(yīng)用P化學(xué)發(fā)光法、CR、電化學(xué)發(fā)光法、時(shí)間分辨免疫熒光法，ELISA在眾多的技術(shù)中仍是一項(xiàng)成熟的、具有較大應(yīng)用價(jià)值的檢測(cè)技。在臨床上，用ELISA法作為主要檢測(cè)技術(shù)，對(duì)HBsAg進(jìn)行檢測(cè)。ELISA法對(duì)HBsAg試劑檢測(cè)血標(biāo)本時(shí)，會(huì)經(jīng)常地發(fā)現(xiàn)數(shù)孔有弱陽(yáng)性的出現(xiàn)，某市臨床檢驗(yàn)質(zhì)控中心所規(guī)定的0.0735≤OD值≤0.210，一定要重新進(jìn)行檢測(cè)，翌日是，重新檢測(cè)，降低了陽(yáng)性率。經(jīng)細(xì)致分析，不斷地研究，經(jīng)過(guò)臨床應(yīng)用的論證，找到了產(chǎn)生假陽(yáng)性之原因所在，提高了臨床應(yīng)用效果。

1 ELISA法的優(yōu)點(diǎn)

較高的靈敏性。測(cè)定法最高的靈敏度其實(shí)是報(bào)告集團(tuán)中的酶所起的作用。酶是一種常用的有機(jī)催化劑，即使很少量的酶也能誘導(dǎo)很多的催化反應(yīng)，就會(huì)有一些明顯的可以觀察的現(xiàn)象產(chǎn)生，主要是顯色反應(yīng)。所以，在該體系很多時(shí)候被叫做酶的放大體系。所以，ELISA檢測(cè)法在亞細(xì)胞或細(xì)胞水平上，實(shí)現(xiàn)了示蹤抗原以及抗體所在的部位，可以對(duì)其進(jìn)行定量，如微克、納克。

較強(qiáng)的特異性。特異性其實(shí)是抗體以及抗原的選擇上?？乖c抗體進(jìn)行結(jié)合，實(shí)際上，只是在抗原中的抗原決定簇和抗體中的抗原結(jié)合位點(diǎn)間進(jìn)行結(jié)合。因?yàn)槎呋瘜W(xué)結(jié)構(gòu)以及空間構(gòu)型是屬于互補(bǔ)關(guān)系，致使抗原抗體的反應(yīng)有較強(qiáng)的特異性。

2 ELISA法的檢測(cè)

2.1 材料和方法

2.1.1 材料：某醫(yī)院臨床患者標(biāo)本200份。

2.1.2 試劑與儀器：試劑采用的是上海實(shí)業(yè)科華公司生產(chǎn)的HBsAgELISA試劑盒。儀器是美國(guó)寶特ELX-50型生產(chǎn)的全自動(dòng)洗板機(jī)，美國(guó)生產(chǎn)的寶特ELX-800型全自動(dòng)酶標(biāo)測(cè)定儀，北京生產(chǎn)的LDZ5-2離心機(jī)。

3 方 法

對(duì)200例患者進(jìn)行靜脈血的抽取，抽取血清標(biāo)本進(jìn)行離心。離心后，嚴(yán)格按HBsAg的SOP進(jìn)行檢測(cè)的要求檢測(cè)。在離心的過(guò)程中要經(jīng)歷4個(gè)程度，轉(zhuǎn)速1000rpm，時(shí)間5 min；轉(zhuǎn)速2000rpm，時(shí)間5 min；轉(zhuǎn)速3000rpm，時(shí)間15min；轉(zhuǎn)速3000rpm，時(shí)間30min。

4 結(jié) 果

200例標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果，統(tǒng)計(jì)值P＜0.05，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

5 討 論

ELISA檢測(cè)會(huì)受到很多的影響因素，比如血細(xì)胞[3]、檢測(cè)時(shí)間、洗板方式[4]、加樣量、血清分離等。通過(guò)200份標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析和比較后發(fā)現(xiàn)，試劑的空白、陰陽(yáng)性的對(duì)照、室內(nèi)的質(zhì)控孔OD值都處于正常范圍，血液的標(biāo)本孔OD值卻出現(xiàn)了異常情況，仔細(xì)分析后發(fā)現(xiàn)，原因是出在了標(biāo)本離心時(shí)和放置血液的時(shí)間上。

在對(duì)標(biāo)本進(jìn)行留取檢驗(yàn)之前，采用金標(biāo)試劑進(jìn)行檢測(cè)，其檢測(cè)結(jié)果皆為陰性，運(yùn)用ELISA法對(duì)HBsAg進(jìn)行檢測(cè)的過(guò)程中，所有標(biāo)本陽(yáng)性率理論上不應(yīng)很高[3]。在臨床應(yīng)用中，通過(guò)對(duì)標(biāo)本的離心時(shí)間進(jìn)行增加，對(duì)離心速度進(jìn)行改進(jìn)，就解決了很多影響臨床應(yīng)用的關(guān)鍵問(wèn)題。

在對(duì)標(biāo)本進(jìn)行徹底離心后，分離不會(huì)溶血，這樣就能得到較為準(zhǔn)確的結(jié)果。這樣也說(shuō)明，對(duì)標(biāo)本進(jìn)行離心處理，好或者壞都直接影響著臨床的準(zhǔn)確性。

同時(shí)，運(yùn)用ELISA法對(duì)血標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，影響結(jié)果的最主要原因如下[4]：①血清里所有的補(bǔ)體都能和IgG中的Fc段相結(jié)合，這是假陽(yáng)性產(chǎn)生的原因之一。②血漿里的纖維蛋白原與酶的結(jié)合物，混在一起后最容易粘附在ELISA的檢測(cè)板上，并且難于洗掉，這是假陽(yáng)性產(chǎn)生的原因之二。③血清里如果有類似的風(fēng)濕因子（RF），其能夠和抗體相結(jié)合，這是假陽(yáng)性產(chǎn)生的原因之三。④免疫球蛋白聚合物、免疫復(fù)合物易吸附于塑料表面，可造成非特異性吸附，導(dǎo)致假陽(yáng)性。為了避免ELISA試劑“檢測(cè)時(shí)假陽(yáng)性的出現(xiàn)”，為了降低檢測(cè)的假陽(yáng)性率，取得準(zhǔn)確的結(jié)果，

6 ELISA法的臨床應(yīng)用

①試劑盒使用前，要平衡與室溫相同。②檢測(cè)時(shí)盡量用抗凝血的標(biāo)本。③溶血的標(biāo)本要重新抽血[1,2]。④冬天抽血后，放置于溫水中2h，待凝塊收縮后再檢測(cè)。⑤檢測(cè)離心標(biāo)本之前，離心速度加大至（3000 rpm），離心時(shí)間增加15 min，讓紅細(xì)胞與纖維蛋白能夠完全地沉淀、以至離心完全。⑥放置標(biāo)本10 h后檢測(cè)好，血凝塊可很好地收縮，標(biāo)本里的非特異性活性物質(zhì)能夠部分或全部地失活，降低了非特異性反應(yīng)，這樣會(huì)需時(shí)間長(zhǎng)。但這樣能降低ELISA法檢測(cè)的假陽(yáng)性率，增強(qiáng)臨床效果。

[1] 黃秋芳,王微,李永.ELISA檢測(cè)HBsAg復(fù)檢結(jié)果的分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2004,19(4):603.

[2] 陳傳德,冷霜.ELISA一步法檢測(cè)HBsAg影響因素分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2003,13(3):853.

[3] 施紀(jì)文,徐簡(jiǎn)華,溫惠萍. ELISA法和膠體金免疫層析法檢測(cè)乙肝表面抗原的比較[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2005,20(5):48-49.

[4] 邢培清,劉玉振.實(shí)用輸血檢驗(yàn)[M].鄭州:鄭州大學(xué)出版社,2001:95-145.

R512.6+2

A

1671-8194（2013）16-0394-02