2腎1夾型高血壓大鼠造模方法與技巧

孫亦群

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，廣州510405）

在醫(yī)藥學(xué)科研實(shí)踐中，常會用到高血壓動物模型。若直接購買，其價格十分昂貴（如一只高血壓大鼠模型約需200元）。在經(jīng)費(fèi)有限的情況下，往往需要自己動手。學(xué)生們一般是在《藥理實(shí)驗方法學(xué)》中可找到造模方法，但書中的方法不夠具體，許多細(xì)節(jié)需要在實(shí)踐中摸索出來，致使成功率較低。本文就是在無數(shù)次的實(shí)驗、失敗中，總結(jié)出一些經(jīng)驗，與大家（尤其是研究生們）分享，以提高造模成功率，節(jié)省科研經(jīng)費(fèi)，提高科研效率。

腎性高血壓模型即直接對腎或腎血管實(shí)施手術(shù)，造成實(shí)驗動物血壓升高。其發(fā)病機(jī)制與腎缺血導(dǎo)致的腎素-血管緊張素系統(tǒng)激活等有關(guān)?？煞譃閮深悾耗I血管性高血壓模型和腎外包扎性高血壓模型。腎血管性高血壓模型又可分為：2腎1夾型、1腎1夾型、2腎2夾型。常用的高血壓動物模型有狗、兔或大鼠等。由于實(shí)驗大鼠的價格低，易得，所以較常用。本文僅介紹二腎一夾型高血壓大鼠模型的造模方法與技巧。

1 動物、藥品、設(shè)備及手術(shù)器具

1.1 動物 清潔級 SD大鼠，體重 100～120g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗動物中心提供。

1.2 藥品 安定、氯胺酮、戊巴比妥鈉、水合氯醛、生理鹽水、碘酒、酒精。

1.3 設(shè)備及手術(shù)器具 BP-6A型全自動無創(chuàng)血壓測量系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；固定板或墊、綿繩、注射器，手術(shù)直剪及彎剪，手術(shù)刀，止血鉗，棉球，紗布，眼科鑷子，玻璃分針，U形銀夾，縫合針、線。

2 操作步驟[1]

2.1 麻醉 取大鼠，以安定5mg/kg+氯胺酮50mg/kg（或1%戊巴比妥鈉10ml/kg；10%水合氯醛 0.3ml/kg），ip麻醉。

2.2 固定 將已麻醉的大鼠仰臥位置于固定板或墊上，以綿繩分別拴住大鼠4只爪，另一綿繩勾住大鼠上齒，綿繩另一頭分別栓在固定板四角及頂部的釘子上。見圖1。

2.3 切口 剪去腹部手術(shù)野的毛，以碘酒及酒精消毒，于劍突下1.5cm沿腹中線切開皮膚及肌層，以止血鉗夾住切口兩邊的肌層，拉開切口。

2.4 找出腎臟 右手食指伸入腹腔摸著腎臟，左手指從腹部外側(cè)配合將腎臟輕輕擠出，用浸有生理鹽水的棉球或紗布包住，用左手食指與拇指將其固定。

2.5 分離腎動脈 以眼科鑷子小心分離腎蒂部筋膜，以玻璃分針（見圖 2）沿腎靜脈下方分離腎動脈，在近主動脈端用U型銀夾（內(nèi)徑為0.2～0.25mm）套上，用鑷子夾緊銀夾口部。

2.6 縫合 以手術(shù)專用的縫合針、線，縫合手術(shù)切口。

2.7 血壓測量 用 BP-6A型全自動無創(chuàng)血壓測量系統(tǒng)測量血壓。術(shù)后大鼠血壓逐漸升高，4～5周后70%以上大鼠形成持續(xù)性高血壓，收縮壓大于160mmHg（或較之于基礎(chǔ)血壓升高大于30 mmHg）者，視為造模成功。

圖1 固定大鼠

圖2 玻璃分針

3 注意事項

3.1 關(guān)于麻醉劑的劑量 若手術(shù)時間較長，可追加 1/4劑量。如選擇10%水合氯醛作為麻醉劑，操作時要注意，帶乳膠手套，并護(hù)住手臂，面部遠(yuǎn)離麻醉劑瓶口。因水合氯醛具揮發(fā)性及腐蝕性，若其揮發(fā)氣體附著于皮膚上，會引起皮膚瘙癢，進(jìn)而脫皮。

3.2 關(guān)于玻璃分針 大鼠腎動脈血管很細(xì)小，并與腎靜脈黏連一處，需要將其分開。由于眼科鑷子頭部帶齒，操作需十分小心，否則很易創(chuàng)傷血管及周圍器官。而玻璃分針較為光滑，頭部拉成細(xì)小的彎勾，既便于分離大鼠腎動脈血管，又不會造成創(chuàng)傷。玻璃分針可以自制，取長 10～12cm，直徑 0.3～0.5cm的玻璃棒，在酒精噴燈上加熱一端，戴玻璃軟化后，以鑷子拉成細(xì)線，再彎出小彎勾，既得。

3.3 無菌操作 所有手術(shù)器具均需消毒滅菌。將手術(shù)器具清洗干凈，用消毒巾包裹，于壓力滅菌器中，121℃，0.15MPa，滅菌30min或于電烤箱中180℃，滅菌120min。所帶手套以酒精消毒，手術(shù)過程需無菌操作，動作要輕，要十分細(xì)心。術(shù)后，刀口處每天要消毒，防止污染而引起發(fā)炎。必要時可給以一定劑量的抗生素。

3.4 關(guān)于基礎(chǔ)血壓 由于測量大鼠血壓的設(shè)備不同，測定結(jié)果也存在較大差異，所以使用血壓升高大于 30 mmHg為造模成功的方法，可消除誤差。這就需要在造模前，先測定每只大鼠的基礎(chǔ)血壓。測量大鼠血壓時，環(huán)境很重要。需要安靜、避光，以使大鼠能安靜，不煩躁亂動，才可測出真實(shí)、可靠的血壓值。

[1]徐淑云.藥理實(shí)驗方法學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:950.