蛋白質(zhì)組學在肺癌研究中的應(yīng)用進展

張蕾，張福營，趙婷，凌人，叢維濤，金利泰

蛋白質(zhì)組學（proteomics）指的是在大規(guī)模水平上研究細胞內(nèi)動態(tài)變化的蛋白質(zhì)的翻譯后修飾、組成與表達水平，探究蛋白質(zhì)之間的相互作用，揭示蛋白質(zhì)功能與細胞活動規(guī)律的學科。蛋白質(zhì)組學技術(shù)主要包括蛋白質(zhì)的分離、質(zhì)譜鑒定及生物信息學等技術(shù)。

肺癌是臨床最常見的惡性腫瘤，也是全球發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一。目前肺癌患者總體 5 年生存率只有 15%，但早期診斷出的肺癌患者 5 年生存率可達 85%，因此早期篩查是肺癌防治的關(guān)鍵。由于肺癌早期癥狀不明顯，傳統(tǒng)的臨床診斷方式難以實現(xiàn)早期診斷。應(yīng)用蛋白質(zhì)組學方法分析肺癌細胞株、肺癌組織，或肺癌血清、血漿中表達的全部蛋白質(zhì)，通過與正常肺細胞或健康人的蛋白質(zhì)組對比分析，篩選差異蛋白，尋找靈敏度高、特異性強的肺癌標記物，可為肺癌發(fā)病機制研究提供理論依據(jù)，為肺癌的預防、早期診斷和治療方法提供新的途徑。本文就近年來肺癌的蛋白質(zhì)組學研究進展進行綜述，并對其前景進行展望。

1 肺癌細胞的蛋白質(zhì)組學研究

通過體外實驗，比較肺癌細胞和正常細胞的蛋白質(zhì)組學差異、分析蛋白質(zhì)功能，能夠間接揭示肺細胞癌的產(chǎn)生和轉(zhuǎn)移機制。

詹顯全等[1]對 A549 和正常細胞系 HBE 進行了蛋白質(zhì)組學研究，鑒定出 18 種差異蛋白，經(jīng)肽質(zhì)指紋分析，發(fā)現(xiàn)這些蛋白與細胞信號轉(zhuǎn)導、細胞代謝、增殖、分化有關(guān)。另外，李麗萍等[2]運用雙向凝膠電泳（2-DE）和基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜（MALDI-TOF-MS）法也篩選出 A549 和 HBE 間表達水平顯著差異的 21 個蛋白，并證實在肺腺癌 A549 細胞中高表達熱休克蛋白 27（HSPB1）可能在肺腺癌癌變過程中發(fā)揮重要作用。這些差異蛋白將可能作為肺癌早期診斷的靶向標記物。

Chang 等[3]也鑒定出 A549 和人正常細胞間的 8 個差異表達蛋白質(zhì)，其中過氧化物氧化還原酶 1（peroxiredoxin 1）在肺腫瘤組織中高表達，因此 peroxiredoxin 1 可作為潛在的腫瘤標記物和肺癌藥物治療的靶點。Ying 等[4]對原代細胞 R15H 和經(jīng)238Pu 高能量 α 粒子照射 HPV-18 永生化人支氣管上皮細胞 BEP20 得到早期傳代細胞 R15H20，用蛋白質(zhì)組學技術(shù)分析，發(fā)現(xiàn)兩種細胞中有 43 個差異蛋白質(zhì)，R15H20 與 R15H 相比，21 種蛋白表達增加，22 種蛋白表達減少。僅在 R15H 細胞表達的 3 種蛋白中有 2 個是高速泳動族蛋白 1；在 R15H20 細胞中表達量降低的 2 種蛋白是 maspin 的前體。

Wang 等[5]對非小細胞肺癌細胞進行核質(zhì)蛋白 α2 亞基（KPNA2）基因敲除處理，用定量蛋白質(zhì)組學分析發(fā)現(xiàn) KPNA2 基因所調(diào)控的蛋白的功能包括細胞循環(huán)、DNA 代謝、細胞運動等。此實驗表明了定量蛋白質(zhì)組學的實用性，并為研究非小細胞肺癌中 KPNA2 的作用提供一個平臺。

肺癌轉(zhuǎn)移嚴重威脅著患者的生命，也是肺癌患者治療 失敗和死亡的主要原因。蔣代鳳等[6]對肺巨細胞癌高、低轉(zhuǎn)移株進行了蛋白質(zhì)組學分析，鑒定與肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān) 11 個 蛋白，其中有兩個蛋白尚未見報道，分別是蛋白核氯離子通道蛋白 1（CLI1）和白介素 18（IL-18），有可能成為新的肺癌標記物。高利偉等[7]采用 2-DE 方法分離人高、低轉(zhuǎn)移大細胞肺癌細胞株的總蛋白，通過對 13 個差異明顯的蛋 白質(zhì)點研究發(fā)現(xiàn)，這些差異蛋白質(zhì)多與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān)，這為肺癌轉(zhuǎn)移的病理機制和相關(guān)的分子標記物研究提供線索。

蛋白質(zhì)組學也可選擇差異蛋白為研究肺癌細胞耐藥性提供新方法。況鵬等[8]運用蛋白質(zhì)組學研究方法比較人肺癌細胞株 A549 和順鉑（DDP）耐藥細胞株 A549/DDP 中的蛋白表達差異。結(jié)果顯示，A549 和 A549/DDP 細胞中有 8 個蛋白質(zhì)點的表達差異大于 5 倍，這些蛋白與細胞代謝、凋亡等有關(guān)。

為尋找新型肺癌生物標記物，Planque 等[9]針對非小細胞肺癌（腺癌，H23）、鱗狀細胞癌（H520）、大細胞癌（H460）和小細胞肺癌（H1688）4 種組織學背景差異肺癌細胞株采用 LC-MS 技術(shù)進行蛋白質(zhì)組學分析，成功地確定了內(nèi)部控制蛋白質(zhì)，即與激肽釋放酶相關(guān)的肽酶 14 和 11，以及 IGFBP2。同時還發(fā)現(xiàn)了已知的肺癌腫瘤標記物，例如鱗狀細胞癌抗原（SCCA）、癌胚抗原（CEA）、嗜鉻粒蛋白A（CGA）、肌酸激酶腦型同工酶（CK-BB）、前胃液素釋放肽（PRP）、神經(jīng)細胞黏附分子（NCAM）與 Tu M2-PK。并通過關(guān)聯(lián)癌癥進行組織特異性化驗、功能分類、文獻檢索等，初步確認 5 種新型的肺癌候選生物標記物：ADAM-17、骨保護蛋白、pentraxin 3、卵泡抑素（FS）和腫瘤壞死因子（TNF）受體超家族成員 1A。另外，Zeng 等[10]應(yīng)用 LCM 技術(shù)分離純化的正常人支氣管上皮細胞（NBE）、鱗狀上皮化生（SM）、非典型增生（AH）、原位癌（CIS）、浸潤性肺 鱗癌等組織，采用 LC-MS 分析技術(shù)和 iTRAQ 標記方法，首次表明了 3 種差異蛋白 GSTP1、HSPB1 和 CKB 可作為喉鱗狀細胞癌（LSCC）早期診斷的新型潛在標記物。3 種蛋白的聯(lián)合能對 NBE、癌前病變（SM、AH 和 CIS）和浸潤性肺鱗癌這三者完美地加以區(qū)分，并通過永生化人支氣管上皮細胞系 16HBE 得到 GSTP1，再測量其對易致癌物質(zhì)苯并芘誘導 16HBE 細胞轉(zhuǎn)化的敏感性，證明 GSTP1 向下調(diào)節(jié)將直接影響支氣管上皮癌發(fā)生。由此可見，細胞培養(yǎng)蛋白質(zhì)組學方法可用來鑒別不同種細胞差異蛋白，為選擇潛在的早期肺癌標記物提供基礎(chǔ)依據(jù)。

2 肺癌組織的蛋白質(zhì)組學研究

在人類疾病蛋白質(zhì)組學研究中，人體樣本是最有價值、最直接和最具說服力的實驗材料，樣本收集是蛋白質(zhì)組學重要的基礎(chǔ)工作。

為篩選肺癌早期診斷及治療的分子標記物，燕貞等[11]收集 22 例肺鱗癌組織及其 5 cm 外的正常組織，利用 2-DE 方法分離總蛋白，選擇在癌組織中高表達的 10 個差異蛋白質(zhì)點進行質(zhì)譜分析，鑒定為膜聯(lián)蛋白1（annexin-1，Anx-A1）、熱休克蛋白 27 等與細胞周期、信號轉(zhuǎn)導等功能相關(guān)的蛋白。

張慧珍等[12]收集 8 例肺癌組織及其癌旁組織，用 PDQuest 凝膠圖像分析軟件進行分析發(fā)現(xiàn)，有 12 個蛋白質(zhì)只在肺癌組織中有表達，6 個蛋白質(zhì)只在癌旁組織中有表達。鈣粒蛋白 B 等肺癌特異表達的相關(guān)蛋白質(zhì)點的鑒定有助于肺癌蛋白標記物、肺癌發(fā)生和預后的研究。

Alfonso 等[13]對 12 例肺癌及癌旁組織中提取組織蛋白，對比二維蛋白質(zhì)譜圖，發(fā)現(xiàn)不同類型和不同階段的肺癌組織譜圖大不相同。經(jīng)過質(zhì)譜鑒定，得到 21 種蛋白，這些蛋白與能量代謝、細胞骨架、抗氧化等有關(guān)。

Chen 等[14]用質(zhì)譜鑒定法在 93 例肺腺癌和 10 例正常組織中對真核起始因子（eIF-5A）的表達進行鑒定，結(jié)果發(fā)現(xiàn) eIF-5A 蛋白在肺癌患者組織中高表達，且 eIF-5A 蛋白的 mRNA 表達水平也明顯高于正常人，這表明 eIF-5A 蛋白有可能作為肺癌早期診斷的腫瘤標記物。

Kikuchi 等[15]對鱗癌組織、腺癌組織和正常肺組織蛋白進行深入研究，在癌癥組織中發(fā)現(xiàn)的 25 個差異蛋白中包括一些已知的癌癥標記物，如：癌胚抗原、鱗狀細胞癌抗原、神經(jīng)元特異性烯醇化酶等。其中鱗癌組織特有蛋白如降鈣素相關(guān)多肽 α、嗜鉻粒蛋白 B 等和腺癌組織特有蛋白如類視錐蛋白 1、基質(zhì)金屬蛋白酶 10 可為癌癥的治療提供潛在的靶點。

Tan 等[16]對 12 個肺鱗癌組織及相應(yīng)的正常組織進行 2-DE 和MALDI-TOF/TOF MS 分析，發(fā)現(xiàn)與正常組織相比肺癌組織有 28 個蛋白的表達發(fā)生了顯著性的變化，表達 量上調(diào)的蛋白有異檸檬酸脫氫酶 1（IDH1）、超氧化物歧化酶 2、14-3-3ε 等，表達量下調(diào)的蛋白有過氧化物氧化還原酶 2 等。對非小細胞肺癌（NSCLC）患者血清蛋白進行研 究，發(fā)現(xiàn)在 NSCLC 患者中血清 IDH1 表達量增多，表明 IDH1 可作為 NSCLC 的血清和組織化學生物標記。

3 肺癌血清的蛋白質(zhì)組學研究

血清蛋白質(zhì)組學（serum proteomics）是蛋白質(zhì)組學的一個重要分支，血清蛋白與組織、細胞蛋白相比，蛋白數(shù)量最多、蛋白含量差別大。血清樣品易獲得，且產(chǎn)生的創(chuàng)傷小，被廣泛用于比較腫瘤和非腫瘤患者血清的蛋白質(zhì)組學差異及腫瘤候選標記物的檢測[17]。

沙慧芳等[18]采集健康者、肺部炎癥患者和肺癌患者的血漿各 10 例，應(yīng)用差異凝膠電泳、MALDL-TOF-MS 和生物信息學技術(shù)，對這些血漿進行蛋白質(zhì)組學研究，篩選出其中 7 種血漿高表達的腫瘤相關(guān)蛋白，這些蛋白有可能作為肺癌標記物來檢測肺癌。

聶贛娟等[19]采集 23 例肺癌患者和 14 例健康人的血清，以及 30 例肺鱗癌組織和 20 例癌旁組織，運用蛋白質(zhì)組學比較研究，識別了 10 個差異蛋白質(zhì)點，鑒定了 4 種差異蛋白。結(jié)果顯示，在肺鱗癌血清中結(jié)合珠蛋白 2 的表達量高于健康人；HP-2 在肺鱗癌組織中的表達水平高于癌旁正常支氣管上皮組織。這可以為通過檢測血清蛋白診斷肺鱗癌提供參考價值。

Choi 等[20]利用 2-DE 和 MALDI-TOF-MS 檢測高脂膳食調(diào)節(jié)對小鼠肺癌血清蛋白的影響，與正常組比較鑒定出 14 個差異蛋白，根據(jù)蛋白功能分為飲食相關(guān)類和腫瘤相關(guān)類兩類。其中有 10 個蛋白與肥胖和癌癥都有關(guān)系，另外 4 個只與癌癥有關(guān)，這項研究可為治療肥胖引起的癌癥提供新的方法。

Rostila 等[21]對石棉導致的肺癌組織、石棉照射的正常組織、肺癌患者和吸煙的健康人的肺組織進行蛋白質(zhì)組學研究，發(fā)現(xiàn) peroxiredoxin 1 是一種新型的肺癌標記物。血清中高表達的原肌球蛋白與石棉輻射相關(guān)，PRX1 和 PRX2 的表達量和吸煙量成負相關(guān)，高表達的 PRX1 可能導致基因損傷，這項研究為肺癌和與石棉相關(guān)疾病的鑒定提供了新的生物標記物。

Chatterji 和 Borlak[22]發(fā)現(xiàn)，肺泡上皮細胞針對性的過度表達 c-myc 基因可導致肺癌。對荷瘤鼠進一步研究發(fā)現(xiàn)，血清類黏蛋白 8、α-2 巨球蛋白、載脂蛋白 A1（apoA1）、載脂蛋白 C3（apoC3）谷胱甘肽過氧化物酶 3、血漿視黃醇結(jié)合蛋白、甲狀腺素運載蛋白的表達受癌癥影響。在癌癥晚期，載脂蛋白 E 的表達減少，并且血清淀粉樣蛋白 p 成分只在癌癥晚期表達。大多數(shù)疾病調(diào)節(jié)蛋白攜帶編碼基因的啟動子 E-box 序列（CACGTG），為其通過 c-myc 進行蛋白調(diào)控提供了相當重要證據(jù)。同時，α-2 巨球蛋白、甲狀腺素運載蛋白、抗胰蛋白酶和裂解素在不同的肺腫瘤模型中均有表達，通過荷瘤鼠 c-myc 與 c-raf 的血清蛋白比較，血清類黏蛋白 8、載脂蛋白 A1、載脂蛋白 C3、載脂蛋白 E、谷胱甘肽過氧化物酶 3、血漿視黃醇結(jié)合蛋白、血清淀粉樣 P 成分在兩者中不同時表達。因此，這些蛋白可推薦為區(qū)分 不典型腺瘤樣增生（AAH）和細支氣管肺泡癌（BAC）或乳頭狀腺癌（PLAC）的候選生物標記物。

Ueda 等[23]利用所獲得的肺癌患者和健康者血清，采用 SELDI-TOF-MS 技術(shù)和偶合凝集素蛋白質(zhì)芯片陣列技術(shù)結(jié)合進行分析，鑒定出 41 個蛋白質(zhì)峰值水平有顯著性差異 （P ＜ 0.05），并確認癌癥患者在載脂蛋白 C3 上Neu5Ac (α2,6)Gal/GalNAc 結(jié)構(gòu)的缺損。結(jié)果還表明，偶合凝集素的蛋白質(zhì)芯片技術(shù)允許高通量和特定癌變的糖蛋白的識別，暗示了該種蛋白質(zhì)芯片適用其他疾病研究的可能性。

Zeng 等[24]選擇一組非小細胞肺癌的病例血清（從 54 例患者中選擇腺癌 9 例，鱗狀細胞癌 6 例）和相應(yīng)的對照組。對照組還包括從臨床患者中選擇的良性腫囊 8 例，健康人 8 例。首先用免疫親和法去除最高豐度的血清蛋白，剩下的血清蛋白進行糖蛋白富集，隨后進行 LC-MS 技術(shù)分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，22 個差異蛋白中的 38 個高豐度表達的糖基化多肽在病例組和對照組顯著性不同（P ＜ 0.01，t 檢驗）。在層次聚類上，這些高豐度表達的蛋白在病例組和正常組幾乎完全分開。3 種候選的豐度差異蛋白經(jīng) ELISA 驗證，和色譜結(jié)果具有很強的正相關(guān)性。

Diamandis 等[25]從 203 名肺癌患者（其中 180 例為重度吸煙的高風險誘發(fā)肺癌者）、43 例非肺癌的癌癥患者中選取 422 例樣本，鑒定了 pentraxin-3（PTX3）、激肽釋放酶 11（KLK11）和顆粒蛋白前體蛋白（progranulin）3 個候選的肺癌生物標記物。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PTX3 是一種新的肺癌血清生物標記物，其診斷的敏感性和特異性等指標已達到其他類似的應(yīng)用于臨床的肺癌生物標記物水平。

4 問題和展望

肺癌的早期診斷一直是臨床醫(yī)學重要的研究課題之一，目前蛋白質(zhì)組學已成為肺癌早期診斷的重要工具，但距離真正大規(guī)模應(yīng)用于臨床尚有很長一段路要走。存在的主要問題包括樣品的制備、蛋白質(zhì)的有效分離與鑒定、蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫的進一步完善等。另外，肺癌標記物的發(fā)病機制研究只是剛剛起步，我們相信隨著技術(shù)的發(fā)展，蛋白質(zhì)組學研究有望在探索肺癌發(fā)病機制、肺癌早期診斷、尋找有效的肺癌治療靶點和研發(fā)治療肺癌藥物等方面發(fā)揮重大作用，為人類最終戰(zhàn)勝這一疾病作出貢獻。

[1] Zhan XQ, Guan YJ, Li C, et al. Differential proteomic analysis of human lung adenocarcinoma cell line A-549 and of normal cell line HBE. Acta Biochimica Biophysica Sinica, 2002, 34(1):50-56. (in Chinese) 詹顯全, 關(guān)勇軍, 李萃, 等. 人肺腺癌細胞A-549 和正常細胞HBE的蛋白質(zhì)組差異分析. 生物化學和生物物理學報, 2002, 34(1):50- 56.

[2] Li LP, Chen ZP, Jia HT, et al. Differential proteomic analysis of human lung adenocarcinoma cell line and bronchial epithelium cell line. Chin J Pathophysiology, 2010, 26(5):917-921. (in Chinese) 李麗萍, 陳智鵬, 賈海濤, 等. 人肺腺癌細胞系與支氣管上皮細胞系差異蛋白質(zhì)組學研究. 中國病理生理雜志, 2010, 26(5):917-921.

[3] Chang JW, Jeon HB, Lee JH, et al. Augmented expression of peroxiredoxin I in lung cancer. Biochem Biophys Res Commun, 2001, 289(2):507-512.

[4] Ying W, Zhang K, Qian X, et al. Proteome analysis on an early transformed human bronchial epithelial cell line, BEP2D, after alpha-particle irradiation. Proteomics, 2003, 3(1):64-72.

[5] Wang CI, Chien KY, Wang CL, et al. Quantitative proteomics reveals regulation of karyopherin subunit alpha-2 (KPNA2) and its potential novel cargo proteins in nonsmall cell lung cancer. Mol Cell Proteomics, 2012, 11(11):1105-1122.

[6] Jiang DF, Ying WT, Wan JH, et al. Characterization and identification of metastasis-associated proteins of lung cancer by comparative proteome analysis. Prog Biochem Biophys, 2003, 30(4):586-593. (in Chinese) 蔣代鳳, 應(yīng)萬濤, 萬晶宏, 等. 肺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白的比較蛋白組分析與鑒定. 生物化學和生物物理進展, 2003, 30(4):586-593.

[7] Gao LW, Zhu W, Feng ZH, et al. Comparative proteomic analysis of human large cell lung cancer cell line with high and low metastasis potentials. J Sichuan Univ (Med Sci Ed), 2008, 39(5):706-710. (in Chinese) 高利偉, 朱文, 馮志華, 等. 高轉(zhuǎn)移和低轉(zhuǎn)移人大細胞肺癌細胞株的比較蛋白組學研究. 四川大學學報(醫(yī)學版), 2008, 39(5):706- 710.

[8] Kuang P, Li XF, Li B, et al. Comparative proteomic analysis of human lung adenocarcinoma A549 and A549/DDP cells. Tumor, 2012, 32(3): 170-176. (in Chinese) 況鵬, 李雪飛, 李冰, 等. 人肺腺癌細胞株A549 和A549/DDP 的比較蛋白質(zhì)組學研究. 腫瘤, 2012, 32(3):170-176.

[9] Planque C, Kulasingam V, Smith CR, et al. Identification of five candidate lung cancer biomarkers by proteomics analysis of conditioned media of four lung cancer cell lines. Mol Cell Proteomics, 2009, 8(12):2746-2758.

[10] Zeng GQ, Zhang PF, Deng X, et al. Identification of candidate biomarkers for early detection of human lung squamous cell cancer by quantitative proteomics. Mol Cell Proteomics, 2012, 11(6):M111. 013946.

[11] Yan Z, Liu GZ, Wang JS, et al. Proteomic screening of the proteins associated with early lung squamous carcinoma. Tumor, 2010, 30(2):130-133. (in Chinese) 燕貞, 劉桂芝, 王建設(shè), 等. 蛋白質(zhì)組學方法篩選早期肺鱗癌相關(guān)蛋白. 腫瘤, 2010, 30(2):130-133.

[12] Zhang HZ, Ba Y, Yang JY, et al. Screening and identification of lung cancer associated proteins. J Fourth Mil Med Univ, 2007, 28(1):6-8. (in Chinese) 張慧珍, 巴月, 楊繼要, 等. 肺癌相關(guān)蛋白的篩選與鑒定. 第四軍醫(yī)大學學報, 2007, 28(1):6-8.

[13] Alfonso P, Catalá M, Rico-Morales ML, et al. Proteomic analysis of lung biopsies: Differential protein expression profile between peritumoral and tumoral tissue. Proteomics, 2004, 4(2):442-447.

[14] Chen G, Gharib TG, Thomas DG, et al. Proteomic analysis of eIF-5A in lung adenocarcinomas. Proteomics, 2003, 3(4):496-504.

[15] Kikuchi T, Hassanein M, Amann JM, et al. In-depth proteomic analysis of nonsmall cell lung cancer to discover molecular targets and candidate biomarkers. Mol Cell Proteomics, 2012, 11(10):916-932.

[16] Tan F, Jiang Y, Sun N, et al. Identification of isocitrate dehydrogenase 1 as a potential diagnostic and prognostic biomarker for non-small cell lung cancer by proteomic analysis. Mol Cell Proteomics, 2012, 11(2): M111.008821.

[17] Yang GH, Dai Z, Zhou J. Advance in proteomic study of hepatocellular carcinoma. World Chin J Digestology, 2008, 16(22): 2487-2492. (in Chinese) 楊國歡, 代智, 周儉. 肝細胞癌的蛋白質(zhì)組學研究進展. 世界華人消化雜志, 2008, 16(22):2487-2492.

[18] Sha HF, Sun QL, Yang XH, et al. Screening of differentially expressed serum proteins of lung cancer by DIGE and MALDI-TOF MS/MS. J Shanghai Jiaotong Univ (Med Sci), 2010, 30(4):399-403. (in Chinese) 沙慧芳, 孫強玲, 楊曉華, 等. 應(yīng)用差異凝膠電泳及質(zhì)譜技術(shù)篩選肺癌患者血漿差異蛋白. 上海交通大學學報(醫(yī)學版), 2010, 30(4): 399-403.

[19] Nie GJ, Zhou JH, Li MY, et al. Differential proteomic analysis of sera from lung squamous carcinoma patients and healthy individuals. Prog Biochemi Biophys, 2008, 35(3):349-355. (in Chinese) 聶贛娟, 周建華, 李茂玉, 等. 肺鱗癌患者與健康人血清的差異蛋白質(zhì)組學研究. 生物化學與生物物理進展, 2008, 35(3):349-355.

[20] Choi JW, Liu H, Song H, et al. Plasma marker proteins associated with the progression of lung cancer in obese mice fed a high-fat diet. Proteomics, 2012, 2(12):1999-2013.

[21] Rostila A, Puustinen A, Toljamo T, et al. Peroxiredoxins and tropomyosins as plasma biomarkers for lung cancer and asbestos exposure. Lung Cancer, 2012, 77(2):450-459.

[22] Chatterji B, Borlak J. A 2-DE MALDI-TOF study to identify disease regulated serum proteins in lung cancer of c-myc transgenic mice. Proteomics, 2009(9):1044-1056.

[23] Ueda K, Fukase Y, Katagiri T, et al. Targeted serum glycoproteomics for the discovery of lung cancer-associated glycosylation disorders using lectin-coupled ProteinChip arrays. Proteomics, 2009, 9(8):2182- 2192.

[24] Zeng X, Hood BL, Sun M, et al. Lung cancer serum biomarker discovery using glycoprotein capture and liquid chromatography mass spectrometry. J Proteome Res, 2010, 9(12):6440-6449.

[25] Diamandis EP, Goodglick L, Planque C, et al. Pentraxin-3 is a novel biomarker of lung carcinoma. Clin Cancer Res, 2011, 17(8):2395- 2399.