食品檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)

黃曉蓉

（福建出入境檢驗(yàn)檢疫局 福建福州 350001）

1 前言

商品化食品檢測(cè)試劑盒（簡(jiǎn)稱食品檢測(cè)試劑盒）是指對(duì)一種分析方法的主要或關(guān)鍵組成進(jìn)行了商品化包裝并可供銷售的檢測(cè)體系，用以確定一種或多種食品基體中目標(biāo)分析物的存在或含量[1]。與傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室操作相比，采用試劑盒進(jìn)行樣品處理甚至直接獲得檢測(cè)結(jié)果的分析模式，最主要的優(yōu)點(diǎn)和特點(diǎn)就是對(duì)基本分析操作技能要求降低，整個(gè)檢測(cè)過程可以實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化、流水化工作，簡(jiǎn)單、快速、方便，適用于現(xiàn)場(chǎng)操作，在很短的時(shí)間里可以得到檢測(cè)結(jié)果。

由于試劑盒方法被廣泛認(rèn)可及在某些領(lǐng)域的不可替代性，越來越多的機(jī)構(gòu)投入到試劑盒的研發(fā)與生產(chǎn)中。這種狀況既存在良性健康發(fā)展，也存在著不可忽視的隱患，特別是試劑盒的研發(fā)與生產(chǎn)成本較之大型實(shí)驗(yàn)設(shè)備而言低很多，投入產(chǎn)出值較高，使得一些水平低、規(guī)模小、管理差的企業(yè)也紛紛加入生產(chǎn)行列，市場(chǎng)良莠不齊。因此，檢測(cè)試劑盒的質(zhì)量倍受關(guān)注，規(guī)范試劑盒的生產(chǎn)和使用，確保檢測(cè)試劑盒符合實(shí)驗(yàn)室相關(guān)質(zhì)量管理與質(zhì)量控制要求，已經(jīng)成為需要考慮的重點(diǎn)。本文對(duì)國內(nèi)外食品檢測(cè)試劑盒的評(píng)價(jià)制度進(jìn)行了比較研究，為建立符合我國實(shí)際情況的檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)制度打下基礎(chǔ)。

2 國內(nèi)外對(duì)食品檢測(cè)試劑盒的管理與評(píng)價(jià)

2.1 食品檢測(cè)試劑盒的定義與分類

20世紀(jì)70年代以來，為滿足分析實(shí)驗(yàn)室對(duì)大批量樣品的檢測(cè)需求，生產(chǎn)者開發(fā)了一系列商品化方法并投放市場(chǎng)。與傳統(tǒng)的方法相比，這些方法更簡(jiǎn)單、便捷且更經(jīng)濟(jì)，被稱為“可選分析方法”（alternative analysis methods）、快速分析方法以及更為普遍稱呼的“試劑盒”。1994年，美國公職分析家學(xué)會(huì)（AOAC）發(fā)布了“檢測(cè)試劑盒定義與改進(jìn)指南”（Test kits definitions and modifications guideline）[2]，為試劑盒的開發(fā)研制及不斷改進(jìn)提供一個(gè)持續(xù)合理的框架，同時(shí)發(fā)布評(píng)估方法以保證試劑盒改進(jìn)后的有效性。在這份指南中，AOAC將商品化試劑盒定義為對(duì)一種分析方法的主要或關(guān)鍵組成進(jìn)行了商品化包裝并可供銷售的檢測(cè)體系，以確定一種或多種食物基體中目標(biāo)分析物的存在或含量。

目前，已用于食品檢測(cè)的試劑盒種類繁多，尚無嚴(yán)格規(guī)范的分類方法。按試劑盒來源可分成國產(chǎn)試劑盒和進(jìn)口試劑盒；按檢測(cè)原理可分成酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒、免疫組化試劑盒、化學(xué)發(fā)光試劑盒、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）試劑盒；按檢測(cè)對(duì)象可分成化學(xué)類物質(zhì)檢測(cè)試劑盒和生物類物質(zhì)檢測(cè)試劑盒等等。就分析對(duì)象來說，已商業(yè)化的試劑盒可檢測(cè)的食品成分主要包括轉(zhuǎn)基因、過敏原、食品添加劑以及如維生素、氨基酸等營養(yǎng)素，可檢測(cè)的有毒有害物質(zhì)種類主要有農(nóng)藥殘留、獸藥殘留、重金屬、微生物、生物毒素與激素等。

2.2 食品檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)制度

目前國際上已開展了對(duì)試劑盒注冊(cè)及評(píng)價(jià)確認(rèn)工作，這些方式歸納起來有兩類：一類為官方注冊(cè)（備案），如中國、美國、加拿大、菲律賓等；一類為有影響力的機(jī)構(gòu)及組織的評(píng)價(jià)確認(rèn)，如美國AOAC、法國標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會(huì)集團(tuán)（AFNOR）以及北歐食品安全分析委員會(huì)（NordVal）、荷蘭MicroVal等。

2.2.1 官方注冊(cè)（備案）

從現(xiàn)有資料來看，官方對(duì)于試劑盒的管理主要以官方注冊(cè)的方式進(jìn)行。對(duì)于注冊(cè)要求各國不一，歸納起來有兩類。

一類僅要求生產(chǎn)企業(yè)向管理部門申報(bào)，以獲得注冊(cè)號(hào)，如加拿大。加拿大衛(wèi)生部（Health Canada）下轄的控制物品辦公室（Office of Controlled Substances）針對(duì)用于醫(yī)療、實(shí)驗(yàn)室、工業(yè)、教育或研究目的試劑盒提出了管理要求，需要生產(chǎn)企業(yè)向其申請(qǐng)?jiān)噭┖械淖?cè)號(hào)。這項(xiàng)管理措施的法律依據(jù)為《受控制藥品和物質(zhì)法》（Controlled Drugs and Substances Act，CDSA）及其條例、《食品與藥品法》（Food and Drugs Act）及其條例。試劑盒注冊(cè)號(hào)僅僅表明該試劑盒用于醫(yī)療、實(shí)驗(yàn)室、工業(yè)、教育或研究目的，不涉及安全、公共健康或危害。這種管理模式并非對(duì)試劑盒的質(zhì)量或技術(shù)性能進(jìn)行評(píng)價(jià)，僅當(dāng)試劑盒中含有加拿大法律CDSA中所包括的受控制物質(zhì)時(shí)，該試劑盒才需要向衛(wèi)生部申請(qǐng)注冊(cè)號(hào)。

還有一類在申請(qǐng)注冊(cè)號(hào)過程中，需要由官方指定的實(shí)驗(yàn)室對(duì)試劑盒性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證。我國農(nóng)業(yè)部對(duì)用于獸藥殘留檢測(cè)的酶聯(lián)免疫試劑盒有相關(guān)的備案管理要求，農(nóng)業(yè)部進(jìn)行此項(xiàng)管理的依據(jù)為《獸藥管理?xiàng)l例》和《關(guān)于加強(qiáng)獸藥殘留檢測(cè)試劑(盒)管理的通知》(農(nóng)辦醫(yī)[2005]3號(hào))，申請(qǐng)備案時(shí)需按“關(guān)于發(fā)布《獸藥殘留酶聯(lián)免疫試劑（盒）備案審查技術(shù)資料要求》和《獸藥殘留酶聯(lián)免疫試劑（盒）備案參考評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)》的通知”（農(nóng)醫(yī)發(fā)[2005]17號(hào)文）的要求，向農(nóng)業(yè)部提供備案的技術(shù)資料。該文分為兩部分，前者為對(duì)試劑盒產(chǎn)品本身的要求，后者為方法學(xué)技術(shù)指標(biāo)要求。這種管理模式對(duì)于規(guī)范獸藥殘留檢測(cè)用的酶聯(lián)免疫試劑盒起到了積極作用。

法律依據(jù)充分、管理對(duì)象明確是官方管理最大特點(diǎn)。政府職能部門在一定的法律框架及職責(zé)范圍內(nèi)對(duì)檢測(cè)試劑盒進(jìn)行相應(yīng)管理，對(duì)于促進(jìn)檢測(cè)試劑盒的質(zhì)量提升，保障檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性具有積極意義。

2.2.2 機(jī)構(gòu)或組織的評(píng)價(jià)

自20世紀(jì)80年代末起，鑒于試劑盒市場(chǎng)的良好發(fā)展趨勢(shì)及業(yè)界對(duì)于試劑盒質(zhì)量評(píng)判的需求，世界各知名機(jī)構(gòu)或組織陸續(xù)開展了對(duì)試劑盒的評(píng)價(jià)活動(dòng)，評(píng)價(jià)結(jié)果也被承認(rèn)。機(jī)構(gòu)或組織的評(píng)價(jià)活動(dòng)可歸為兩大類：一類是對(duì)采用試劑盒建立的檢測(cè)方法進(jìn)行驗(yàn)證，包括美國AOAC和北歐NordVal；另一類采用產(chǎn)品認(rèn)證方式，代表有法國AFNOR和荷蘭MicroVal。

成立于1884年的美國AOAC于1989年開始對(duì)食品檢測(cè)試劑盒進(jìn)行評(píng)價(jià)，并建立了適用試劑盒的性能測(cè)試方法程序（Performance Tested Methods Program，PTM），與公定方法程序（Official Methods Program, OMA）和同行確認(rèn)方法程序（Peer-Verified Methods Program，PVM）共同構(gòu)成了目前AOAC的方法驗(yàn)證體系統(tǒng)。PTM由AOAC下屬的研究所（Research Institute，RI）負(fù)責(zé)實(shí)施。根據(jù)“AOAC-RI PTM的政策和程序”（AOAC Research Institute PERFORMANCE TESTED METHODSSM PROGRAM POLICIES and PROCEDURES）[3]，獲得AOAC RI標(biāo)志的試劑盒分為抗菌素、生物化學(xué)、食物過敏原、微生物、毒素五大類，AOAC將在其出版的《實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部管理（ILM）》雜志上公告通過驗(yàn)證的試劑盒，同時(shí)選擇性地公布試劑盒的部分性能數(shù)據(jù)，而被驗(yàn)證的試劑盒方法和評(píng)估報(bào)告將完整地刊登在AOAC期刊上。截止至2010年1月的數(shù)據(jù)顯示，已有146種試劑盒獲得AOAC RI標(biāo)志，其中微生物檢測(cè)用試劑盒占絕大部分，共有118種。

出于食品安全考慮，微生物學(xué)分析方法作為必要的監(jiān)控手段，越來越頻繁地用于食品生產(chǎn)的每一階段。傳統(tǒng)的檢測(cè)方法耗時(shí)費(fèi)力，為滿足需求，近30年來開發(fā)并商業(yè)化了許多快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)的檢測(cè)方法，這些方法被稱為“可選分析方法”，試劑盒也屬于這一范疇。大量商品化試劑盒用于微生物學(xué)分析市場(chǎng)，這些試劑盒的用戶需要確保這些試劑盒的性能指標(biāo)符合使用需求。因此，應(yīng)企業(yè)及管理需要，1989年法國AFNOR建立了用于工業(yè)食品行業(yè)的商品化試劑盒的確認(rèn)體系，該體系最初被稱為“可選分析方法的AFNOR確認(rèn)”（AFNOR validation of alternative analysis methods）。作為國際上最負(fù)盛名的第三方認(rèn)證機(jī)構(gòu)之一，AFNOR認(rèn)證服務(wù)分為人員認(rèn)證、體系認(rèn)證、服務(wù)認(rèn)證和產(chǎn)品認(rèn)證四大部分，試劑盒認(rèn)證屬于產(chǎn)品認(rèn)證范疇。AFNOR對(duì)試劑盒的認(rèn)證包括兩部分：一是對(duì)方法驗(yàn)證依據(jù)EN ISO 16140[4]規(guī)定的程序進(jìn)行；二是獨(dú)立審核人對(duì)生產(chǎn)試劑盒企業(yè)的質(zhì)量體系現(xiàn)場(chǎng)審查。由于AFNOR認(rèn)證符合歐盟條例（EC）2073/2005[5]中第5款所描述的三點(diǎn)基本要求，即依據(jù)EN ISO 16140要求制訂驗(yàn)證方案，由第三方認(rèn)證組織進(jìn)行，同時(shí)采用歐盟條例（EC）2073/2005中附錄Ⅰ作為方法驗(yàn)證的參考方法。由于（EC）2073/2005是針對(duì)食品中微生物要求的歐盟條例，因此，獲得AFNOR認(rèn)證意味著自動(dòng)獲得了歐洲的承認(rèn)。至2010年，已有95種試劑盒獲得AFNOR認(rèn)證。

MicroVal組織由荷蘭聯(lián)合利華研究實(shí)驗(yàn)室始創(chuàng)，現(xiàn)擁有21個(gè)成員。2007年3月，MicroVal頒發(fā)了首份試劑盒認(rèn)證證書。MicroVal認(rèn)證程序基于以下三個(gè)核心原則：①開展可選方法和參考方法的方法比較研究，以及可選方法和參考方法實(shí)驗(yàn)室間方法性能研究；②試劑盒生產(chǎn)商必須符合EN 29002標(biāo)準(zhǔn)（ISO 9002）框架下的質(zhì)量保證要求；③定期審查已獲認(rèn)證證書的可選方法?；贓N ISO 16140，MicroVal制定了“MicroVal規(guī)定和認(rèn)證方案”，用于指導(dǎo)檢測(cè)食品、動(dòng)物飼料、飲料（水質(zhì)分析除外）和食品生產(chǎn)環(huán)境中的微生物的可選方法（包括試劑盒）的驗(yàn)證工作。另外，MicroVal還要求試劑盒的生產(chǎn)必須獲得EN ISO 13485，否則需接受MicroVal 認(rèn)證機(jī)構(gòu)審查員的現(xiàn)場(chǎng)審查。

2007年3月，NordVal歸屬于北歐食品分析委員會(huì)(Nordic Committee on Food Analysis，NMKL)管理。NordVal/NMKL制定了“可選微生物學(xué)方法確認(rèn)方案（protocol for the validation of alternative microbiological methods）”[6]用于指導(dǎo)食品、水、動(dòng)物糞便、飼料、設(shè)備和加工場(chǎng)地樣品、環(huán)境樣品中的微生物分析方法的確認(rèn)工作。不論定性還是定量方法的方法確認(rèn)都分為兩個(gè)階段：由專業(yè)實(shí)驗(yàn)室對(duì)檢測(cè)試劑盒與傳統(tǒng)檢測(cè)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的比較性研究；由專業(yè)實(shí)驗(yàn)室組織開展對(duì)檢測(cè)試劑盒的實(shí)驗(yàn)室間協(xié)同研究。

由此可見，AOAC與NordVal對(duì)檢測(cè)試劑盒的評(píng)價(jià)僅從方法性能指標(biāo)角度進(jìn)行考察，對(duì)試劑盒所表現(xiàn)出的性能指標(biāo)的驗(yàn)證。而AFNOR與MicroVal的認(rèn)證還包括了對(duì)試劑盒生產(chǎn)企業(yè)的質(zhì)量體系審查，涉及產(chǎn)品的認(rèn)證范疇。

3 總結(jié)

食品檢測(cè)試劑盒有著極大的市場(chǎng)需求，發(fā)展前景廣闊。2009年，在食品伙伴網(wǎng)（www.foodmate.net）上進(jìn)行的一次針對(duì)食品檢測(cè)試劑盒使用情況的網(wǎng)絡(luò)調(diào)查顯示，操作簡(jiǎn)單、方便快捷是試劑盒公認(rèn)的最大優(yōu)點(diǎn)，并有超過66%的實(shí)驗(yàn)室已使用了檢測(cè)試劑盒替代或部分替代傳統(tǒng)方法。然而，穩(wěn)定性不佳，采用試劑盒的檢測(cè)結(jié)果重現(xiàn)性較差也是反映較多的問題。因此，建立科學(xué)規(guī)范的評(píng)價(jià)體系，加強(qiáng)對(duì)商品化試劑盒的管理，對(duì)于保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性具有積極作用。

［1］SN/T 2775-2011 商品化食品檢測(cè)試劑盒評(píng)價(jià)方法[S].

［2］AOAC Research Institute Test Kit Definitions and Modifications Guideline. http://www.aoac.org/testkits/Appendix_18_Definitions_&_Modification%20Guideline.pdf.

［3］AOAC Research Institute PERFORMANCE TESTED METHODSSM PROGRAM POLICIES and PROCEDURES. http://www.aoac.org/testkits/Policies%20&%20Procedures.pdf.

［4］ISO 16140：2003 Microbiology of food and animal feeding stuffs- Protocol for the validation of alternative methods. http://www.iso.org/iso/iso_catalogue/catalogue_tc/catalogue_detail.htm?csnumber=30158

［5］Commission Regulation(EC)No 2073/2005[S]. http://eur-lex.europa.eu/LexUriServ/LexUriServ.do?uri=CONSLEG:2005R2073:20071227:EN:PDF

［6］Protocol for the validation of alternative microbiological methods[S].http://www.nmkl.org/NordVal/NordValprotocolmarch2009.pdf