復(fù)合血脂質(zhì)控品的制備及性能評價(jià)

唐立萍，張瑞鎬，居 漪，王美娟，胡春力，諸佩超，詹方堯

(1.上海市臨床檢驗(yàn)中心，上海200126;2.上海伊華醫(yī)學(xué)科技有限公司，上海201203)

載脂蛋白A1(apo A1)、載脂蛋白B(apo B)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、膽固醇(CHOL)及甘油三酯(TG)是臨床生化脂質(zhì)代謝檢驗(yàn)的最常用的檢驗(yàn)項(xiàng)目。對高血脂癥的篩選是針對心血管危險(xiǎn)因素的常規(guī)檢查，具有重要的臨床檢測價(jià)值。為保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)通過室內(nèi)質(zhì)量控制(IQC)系統(tǒng)，使用質(zhì)控品，確立質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)，間接評價(jià)檢測結(jié)果的精密度，同時(shí)結(jié)合室間質(zhì)量評價(jià)(EQA)間接評價(jià)檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。但目前我國所用的多為國外進(jìn)口質(zhì)控品，面臨價(jià)格昂貴、入關(guān)難等問題。因此，我們研制了一種液體非定值血脂質(zhì)控品，采用混合人血清為基質(zhì)，可替代人血清用于臨床實(shí)驗(yàn)室的日常IQC以及進(jìn)行不同實(shí)驗(yàn)室之間的EQA和檢測結(jié)果一致性調(diào)查使用。

材料和方法

一、材料

1.儀器和試劑 日立7180全自動(dòng)生化分析儀。HDL-C、LDL-C、CHOL、TG 試劑盒由日本和光(Wako)純藥工業(yè)株式會(huì)社提供。apo A1、apo B試劑盒由羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司提供。

2.校準(zhǔn)品 采用羅氏多項(xiàng)目校準(zhǔn)品(c.f.a.s)、羅氏脂類多項(xiàng)校準(zhǔn)品(c.f.a.s lipids)和Wako復(fù)合脂類校準(zhǔn)品。

3.參考質(zhì)控品 Bio-Rad血脂調(diào)查品。

4.主要原材料 人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體、丙型肝炎病毒(HCV)抗體、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陰性的混合人血清，疊氮鈉，穩(wěn)定劑。液體 apo A1抗原、apo B抗原、HDL-C、LDL-C、CHOL及TG成分由上海北加生化試劑有限公司提供。

二、制備過程

選取HIV抗體、HCV抗體、HBsAg均陰性的血清混合，儲存于 -80℃凍存?zhèn)溆谩Ｈ崈?0 mL量筒及250 mL三角燒瓶各2個(gè)，用工藝用水沖洗3次，置37℃，烘干。按需量取上述備用人血清，檢測各成分濃度。按需添加apo A1抗原、apo B 抗原、HDL-C、LDL-C、CHOL 及 TG 等成分。經(jīng)核對無誤后，放入容器內(nèi)，添加萬分之二疊氮鈉及穩(wěn)定劑。將容器用薄膜密閉封口，上下左右輕輕振搖10 min，重復(fù)3次，每次間隔10 min，混勻。檢測中間品各成分，確定檢測值是否與預(yù)期值相符合(允許偏移≤15%)。用0.22 μm孔徑的硝酸纖維素濾膜抽濾，分裝，每瓶分裝1 mL，各分裝50瓶。置-20℃保存。

三、評價(jià)方法

校準(zhǔn)儀器系統(tǒng)，所需檢測項(xiàng)目試劑重新定標(biāo)。使用Bio-Rad血脂調(diào)查品做IQC。

1.精密度 取同批號的在-20℃密閉保存的自制質(zhì)控品11瓶，每瓶檢測1次，計(jì)算測定結(jié)果的均值(1)和標(biāo)準(zhǔn)差(s1)，即批間精密度。另取其中1瓶連續(xù)測定11次，計(jì)算測定結(jié)果的2和s2，即批內(nèi)精密度;按下列公式計(jì)算瓶間重復(fù)性［變異系數(shù)(CV)］。

2.儲存穩(wěn)定性 質(zhì)控品制備后各項(xiàng)目分別檢測2 次，計(jì)算，置 -20 ℃保存。分別于第4、5、11、13、14、16、18個(gè)月隨機(jī)抽取1瓶自制質(zhì)控品，復(fù)溶、混勻后分別測定各項(xiàng)目2次，與其初始比較，計(jì)算偏移。偏移(%)=［(當(dāng)月檢測值-初始檢測值)÷初始檢測值］×100%。

3.開瓶穩(wěn)定性 取在-20℃密閉保存的質(zhì)控品，開封后置2～8℃密閉存放，每天檢測2次，取。連續(xù)檢測19 d，計(jì)算連續(xù)19 d檢測結(jié)果的變異系數(shù)(CV)。

結(jié) 果

一、精密度(瓶間差)

各項(xiàng)目精密度應(yīng)≤1/4 CLIA’88可接受性能指標(biāo)，即 apo A1、apo B、HDL-C、LDL-C 的 CV≤7.5%。CHOL的CV≤2.5%，TG的CV≤6.25%。檢測結(jié)果見表1。質(zhì)控品各項(xiàng)目瓶間差均符合要求。

表1 自制質(zhì)控品各項(xiàng)目精密度(瓶間差)

二、穩(wěn)定性

1.儲存穩(wěn)定性 偏移結(jié)果應(yīng)符合1/2美國CLIA’88可接受性能指標(biāo)規(guī)定，即apo A1、apo B、HDL-C、LDL-C的偏移≤±15%，CHOL的偏移≤±5%，TG的偏移≤ ±12.5%。自制質(zhì)控品-20℃保存18個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)的穩(wěn)定性均符合要求。結(jié)果見表2。

2.開瓶穩(wěn)定性 各項(xiàng)目CV應(yīng)≤1/4美國CLIA’88 可接受性能指標(biāo)，即 apo A1、apo B、HDL-C、LDL-C的 CV≤7.5%，CHOL的 CV≤2.5%，TG的CV≤6.25%。自制質(zhì)控品開瓶后連續(xù)檢測19 d，各項(xiàng)目CV均符合要求。結(jié)果見表3。

表2 自制質(zhì)控品-20℃保存第1個(gè)月與第4、11、13、14、16及18個(gè)月結(jié)果比較

表3 自制質(zhì)控品開瓶后連續(xù)檢測19 d結(jié)果

討 論

隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，生活水平的提高和生活方式的變化，我國血脂異常人群已達(dá)到1.6億［1］。大量研究表明血脂異常是心血管疾病和缺血性腦卒中發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素。因此，臨床工作中經(jīng)常采用血脂指標(biāo)評估相關(guān)疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，如 TG、CHOL、LDL-C、HDL-C、apo A1、apo B等［2］。

為保證檢測結(jié)果的可靠性，IQC和EQA是質(zhì)量管理體系中一個(gè)重要環(huán)節(jié)，其控制著整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程，如樣本吸取、樣本測定、結(jié)果分析等，是保證高質(zhì)量操作的必要措施［3］。質(zhì)控品是保證室內(nèi)質(zhì)控工作順利進(jìn)行的重要物質(zhì)基礎(chǔ)。隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量控制的開展和深入，生產(chǎn)質(zhì)控品的單位日益增多，合格的質(zhì)控品應(yīng)具有分析物穩(wěn)定、均一、瓶間差異小、合理的分析物濃度和摻入成份對測定無干擾等特性，其中分析物的穩(wěn)定性是評價(jià)質(zhì)控品優(yōu)劣的首要指標(biāo)。

目前血脂指標(biāo)有多種測定試劑及方法，各試劑方法間測定的敏感性及不精確度不同，樣本采集后，由于細(xì)胞的代謝活動(dòng)、化學(xué)反應(yīng)、微生物降解、滲透作用、光學(xué)作用等，都將直接或間接地影響到分析結(jié)果的準(zhǔn)確性［4］。但受多種因素的影響，特別是試劑的質(zhì)量不一，不同廠家的質(zhì)控品穩(wěn)定性不一致，無論選用哪種均應(yīng)滿足穩(wěn)定性好、基質(zhì)效應(yīng)小的要求。而進(jìn)口質(zhì)控品價(jià)格比較昂貴，入關(guān)較難。本研究采用混合人血清(HIV抗體、HCV抗體、HBsAg陰性)為基質(zhì)，自制了液體非定值血脂質(zhì)控品，可替代人血清用于臨床實(shí)驗(yàn)室的IQC以及進(jìn)行不同實(shí)驗(yàn)室之間的(EQA)和檢測結(jié)果一致性調(diào)查使用。我國目前尚無血脂質(zhì)控品的國家或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，因此參考臨床實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制現(xiàn)行主要評價(jià)方法，以美國CLIA’88可接受性能指標(biāo)為實(shí)驗(yàn)室EQA評價(jià)指標(biāo)，以1/2 CLIA’88可接受性能指標(biāo)為實(shí)驗(yàn)室IQC評價(jià)指標(biāo)。制訂以1/4美國CLIA’88可接受性能指標(biāo)為本質(zhì)控品精密度技術(shù)指標(biāo)，以1/2美國 CLIA’88可接受性能指標(biāo)為本質(zhì)控品穩(wěn)定性技術(shù)指標(biāo)。本研究中自制質(zhì)控品的6項(xiàng)檢測指標(biāo)精密度均符合1/4美國CLIA’88可接受性能指標(biāo)。于-20℃密閉保存，連續(xù)18個(gè)月性能穩(wěn)定，6項(xiàng)檢測指標(biāo)的偏移均＜1/2美國CLIA’88可接受性能指標(biāo)，符合要求。開瓶后于2～8℃密閉保存連續(xù)19 d，性能穩(wěn)定，6項(xiàng)檢測指標(biāo)19 d的偏移均＜1/4美國 CLIA’88可接受性能指標(biāo)，精密度較好。本研究同時(shí)將Bio-Rad血脂質(zhì)控品(進(jìn)口)水平1和水平2進(jìn)行了比較試驗(yàn)，自制質(zhì)控品精密度與之相似。開瓶后于2～8℃密閉保存可穩(wěn)定19 d，長于Bio-Rad血脂質(zhì)控品說明書中的14 d。Bio-Rad血脂質(zhì)控品-20℃密閉保存可穩(wěn)定約2年，而本研究自制質(zhì)控品連續(xù)18個(gè)月性能穩(wěn)定，至于更長時(shí)間的穩(wěn)定性情況需作進(jìn)一步研究。由于時(shí)間、實(shí)驗(yàn)條件等限制，本研究自制質(zhì)控品在不同儀器、不同試劑(方法)等的測定特性還有待進(jìn)一步研究、完善。

綜上所述，本研究自制質(zhì)控品均勻性、穩(wěn)定性都能滿足要求，且有原料來源方便，價(jià)格便宜之優(yōu)勢，有利于開展IQC和EQA，提高檢測質(zhì)量。為國內(nèi)相關(guān)診斷試劑產(chǎn)業(yè)的全面、健康發(fā)展，為臨床實(shí)驗(yàn)室間最終實(shí)現(xiàn)結(jié)果的準(zhǔn)確、可比性提供可行的實(shí)驗(yàn)技術(shù)支撐。

［1］中國成人血脂異常防治指南制訂聯(lián)合委員會(huì).中國成人血脂異常防治指南［J］.中華心血管病雜志，2007，35(5):390-419.

［2］Burtis CA，Ashwood ER，Bruns DE.Tietz textbook of clinical chemistry and molecular diagnostics［M］.6th edition.St.Louis Missouri:Elsevier Saunders，2008:402-430.

［3］王治國，李小鵬，武平原.臨床檢驗(yàn)定量測定室內(nèi)質(zhì)控系統(tǒng)的建立［J］.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2004，19(1):6-9.

［4］章晉林，張小鵬.血液標(biāo)本的保存條件與保存時(shí)間對常規(guī)生化檢測結(jié)果的影響［J］.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2005，20(6):9-10.