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    微衛(wèi)星標(biāo)記多態(tài)性與番鴨體尺性狀的關(guān)系

    2012-12-24 12:51:50俞永裕陳曉青姜柏芳毛濟(jì)敖沈軍達(dá)陶爭榮盧立志
    浙江農(nóng)業(yè)科學(xué) 2012年12期
    關(guān)鍵詞:余姚多態(tài)微衛(wèi)星

    俞永裕,曾 濤,陳曉青,姜柏芳,毛濟(jì)敖,田 勇,沈軍達(dá),陶爭榮,盧立志

    (1.浙江省余姚市畜牧獸醫(yī)局,浙江 余姚 315499;2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 畜牧獸醫(yī)研究所,浙江 杭州 310021;3.南京農(nóng)業(yè)大學(xué),江蘇 南京 210095;4.余姚市舜豐畜禽養(yǎng)殖有限公司,浙江 余姚 315499)

    余姚番鴨 (又名瘤頭鴨、呆頭鴨)是一種瘦肉型肉用鴨。余姚番鴨按羽色分為白羽、花羽和灰色條紋羽3個類群,灰色條紋羽現(xiàn)較少。余姚番鴨具有生長速度快,屠宰率高等特點(diǎn),許多地方引種飼養(yǎng)。

    微衛(wèi)星又稱為簡單重復(fù)序列 (SSR),一般以1~6個堿基為核心序列,首尾相連的串聯(lián)重復(fù)序列。微衛(wèi)星標(biāo)記與其他分子標(biāo)記相比,具有在基因組中數(shù)量分布廣而均勻、多態(tài)性豐富、等顯性遺傳以及分析方法簡便、快捷等優(yōu)點(diǎn)。因此,微衛(wèi)星標(biāo)記目前已被廣泛應(yīng)用于群體遺傳結(jié)構(gòu)、遺傳多樣檢測的研究中[1-10]。在過去的幾年里,已經(jīng)從鴨類基因組中分離到了很多多態(tài)性豐富的微衛(wèi)星遺傳標(biāo)記[11-12],為鴨類的微衛(wèi)星遺傳標(biāo)記和生產(chǎn)性狀關(guān)系的研究打下了良好的基礎(chǔ)。本研究分析了16個微衛(wèi)星標(biāo)記與余姚番鴨體尺性狀間的相關(guān)性,為余姚番鴨的選育提供依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗材料

    本研究采用30只余姚番鴨,公母各半。編號采集血樣樣本,測量體重和體尺,測量指標(biāo)包括體重、體斜長、龍骨長、脛長、脛圍、胸寬、胸深和骨盆寬。

    1.2 血液基因組DNA的提取

    采用常規(guī)酚-氯仿抽提法,具體操作步驟參照《分子克隆》(第3版),稍加修改。

    1.3 微衛(wèi)星位點(diǎn)及PCR條件

    根據(jù)GenBank和文獻(xiàn)上提供的50對微衛(wèi)星引物進(jìn)行篩選,選擇了16對微衛(wèi)星引物 (表1)。

    反應(yīng)體系 (25.0 μL):50 ng·μL-1DNA 1 μL,上下游引物各為 0.4 μL,10 mmol·L-1dNTP混合物 1.5 μL,10 × 緩沖液 1.5 μL,rTaq 酶0.25 μL。

    反應(yīng)程序:95℃預(yù)變性5 min;94℃變性30 s,44~65℃ (具體溫度依引物而定,表1)復(fù)性30 s,72℃延伸40 s,35個循環(huán);最后72℃延伸10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物用12%的非變性聚丙烯酰胺進(jìn)行電泳,電泳結(jié)束后用硝酸銀染色,成像后分析結(jié)果。

    1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計及相關(guān)公式

    統(tǒng)計各等位基因組成,計算個微衛(wèi)星座位的等位基因頻率 (Pi)、遺傳雜合度 (He)、多態(tài)信息含量 (PIC)和有效等位基因數(shù) (Ne)。用SPSS軟件分析微衛(wèi)星基因座各基因型與體尺性狀間的相關(guān)性。

    表1 16個微衛(wèi)星引物序列和退火溫度

    式中:pi為第 i個等位基因的頻率;i為純合復(fù)等位基因;ij1,ij2,…,ijn為與 i共顯的第1到第n個等位基因。

    2 結(jié)果和分析

    2.1 遺傳多態(tài)性的指標(biāo)

    用16對微衛(wèi)星引物對余姚番鴨進(jìn)行檢測,結(jié)果共檢測到72個等位基因,各座位等位基因數(shù)位2~7個,由表2可知,16個微衛(wèi)星標(biāo)記所檢測到群體平均雜合度為0.681。多態(tài)信息含量最高的微衛(wèi)星座位是 AY493314(0.832),最低的是AY587043(0.374),平均多態(tài)信息含量為0.644。

    2.2 遺傳多態(tài)性與體尺性狀的相關(guān)性

    用SPSS(16.0)中GLM過程對各個不同微衛(wèi)星位點(diǎn)的不同基因型間性狀的差異進(jìn)行最小二乘分析,結(jié)果見表3。微衛(wèi)星AY493314與脛圍呈極顯著相關(guān),AJ272582與脛圍和龍骨長呈顯著相關(guān);微衛(wèi)星AY493282,APL515883與脛長呈顯著相關(guān);AY493255,AY493342與半潛水長呈顯著相關(guān);AY493322與胸寬呈顯著相關(guān)。其余位點(diǎn)微衛(wèi)星與體重、體尺性狀之間的相關(guān)性均不顯著。

    表2 16個微衛(wèi)星基因座的多態(tài)參數(shù)

    表3 微衛(wèi)星位點(diǎn)的組分方差分析統(tǒng)計系數(shù)值 (F值)

    3 討論

    3.1 微衛(wèi)星標(biāo)記的多態(tài)性

    微衛(wèi)星應(yīng)用研究中,PIC是衡量片段多態(tài)性的指標(biāo)。按Bostein等提出的衡量基因變異程度高低的多態(tài)信息含量指標(biāo),當(dāng)PIC>0.5的位點(diǎn)為高度多態(tài)信息含量指標(biāo),0.25<PIC<0.5時為中度多態(tài)位點(diǎn),當(dāng)PIC<0.25時,為低度多態(tài)位點(diǎn)。本研究中16個微衛(wèi)星位點(diǎn)中,除 AY493285、AY587043和APL515883為中度多態(tài)外,其余13個微衛(wèi)星位點(diǎn)均呈現(xiàn)高度多態(tài)。

    群體雜合度反應(yīng)了被檢測位點(diǎn)上群體的雜合子的頻率,是群體遺傳變異的一個適宜參數(shù)。群體平均雜合度的高低反映了群體的遺傳一致性程度。群體的雜合度越高,說明群體內(nèi)一致性差,群體變異大。本實(shí)驗結(jié)果表明,余姚番鴨的平均遺傳雜合度He為0.681,說明有著較高的遺傳多樣性。

    3.2 微衛(wèi)星位點(diǎn)與體尺性狀的相關(guān)性

    本實(shí)驗結(jié)果顯示,AY493314,AJ272582,AY493282和APL515883等標(biāo)記與特定性狀可能存在相關(guān)關(guān)系。這種相關(guān)性的發(fā)現(xiàn)對于選種、選配是有利的。實(shí)踐中選擇具有與優(yōu)良性狀相關(guān)標(biāo)記的個體留種,可以提高選種的準(zhǔn)確性,這也是標(biāo)記輔助選擇的主要目的之一。對這些微衛(wèi)星標(biāo)記間的連鎖分析研究,以及更加精確地進(jìn)行QTL定位,還需要進(jìn)一步擴(kuò)大試驗鴨種范圍。如果一個群體的性狀差異顯著,或2個群體的差異很大,就可以通過標(biāo)記與性狀的相關(guān)分析,找出性狀與一個或多個標(biāo)記的遺傳相關(guān),一旦發(fā)現(xiàn)顯著相關(guān),即可認(rèn)為存在一個數(shù)量性狀位點(diǎn),從而實(shí)現(xiàn)從表型到基因型選擇育種的轉(zhuǎn)變。

    本實(shí)驗研究可為進(jìn)一步尋找有關(guān)番鴨生長性狀的QTLs及定位提供一定的理論數(shù)據(jù)。

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