涼血活血方有效組分對(duì)膿毒癥大鼠腸道血液循環(huán)及氧供的影響

王宇歆，周 靜，杜 凡，李東華，劉洪斌

根據(jù)中藥配伍的相須相使原則，我們將大血藤、牡丹皮、赤芍及延胡索組方為涼血活血方，在臨床上用于腹腔感染性疾病的瘀滯期治療已使用30余年，療效確切。本實(shí)驗(yàn)對(duì)該方有效組分對(duì)腸道局部血流量、微循環(huán)及組織氧供的影響進(jìn)行了研究。

1 材料和方法

1.1 動(dòng)物 選用體質(zhì)量250～300g的健康Wistar大鼠24只，雌雄各半，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，SCXK（津）2005-0001。適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境1周，房間溫度保持在20～25℃。

1.2 中藥方劑及制備 涼血活血方有效組分應(yīng)用大孔樹脂分離提取方法制備，由大血藤有效組分［1］、牡丹皮有效組分［2］、赤芍有效組分［3］、延胡索有效組分［4］組成，藥物劑量配比為2∶1∶1∶1。制成濃度生藥4g/mL的組分，分裝、滅菌處理后置于4℃冰箱。有效組分含量見表1。

表1 涼血活血方有效組分組中各有效組分含量（mg/mL）

1.3 儀器 16通道生理信號(hào)記錄儀（MP150，美國(guó)BIOPAC公司），激光多普勒血流模塊（LDF100C，美國(guó)BIOPAC公司），激光多普勒微循環(huán)血流探頭（TSD146，美國(guó)BIOPAC公司）；脈沖多普勒血管血流模塊及內(nèi)徑0.8mm探頭（100-202-20型，美國(guó)TRITON公司）；組織氧測(cè)定儀及針式探頭（OXYMICRO，美國(guó)WPI公司）。

1.4 分組與給藥方法 Wistar大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表方法分成假手術(shù)組、模型組、涼血活血有效組分組（組分組）共3組，每組8只，各組均于造模前30min灌胃給藥1次，造模后連續(xù)觀察3d，灌胃給藥2次/d，假手術(shù)組和模型組給予生理鹽水6mL/kg，組分組給予涼血活血組分劑6mL/kg。

1.5 造模方法 本實(shí)驗(yàn)采用大鼠盲腸結(jié)扎打孔模型（cecal ligation and punch，CLP）［5］。大鼠以10％水合氯醛（3mL/kg體質(zhì)量）腹腔注射麻醉，腹壁安爾碘消毒，下腹部正中切口，長(zhǎng)約2cm。輕緩提出盲腸，在距盲腸游離末端2cm處用1號(hào)絲線結(jié)扎。在盲腸末端用國(guó)產(chǎn)18號(hào)針頭穿孔，擠壓結(jié)扎盲腸，擠出0.5g左右腸內(nèi)容物。還納腸管后分2層關(guān)腹。假手術(shù)對(duì)照組僅游離盲腸，不做CLP，其他過(guò)程相同。麻醉清醒后繼續(xù)正常喂養(yǎng)，觀察時(shí)間為3d。

1.6 檢測(cè)方法與指標(biāo) 于術(shù)后3d，以10％水合氯醛3mL/kg腹腔麻醉。無(wú)菌條件下，經(jīng)腹部正中切口進(jìn)入腹腔，先于右腎內(nèi)側(cè)處分離大鼠腸系膜上動(dòng)脈，應(yīng)用脈沖多普勒血管血流模塊測(cè)定大鼠腸系膜上動(dòng)脈血流流速，單位cm/s。探頭與動(dòng)脈走行方向垂直。在距離回盲部5cm處尋找回腸對(duì)系膜緣無(wú)血管區(qū)，應(yīng)用激光多普勒微循環(huán)血流模塊測(cè)定小腸漿膜微循環(huán)血液灌流量。將微循環(huán)血流探頭輕輕置于所測(cè)部位，注意不要使待測(cè)部位受壓，以微循環(huán)血液灌注量（BPU）為單位進(jìn)行測(cè)定（BPU=單位體積內(nèi)移動(dòng)的紅細(xì)胞數(shù)×紅細(xì)胞移動(dòng)的平均速度）［6］。最后將組織氧針式探頭放置于小腸黏膜下層，并通過(guò)組織氧測(cè)定儀與電腦相連，待讀數(shù)穩(wěn)定后測(cè)定小腸黏膜下層組織氧飽和度。手術(shù)操作宜輕柔以減少對(duì)腸管的刺激，操作完畢回納腸管，以無(wú)菌生理鹽水紗布敷蓋，保持局部濕度和溫度。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)腸系膜上動(dòng)脈血流的影響 假手術(shù)組大鼠腸系膜上動(dòng)脈血流流速為（1.21±0.19）cm/s。與假手術(shù)組比較，模型組血流流速下降，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而組分組血流流速上升顯著（P＜0.01）。見表2。

表2 CLP術(shù)后3d大鼠腸系膜血流流速的比較（cm/s±s）

表2 CLP術(shù)后3d大鼠腸系膜血流流速的比較（cm/s±s）

注：與假手術(shù)組比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.01

分組假手術(shù)組模型組組分組n8 8 8血管血流1.21±0.19 0.98±0.18 1.87±0.29a、b

2.2 對(duì)小腸組織微循環(huán)的影響 假手術(shù)組大鼠小腸組織微循環(huán)血流量為（166.91±20.23）BPU。與假手術(shù)對(duì)照組比較，組分組微循環(huán)血流量有明顯增加（P＜0.01）。與模型組相比，組分組血流也有明顯上升（P＜0.01）。見表3。

表3 CLP術(shù)后3d大鼠腸組織微循環(huán)血流量的比較（BPU±s）

表3 CLP術(shù)后3d大鼠腸組織微循環(huán)血流量的比較（BPU±s）

注：與假手術(shù)組比較，aP＜0.01；與模型組比較，bP＜0.01

分組假手術(shù)對(duì)照組模型對(duì)照組組分組n8 8 8微循環(huán)血流量166.91±20.23 190.28±30.93 316.13±41.31a、b

2.3 對(duì)小腸組織氧飽和度的影響 假手術(shù)組大鼠小腸組織氧飽和度為（23.53±1.35）飽和度％。與假手術(shù)組比較，模型組組織氧飽和度下降（P＜0.05），組分組與假手術(shù)組比較無(wú)差異（P＞0.05）。與模型組比較，組分組組織氧飽和度有明顯增加（P＜0.01）。見表4。

3 討論

“有效組分”是近年來(lái)化學(xué)領(lǐng)域研究中醫(yī)藥派生出來(lái)的一個(gè)新的概念，主要是指在中藥復(fù)方或單味藥材中具有相似化學(xué)性質(zhì)的一大類化合物?，F(xiàn)有的研究也表明，開展中藥復(fù)方有效組分的研究，有望闡明復(fù)方作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，科學(xué)地揭示復(fù)方作用的機(jī)制，研制易被接受的新型有效組分中藥［7］。本研究提取了涼血活血方中針對(duì)血熱癥的涼血組分綠原酸、丹皮酚，及針對(duì)血瘀證的活血組分總苷、多糖。有研究證實(shí)，綠原酸有抗菌解毒的生理作用［8］，丹皮酚可抑制血小板聚集防止血栓形成［9］，總苷類特別是芍藥苷具有抗缺血及抑制血小板聚集的作用［10］，而多糖類能夠改善腹腔臟器血液循環(huán)，并有抗炎、調(diào)節(jié)免疫及代謝功能等多方面作用［11］。目前這些組分對(duì)于膿毒癥腸道血流的影響未見報(bào)道，因此本實(shí)驗(yàn)就涼血活血組分劑對(duì)CLP模型大鼠腸道局部血流等的變化進(jìn)行了研究。

表4 CLP術(shù)后3d大鼠小腸組織氧飽和度的影響（飽和度％±s）

表4 CLP術(shù)后3d大鼠小腸組織氧飽和度的影響（飽和度％±s）

注：與假手術(shù)組比較，aP＜0.05；與模型組比較，bP＜0.01

分組假手術(shù)組模型組組分組n8 8 8小腸組織氧飽和度23.53±1.35 18.9±1.31a 24.49±1.29b

腸道是腹腔感染所致?lián)p傷最早受累的器官之一，機(jī)體在正常情況下，循環(huán)血流的30％流經(jīng)胃腸道，在應(yīng)激狀態(tài)下胃腸道最早發(fā)生缺血缺氧，又最遲得到恢復(fù)［12］。由于腸道血液動(dòng)力學(xué)自動(dòng)調(diào)節(jié)機(jī)制的存在，組織血流降低不一定減少組織氧供，而血流增加時(shí)也不一定增加組織氧供［13-14］。因此，本實(shí)驗(yàn)研究選擇腸系膜血管血流量、回腸腸組織微循環(huán)血流量及腸組織氧飽和度三個(gè)指標(biāo)，分別從腸道局部血流量、微循環(huán)血流量及器官組織氧供三個(gè)方面，對(duì)涼血活血組分劑的活血作用進(jìn)行檢測(cè)。而腸組織氧含量的測(cè)定，對(duì)明確腸組織保護(hù)作用具有特別重要的意義。結(jié)果顯示，與假手術(shù)對(duì)照組比較，術(shù)后3天模型組的腸系膜血管血流量下降，這與CLP術(shù)后大鼠整體血流動(dòng)力學(xué)結(jié)果一致［15-16］。但微循環(huán)血流量略高于假手術(shù)對(duì)照組，我們考慮這與大鼠的應(yīng)激狀態(tài)有關(guān)，進(jìn)一步觀察發(fā)現(xiàn)腸黏膜組織氧飽和度仍然下降，說(shuō)明其微循環(huán)血流量增加是無(wú)效的。而涼血活血方組分組從腸系膜血管血流量、腸組織微循環(huán)血流量到黏膜組織氧飽和度均升高，因此，涼血活血有效組分方在整體、器官和組織細(xì)胞水平，均促進(jìn)了腸道血流的改善。

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