淺談乳制品抗生素殘留檢測(cè)

摘要：隨著廣大消費(fèi)者食品安全意識(shí)的提高，乳制品中抗生素殘留超標(biāo)的問題愈來愈引起人們關(guān)注，如何檢測(cè)乳制品中的抗生素，杜絕乳制品中抗生素的存在，消除給消費(fèi)者的健康帶來了威脅，這是乳品行業(yè)事在必行的任務(wù)，這就要求相關(guān)部門提高抗生素的檢測(cè)技術(shù)，從源頭控制原料乳中抗生素殘留，保證乳制品質(zhì)量。

關(guān)鍵詞：抗生素殘留 乳制品抗生素 檢測(cè)

1 抗生素的來源

中國(guó)乳制品行業(yè)起步晚，起點(diǎn)低，但發(fā)展迅速，特別是改革開放以來，奶類生產(chǎn)量以每年兩位數(shù)的增長(zhǎng)幅度迅速增加，與此同時(shí)，畜牧業(yè)也發(fā)展迅速，眾多的抗生素在乳牛飼養(yǎng)中得到了廣泛的應(yīng)用，其中以β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等為主，造成乳制品中大量的抗生素殘留。

從目前我國(guó)乳制品中殘留的抗生素近況來看，抗生素作為一種治療用藥，目前已被廣泛用于乳牛疾病的治療，無論是通過口服還是肌肉注射，進(jìn)入牛體中的抗生素都可以通過乳牛自身的代謝排出體外，而牛乳就是牛體將抗生素排出體外的一個(gè)重要途經(jīng)。我國(guó)乳制品標(biāo)準(zhǔn)中有明確規(guī)定，注射過抗生素的乳牛5天內(nèi)所產(chǎn)的牛乳不允許出售和食用，然而，有些奶戶沒有按要求處理含抗生素牛乳，為了謀取利益，向乳品企業(yè)出售含抗生素的牛乳；有些奶戶定期給健康乳牛的飼料中添加抗生素或注射抗生素藥物；有些奶戶為了防止牛乳酸敗而非法在乳中摻入抗生素，以上種種都造成了牛乳中出現(xiàn)抗生素的殘留。

2 抗生素殘留的危害

牛乳中殘留抗生素，對(duì)于乳品生產(chǎn)廠來說，會(huì)造成對(duì)原料乳質(zhì)量的誤判，給企業(yè)生產(chǎn)酸奶或奶酪造成失敗，給企業(yè)的產(chǎn)品帶來潛在的消費(fèi)危害，給企業(yè)造成經(jīng)濟(jì)損失。對(duì)于消費(fèi)者來說，長(zhǎng)期食用含抗生素的牛乳，無疑是等于長(zhǎng)期服用了小劑量的抗生素，對(duì)抗生素有過敏體質(zhì)的人服用殘留抗生素牛乳會(huì)發(fā)生過敏反應(yīng)，即使正常飲用者如果長(zhǎng)期服用含抗生素的牛乳，可使體內(nèi)致病細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，給臨床治療帶來很大麻煩。

生產(chǎn)無抗生素的乳制品是每個(gè)乳品生產(chǎn)企業(yè)必須做的一項(xiàng)工作，同時(shí)也是食品國(guó)家安全標(biāo)準(zhǔn)中明確規(guī)定的。嚴(yán)格控制牛乳中抗生素殘留，用必要的檢測(cè)手段對(duì)生鮮牛乳中抗生素進(jìn)行檢測(cè)，是保證乳制品無抗生素的先行條件。

3 牛乳中抗生素殘留檢測(cè)

3.1 目前牛乳中抗生素殘留的檢測(cè)方法大致分為三類：微生物法、理化分析法、免疫法。

3.2 微生物檢測(cè)法

3.2.1 嗜熱鏈球菌法也稱TTC檢測(cè)法 嗜熱鏈球菌法也稱TTC檢測(cè)法，是我國(guó)鮮牛乳中抗生素殘留量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)GB/T4789.27-2008中第一法，此方法測(cè)定原理是基于抗生素對(duì)微生物的抑制作用，樣品經(jīng)過80℃殺菌后，添加嗜熱鏈球菌液，培養(yǎng)一段時(shí)間后，嗜熱鏈球菌開始增殖，這時(shí)候加入代謝物2，3，5-氯化三苯四氮唑（TTC），嗜熱鏈球菌將繼續(xù)增殖，還原TTC成紅色物質(zhì)，相反，如果樣品中含有高于檢測(cè)限的抑菌劑，則嗜熱鏈球菌受到抑制，因此指示劑TTC不還原，保持原色。此方法的優(yōu)點(diǎn)是費(fèi)用低、易開展，對(duì)抗生素具有廣譜性。缺點(diǎn)是耗時(shí)長(zhǎng)，要求操作人員需有一定專業(yè)知識(shí)，且實(shí)驗(yàn)過程中菌液的制備、水浴過程控制都要求嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，否則易出現(xiàn)假陽性。

3.2.2 嗜熱脂肪芽胞桿菌抑制方法 嗜熱脂肪芽胞桿菌抑制方法，是我國(guó)鮮牛乳中抗生素殘留量檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)GB/T4789.27-2008中第二方法，此方主要是培養(yǎng)基預(yù)先混合嗜熱脂肪芽胞桿菌，并含有pH指示劑（溴甲本分紫），加入樣品并孵育后，若樣品中不含有抗生素或抗生素的濃度低于檢測(cè)限，細(xì)菌芽胞將在培養(yǎng)基中生長(zhǎng)并利用乳糖產(chǎn)酸，pH指示劑的紫色變?yōu)辄S色。相反，如果樣品中含有高于檢測(cè)限的抗生素，則細(xì)菌芽胞不會(huì)生長(zhǎng)，pH批示劑的顏色保持不變，仍為紫色。此法優(yōu)點(diǎn)是目前均有商用專用試劑，如荷蘭戴爾沃檢測(cè)（Delvotest SP）法，西班牙利普斯E50法；檢驗(yàn)時(shí)無需特殊設(shè)備，操作方法簡(jiǎn)單，容易判斷，結(jié)果可靠，費(fèi)用較低，對(duì)抗生素具有廣譜性；缺點(diǎn)是結(jié)果偶爾會(huì)出現(xiàn)假陽性，檢驗(yàn)時(shí)間長(zhǎng)。

以上兩種檢測(cè)方法是我國(guó)鮮牛乳抗生素檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)方法，由于檢驗(yàn)時(shí)間在2.5-3小時(shí)，無法滿足目前乳品企業(yè)對(duì)原料乳驗(yàn)收的檢驗(yàn)要求。

3.3 理化檢測(cè)方法 在牛乳中抗生素殘留檢測(cè)方面，最常用的理化檢測(cè)方法是高效液相色譜和色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)。

3.3.1 高效液相色譜（HPLC）檢測(cè)法 高效液相色譜（HPLC）檢測(cè)法，是利用抗生素分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或性質(zhì)來測(cè)定其含量，幾乎所有的化合物包括高極性/離子型待測(cè)物和大分子物質(zhì)均可用HPLC進(jìn)行測(cè)定。樣品經(jīng)過提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟提取牛奶中抗生素分子。處理樣品和流動(dòng)相經(jīng)過色譜柱，樣品中的成分在色譜柱中反復(fù)分配，使各組分分離，然后由檢測(cè)器檢測(cè)各組分含量。HPLC的特點(diǎn)是靈敏度高、檢測(cè)限低、方法穩(wěn)定，因此廣泛應(yīng)用于青霉素類、四環(huán)素類等抗生素及呋喃類藥物、磺胺類藥物的殘留檢測(cè)，但檢測(cè)程序復(fù)雜，費(fèi)用較高，需購(gòu)買液相色譜儀等檢測(cè)設(shè)備。

3.3.2 色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù) 色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，是現(xiàn)代獸藥殘留分析發(fā)展特點(diǎn)，聯(lián)用技術(shù)實(shí)現(xiàn)了高效層析分離和檢測(cè)聯(lián)機(jī)，可用微電腦控制層析條件、程序并且可以進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，其特異性、靈敏度和重復(fù)性均較好，并可一次同時(shí)完成同一樣本中多種藥物及其代謝物檢測(cè)。對(duì)于分析牛奶中青霉素類抗生素，質(zhì)譜作為一種專一檢測(cè)器已獲得廣泛應(yīng)用。常見的聯(lián)用技術(shù)有薄層色譜-質(zhì)譜（TLC-MS）、氣相色譜一質(zhì)譜（GC-MS）、液相色譜-質(zhì)譜（LC-MS）、超臨界流體色譜-質(zhì)譜（SFC-MS）等。特點(diǎn)是能方便地對(duì)ng級(jí)的獸藥殘留組分進(jìn)行檢測(cè)與結(jié)構(gòu)確定，但檢測(cè)程序復(fù)雜，費(fèi)用較高，需要昂貴的儀器設(shè)備，適合于質(zhì)量檢驗(yàn)部門的監(jiān)督檢驗(yàn)和科研機(jī)構(gòu)的研究檢驗(yàn)。

3.4 免疫分析法 以免疫分析方法為基礎(chǔ)發(fā)展而來的免疫受體方法、酶聯(lián)免疫方法和快速檢測(cè)試劑條方法，以快速、靈敏、穩(wěn)定、高效，在牛乳抗生素殘留檢測(cè)中得到了廣泛的應(yīng)用。

3.4.1 酶聯(lián)免疫法 酶聯(lián)免疫法（ELISA）對(duì)牛乳抗生素殘留檢驗(yàn)，是基于抗原抗體反應(yīng)的特異性和等比例性，使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。當(dāng)抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體即保留其免疫活性，又保留酶活性。在測(cè)定時(shí)，樣品和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面抗或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開，最后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與樣品中受檢物質(zhì)量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺定性或定量分析。目前酶聯(lián)免疫測(cè)定法（ELISA）在抗生素殘留檢測(cè)得到了廣泛的應(yīng)用，結(jié)果重現(xiàn)性高，整個(gè)檢測(cè)過程簡(jiǎn)單方便；但需購(gòu)置專用儀器和試劑，成本較高，時(shí)間較長(zhǎng)。

3.4.2 快速檢測(cè)試劑條 抗生素檢測(cè)試劑條方法，是目前企業(yè)檢測(cè)牛奶中抗生素殘留使用比較多一種，其原理為試劑條上的金標(biāo)為微生物受體-金標(biāo)復(fù)合物，受體與配體之間以特異性的高親和力結(jié)合，而受體與非配體之間不結(jié)合的原理，將待檢測(cè)藥物殘留作為配體，篩選該配體高特異性的受體，通過樣品中待測(cè)物質(zhì)與配體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合受體表面結(jié)合點(diǎn)，以檢測(cè)樣品中的藥物殘留，例如美國(guó)charm公司生產(chǎn)的charm ROS抗生素檢測(cè)條，可以在8分鐘內(nèi)定性檢驗(yàn)出牛奶中抗生素殘留?？焖贆z測(cè)試劑條，具有高特異性、高靈敏雅、穩(wěn)定性強(qiáng)、抗干擾能力強(qiáng)，檢測(cè)時(shí)間短，出結(jié)果速度快等特點(diǎn)，適用于樣品的初篩。在操作上，無需任何專業(yè)的技術(shù)，操作簡(jiǎn)單，沒有檢測(cè)環(huán)境的需求，不管是奶農(nóng)還是奶站工作人員，還是專業(yè)的檢測(cè)人員都可以方便使用，抗生素檢測(cè)限均達(dá)到國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中牛奶抗生素檢測(cè)限要求，但檢測(cè)只能是對(duì)牛乳中抗生素定性檢驗(yàn)，不能定量檢驗(yàn)。

4 牛乳中抗生素檢測(cè)途經(jīng)

綜上所述，奶源的安全則是乳品企業(yè)的命脈，要使生鮮牛乳在沒有進(jìn)入牛奶加工廠前就能檢測(cè)出抗生素殘留，需要快速，操作簡(jiǎn)單，而且價(jià)格低廉的方法。傳統(tǒng)的抗生素檢測(cè)方法不少，有的操作煩瑣，有的實(shí)驗(yàn)條件要求高，有的檢驗(yàn)時(shí)間太長(zhǎng)。近幾年，國(guó)內(nèi)外免疫檢測(cè)技術(shù)發(fā)展迅速，應(yīng)用廣泛，酶聯(lián)免疫試劑盒，免疫層析檢測(cè)技術(shù)，目已成為中國(guó)快速牛乳抗生素殘留診斷試劑產(chǎn)業(yè)服務(wù)商的第一品牌。今后，為了保證乳品企業(yè)與守法奶戶的利益，保證奶源的質(zhì)量安全，保證消費(fèi)者的利益，還需要有關(guān)科研人員認(rèn)真進(jìn)行抗生素檢驗(yàn)方法篩選工作，努力研發(fā)一些簡(jiǎn)便、快速、經(jīng)濟(jì)、實(shí)用的牛乳抗生素殘留分析技術(shù)和方法，以提高我國(guó)乳制品抗生素的檢測(cè)水平。

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