Rh(D)陰性獻(xiàn)血者資料庫的建立及其構(gòu)成狀況調(diào)查

盧海燕，姜利軍

(懷化市中心血站，湖南懷化418000)

Rh血型系統(tǒng)是人類最復(fù)雜的血型系統(tǒng)，也是輸血醫(yī)學(xué)最主要的血型系統(tǒng)之一，在世界人口比例中屬Rh(D)陰性血型人只占0.3%左右，在中國漢族人群中占0.2% ～0.5%［1-2］。因Rh(D)陰性比例低，常規(guī)備血相當(dāng)困難，近年來雖然有些地方采用了紅細(xì)胞冰凍技術(shù)，但在實(shí)際應(yīng)用中所起的作用十分有限，所以建立起一支稀有血型獻(xiàn)血者隊(duì)伍顯得尤為重要。為豐富本站的Rh(D)陰性血液，以滿足臨床的需求，近年來，本站加大對Rh(D)陰性獻(xiàn)血者的篩查工作，建立了一支Rh(D)陰性獻(xiàn)血者隊(duì)伍和稀有血型血庫。近期我們對該資料庫的構(gòu)成狀況進(jìn)行了調(diào)查。

材料和方法

一、標(biāo)本來源

1998年5月1日～2011年12月31湖南省懷化市無償獻(xiàn)血者136 887名，年齡18～55歲，身體健康檢查均符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》［3］。

二、標(biāo)本采集

獻(xiàn)血者留取2.5 mL血樣本，肝素抗凝，并且在每個標(biāo)本上貼條形碼標(biāo)簽，備用。

三、試劑

IgM抗-D血清購自加拿大DBL公司，IgM 抗-C、抗-c、抗-E、抗-e單克隆抗體購自英國Serolgicai Ltd公司、德國Biotest公司;抗人球蛋白試劑購自上海血液生物制藥有限責(zé)任公司、加拿大DBL公司;篩選紅細(xì)胞由上海血液生物制藥有限公司生產(chǎn);凝聚胺試劑購自合肥天一生物技術(shù)研究所;IgM+IgG抗-D血清購自加拿大DBL公司及Dominion Biologicals Limited公司。

四、Rh血型系統(tǒng)表型的檢測

參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》［4］(血型血清學(xué)部分)進(jìn)行。

1.初篩試驗(yàn) IgM抗-D血清，由檢驗(yàn)科采用平板法進(jìn)行初篩，按照試劑說明書操作，結(jié)果可疑者用試管法確認(rèn)，初篩陰性標(biāo)本送血型參比室進(jìn)行確認(rèn)試驗(yàn)。

2.確認(rèn)試驗(yàn) 初篩陰性標(biāo)本采用2個不同廠家IgM+IgG抗-D血清，用間接人球蛋白試驗(yàn)進(jìn)行確認(rèn)，經(jīng)初篩和確認(rèn)均為陰性的標(biāo)本為Rh(D)陰性，初篩試驗(yàn)為陰性而確認(rèn)中有1個或1個以上試劑檢測為陽性的標(biāo)本定為弱D。

3.Rh表型篩選 采用IgM 抗-C、抗-c、抗-E、抗-e單克隆抗體試管法進(jìn)行篩選，凝集為陽性，不凝集為陰性。

4.不規(guī)則抗體篩選 采用凝聚胺法和抗人球蛋白法，均按試劑說明書操作。陰性結(jié)果用排除法，陽性結(jié)果用可能包含法，根據(jù)獻(xiàn)血者血清與篩檢紅細(xì)胞反應(yīng)格局，初步判斷獻(xiàn)血者血清中可能出現(xiàn)的抗體，再用譜細(xì)胞做鑒定試驗(yàn)。

5.Rh(D)陰性獻(xiàn)血者資料庫的建立 將篩出的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者，分別建立以ABO血型、人口來源、性別、年齡、民族、聯(lián)系電話、獻(xiàn)血證件及出生年月日等資料為主的檔案，然后匯總所有Rh(D)陰性獻(xiàn)血者的檔案，即形成Rh(D)陰性獻(xiàn)血者資料庫。

6.Rh(D)陰性獻(xiàn)血者資料庫的構(gòu)成狀況調(diào)查 將資料庫中的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者分別按ABO血型、性別、人口來源、年齡及民族分類，分別統(tǒng)計(jì)各類中的A型、B型、AB型及O型Rh(D)陰性獻(xiàn)血者的例數(shù)。

五、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

結(jié) 果

一、在136 887名無償獻(xiàn)血者中共篩選出Rh(D)陰性獻(xiàn)血者 340名(0.25%)、弱 D 2名(0.005%)、不規(guī)則抗體1名(0.002%)。按ABO血型分為 A型 99名(29.1%)、B型 86名(25.3%)、O 型 124名(36.4%)、AB型 31名(9.2%)。

二、340名Rh(D)陰性者的表現(xiàn)型與基因型的分布情況見表1。340名Rh(D)陰性表現(xiàn)型的頻率ccdee最高，占49.7%，其次為Ccdee，其他依次為CCdee＞ccdEe＞CcdEe＞CCdEe＞ccdEE。

表1 340名Rh(D)陰性者的表現(xiàn)型與基因型分布

三、無償獻(xiàn)血者弱D抗原是D抗原量的變化，即每個RBC上正常D抗原表位是完整的，只是表達(dá)弱，RBC上抗原點(diǎn)單純性減少，不能被IgM抗-D凝集，但在IgG抗-D的抗球蛋白試驗(yàn)中有凝集。本資料庫中A型CcDuee 1例、B型CcDuEE1例。

四、資料庫中的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者按性別分類，男性及女性Rh(D)陰性獻(xiàn)血者的例數(shù)及其ABO血型分布見表2。

表2 Rh(D)陰性獻(xiàn)血者的男、女例數(shù)及其ABO血型分布

五、資料庫中的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者按人口來源分類，常住人口及流動人口的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者的例數(shù)及其ABO血型分布見表3。

六、資料庫中的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者按年齡分類，不同年齡的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者的例數(shù)及其ABO血型分布見表4。

表3 常住及流動人口的Rh(D)陰性者例數(shù)及ABC血型分布

七、資料庫中的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者按民族分類，不同民族的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者的例數(shù)及其ABO血型分布見表5。

表4 不同年齡的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者例數(shù)及其ABO血型分布

表5 不同民族的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者例數(shù)及ABO血型分布

討 論

Rh血型系統(tǒng)是僅次于ABO血型系統(tǒng)的第二大紅細(xì)胞血型系統(tǒng)，是最復(fù)雜的遺傳多態(tài)性血型系統(tǒng)之一。Rh系統(tǒng)內(nèi)有45種不同的抗原，D抗原最為重要。根據(jù)紅細(xì)胞上D抗原的有無，可分類紅細(xì)胞為Rh陽性或Rh陰性。Rh系統(tǒng)主要抗原有C、c、E、e。Rh陰性個體經(jīng)由輸血或懷孕接觸D抗原后，3個人中就有2個會產(chǎn)生抗-D抗體［5］。此抗體可引起輸入的 Rh陽性紅細(xì)胞破壞，若不經(jīng)免疫球蛋白預(yù)防，抗-D將成為最常見的嚴(yán)重的新生兒溶血病抗體。在懷孕期間，IgG類抗-D能通過胎盤影響Rh陽性胎兒，引起新生兒溶血?。?］。

本研究結(jié)果顯示，Rh(D)陰性者在本血站的獻(xiàn)血者中的分布頻率較低，僅為0.25%。在表型分析中可見表型ccdee最多見，ccdEE、CcdEe和CCdEe表型在ABO各型中分布較罕見，表型分析中未發(fā)現(xiàn)CCdEE和CcdEE表型，符合Rh血型系統(tǒng)在血清學(xué)有復(fù)雜表現(xiàn)及表型頻率嚴(yán)重不平衡的特點(diǎn)［7］。如遇到臨床急需時，無法供應(yīng)或供應(yīng)難度大。另外，弱D或不完全D及已產(chǎn)生不規(guī)則抗體者的存在，提醒我們在輸血時要給這些人群輸入Rh(D)陰性的血液，并要配型成功。已產(chǎn)生抗體者，以后不宜再獻(xiàn)血，如果需要輸血時，一定要輸入Rh(D)陰性血液［8］。我們于2002年開始，從廣泛的獻(xiàn)血者中篩查Rh(D)陰性獻(xiàn)血者，并對篩出的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者分別建立檔案，然后根據(jù)Rh分型結(jié)果、血型抗體檢測結(jié)果、血型分布和獻(xiàn)血史等情況輸入計(jì)算機(jī)管理系統(tǒng)，形成Rh(D)陰性獻(xiàn)血者資料庫，滿足臨床供血者、受血者間Rh、ABO血型系統(tǒng)各種不同相適度的快速、準(zhǔn)確、詳細(xì)的優(yōu)選檢索。由此可見，建立Rh(D)陰性獻(xiàn)血者資料庫，是滿足臨床對Rh(D)陰性血液需求的首要保證。

通過對Rh(D)陰性獻(xiàn)血者資料庫的構(gòu)成狀況調(diào)查發(fā)現(xiàn):(1)資料庫中的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者，年齡在18～42歲之間的例數(shù)較多，占278名(81.76%)，這種狀況有利于豐富Rh(D)陰性血液的來源;(2)資料庫中的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者的民族分布不平衡，漢族人口較多，其他民族人口較少，這種狀況對Rh(D)陰性血液的來源影響不大;(3)資料庫中的Rh(D)陰性獻(xiàn)血者的ABO血型有些偏型、屬流動人口較多及有2名年齡偏大已不適合獻(xiàn)血。這種狀況將影響Rh(D)陰性血液的來源，日久將導(dǎo)致無法滿足臨床對Rh(D)陰性血液的需求。針對資料庫中存在的不利狀況，我們認(rèn)為，為能夠做到長期滿足臨床對Rh(D)陰性血液的需求應(yīng)做到:(1)必須加強(qiáng)Rh(D)陰性獻(xiàn)血者的隊(duì)伍建設(shè)，使原來稀少且較分散的血源相對集中起來，便于在急需時能做到及時、準(zhǔn)確、便捷的查找;(2)僅僅建立檔案是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，如果沒有自愿獻(xiàn)血者，在急需用血時不能做到隨叫隨到，那么前面的工作將是徒勞的。這就要求在宣傳和動員方面下功夫，可以成立Rh(D)陰性獻(xiàn)血者愛心之家，定期舉辦聯(lián)誼會，并通過Rh(D)陰性獻(xiàn)血者之間開展互助、獻(xiàn)愛心的活動，調(diào)動大家參加無償獻(xiàn)血的積極性，保證了志愿者隊(duì)伍的長期穩(wěn)定性，使他們深切了解獻(xiàn)血的知識和意義，同時加強(qiáng)血站與獻(xiàn)血者之間的溝通，便于今后工作的開展;(3)建立冷凍血庫，積極推廣低溫保存技術(shù)［9-10］，做好罕見表型血液的保存工作，以備急時所用;(4)血站要為臨床輸血提供科學(xué)依據(jù)，更好地指導(dǎo)各大醫(yī)院臨床Rh(D)陰性血的正確輸注，幫助和督促臨床醫(yī)生嚴(yán)格掌握輸血適應(yīng)證，做到科學(xué)、合理用血，避免不必要的輸血，可輸可不輸?shù)难M可能不輸。因Rh(D)陰性血稀有珍貴，建議有條件的患者要進(jìn)行貯存式、稀釋式或回收式自身輸血［11-12］，這是解決稀有血型輸血的重要途徑之一。做好這些工作，血站一定能夠做好長期滿足臨床對Rh(D)陰性血液的需求，從而保障Rh(D)陰性患者的輸血安全。

［1］ 江清華，李 鑫，蔡于旭，等.海南地區(qū)Rh(D)陰性血型資料庫的建立與臨床應(yīng)用［J］.中國輸血雜志，2007，20(3):222.

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［3］中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局.獻(xiàn)血者健康檢查要求［S］.GB18467-2001，中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局，2001.

［4］葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程［M］.第3版.南京:東南大學(xué)出版社，2006:249-251.

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