六君丹參顆粒對自發(fā)性高血壓大鼠心血管重塑干預作用的實驗研究*

黃漢超 黃 琳 吳永剛 黃雪君 杜鐵良

（廣東省第二中醫(yī)院，廣東 廣州 510250）

本研究擬采用自擬六君丹參顆粒對合并有動脈粥樣硬化的自發(fā)性高血壓大鼠（spontaneously hypertensive rats，SHR）進行干預，觀察其對心血管重塑的干預作用并推測可能的作用機制，試圖明晰健脾活血化痰法在治療高血壓合并動脈粥樣硬化的價值和地位。

1 材料與方法

1.1 動物 SHR8周齡SPF級雄性，購自北京維通利華公司，編號：SCXK（京）2002-0003，共 50 只，平均體質量 203.62g。所有大鼠在廣東省第二中醫(yī)院中醫(yī)研究所SPF級實驗室內進行飼養(yǎng)，實驗室許可證編號：SYXK（粵）2005-0059，飼料由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供。

1.2 藥物 六君丹參顆粒配方：陳皮、法半夏、黨參、茯苓、白術、甘草、丹參、檀香、水蛭、砂仁，劑量分別相當于生藥6、10、10、10、10、3、10、3、3、3g。

1.3 儀器與試劑 無創(chuàng)血壓檢測儀，澳大利亞powerlab8/30；飛鴿牌AnKeTDL-5-A款離心機；722光柵分光光度計；酶標檢測儀，美國伯樂公司Bio-RAD680；Motic6.0數碼醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)。谷丙轉氨酶試劑，批號20 100408；谷草轉氨酶試劑，批號20 100408；尿素氮試劑，批號20 100408；肌酐試劑，批號20 100408；由南京建成生物制品有限公司提供。基質金屬蛋白酶-2、9（MMP-2、9）試劑盒由上海滬尚生物科技有限公司提供，批號：20100925。

1.4 分組與給藥 50只SHR分為實驗組和對照組，每組各25只，實驗組大鼠予六君丹參顆粒灌胃，每日2次，每次5mL，對照組予等劑量蒸餾水灌胃，每日2次。兩組共計給藥12周。

1.5 標本采集與檢測 （1）血壓監(jiān)測：各組取8只大鼠，在麻醉狀態(tài)下，用37℃溫水對其尾巴進行反復擦拭，使尾巴血管充分擴張，其后接血壓探頭于尾巴上，根據相應的操作指示進行檢測，每次測3個讀數，取平均值。（2）血液指標：大動脈采血約5mL后行離心，取上層血清進行相關的指標檢測。（3）動脈病理學切片檢查：處死8只大鼠，取胸主動脈，生理鹽水沖洗干凈后予35%甲醛溶液固定，每條動脈取5個橫切面，選取標準橫切面的切片進行光鏡觀察，檢測動脈管壁病理變化及中膜厚度與血管半徑之比。（4）心肌電鏡檢查：取出心臟，用生理鹽水沖洗干凈，在大鼠心尖部用無菌手術刀片橫切厚約1mm左右的薄片，用2.5%戊二醛固定液固定后進行電鏡檢查。

2 結 果

2.1 兩組血壓及體質量比較 見表1。隨著大鼠周齡增加，兩組收縮壓有上升趨勢，并均于20周時達到最高值，各組間比較分析，第12周起實驗組收縮壓較對照組收縮壓有下降趨勢，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；至第20周，實驗組收縮壓及舒張壓較對照組收縮壓明顯下降 （P＜0.05）。兩組大鼠體質量均有增加，但組間及組內比較無顯著差異。兩組大鼠在飼養(yǎng)、給藥期間均無一死亡。

表1 兩組血壓比較（mmHg，）

表1 兩組血壓比較（mmHg，）

與對照組比較，*P＜0.05。

組 別 n 收縮壓 舒張壓12周 16周 20周 12周 16周 20周實驗組8 186.23±8.24 188.38±8.26186.72±9.82* 110.62±9.54 112.74±10.91 112.61±8.87*對照組8 187.16±9.89 194.16±7.66 208.51±4.89 109.53±11.14 110.87±12.82 109.38±11.03

2.2 不同時間段大鼠管腔面積（LA）與管壁面積（WA）及主動脈中膜厚度與管壁半徑變化 見表2。和對照組相比，治療組的LA/WA有提高的趨勢，第20周時，差異具有統(tǒng)計學意義 （P＜0.05）。中膜厚度在治療第16周時即明顯縮小（P＜0.05），并且隨著治療時間的延長，效果越顯著。

2.3 不同時間段大鼠血清MMP-2、MMP-9水平變化 見表3。兩組各時間段MMP-2、MMP-9水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。

表2 兩組LA與WA及主動脈中膜厚度與管壁半徑比較（n=8，）

表2 兩組LA與WA及主動脈中膜厚度與管壁半徑比較（n=8，）

與對照組同時段比較，△P＜0.05。

組 別 LA（mm2） WA（mm2） 中膜厚度（μm） 管腔半徑（mm）實驗組12 周 2.31±0.74 0.89±0.53 118.36±10.22 0.62±0.01 16 周 2.62±0.62 0.82±0.25 116.62±11.52△ 0.86±0.04 20 周 3.02±0.54△ 0.74±0.16△ 115.62±9.53△ 1.02±0.02對照組12 周 2.23±0.89 0.91±0.45 116.42±11.12 0.61±0.06 16 周 2.56±0.92 1.01±0.63 120.64±9.21 0.83±0.04 20 周 2.71±0.62 1.17±0.38 122.61±8.53 0.92±0.02

表3 兩組各時段MMP-2、MMP-9水平檢測（ng/mL，）

表3 兩組各時段MMP-2、MMP-9水平檢測（ng/mL，）

組 別 n MMP-2 MMP-9 12周 16周 20周 12周 16周 20周實驗組 8 34.52±9.81 44.39±5.99 57.62±10.13 28.12±7.88 34.91±10.52 41.63±8.47對照組 8 36.92±10.68 48.21±9.21 60.52±9.38 25.11±6.94 35.62±8.52 44.68±9.61

2.4 大鼠主動脈病理切片及心肌電鏡圖比較 對照組病理切片提示中膜彈性纖維排列紊亂中膜膠原纖維增生；實驗組中膜彈性纖維較前排列有序，膠原纖維增生較前大鼠明顯減輕，見圖1。實驗組在治療前，心肌纖維排列疏松、分離，線粒體集聚，心肌線粒體空泡發(fā)，見圖2。實驗組在用藥后，心肌纖維排列較治療前變得整齊，線粒體體大小一致，少許空泡發(fā)，見圖3。

圖1 大鼠主動脈病理切片圖（HE染色，×100倍）

圖2 實驗組用藥前心肌電鏡圖

圖3 實驗組用藥后心肌電鏡圖

2.5 安全性指標檢測 見表4。第12周查血進行安全性指標檢測，結果兩組比較差異無統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表4 兩組安全性指標檢測比較（）

表4 兩組安全性指標檢測比較（）

尿素氮（μmol/L）治療組 8 19.32±10.16 30.21±4.68 37.81±11.85 18.82±4.52對照組 8 12.61±8.72 35.61±6.42 43.62±9.83 20.55±5.85組 別 n 谷丙轉氨酶（U/L）谷草轉氨酶（U/L）肌酐（μmol/L）

3 討 論

高血壓是臨床的常見病之一，該病常伴發(fā)的心、腦、腎等靶器官損害。近年來研究表明，靶器官的損害與心臟和血管重塑有密切關系，血管重塑將使血管阻力進一步增加，管腔變窄，并繼而引起或加重靶器官的損害。因此對血管重塑的干預性研究已成為國際上高血壓研究的熱點之一。SHR為常用的動物模型之一，與人類原發(fā)性高血壓形成機制有相似之處，對SHR的形態(tài)計量學檢測證明：阻力血管的結構性改變甚至在高血壓形成之前已經出現，因此血管重塑可能貫穿高血壓發(fā)病的始終，是高血壓發(fā)病的主要機制之一，能有效逆轉血管重塑將有助于減緩高血壓的進程［1］。中醫(yī)藥對高血壓心血管重塑的干預性研究尚不多，在已有的研究表明，在動脈硬化的形成、發(fā)生、發(fā)展過程之中，痰濁、血瘀是重要的病理產物和致病因素之一，脾氣虧虛又是其根本的病機之一［2-3］。

血管重構是一個動態(tài)過程，包括細胞的增殖、遷移、凋亡以及基質成分的合成、降解、重新排列等過程。血管重構又是血管對刺激所產生的復雜的動態(tài)反應過程，包括信號的感受、轉導和調節(jié)因子的合成、釋放，最后產生結構的變化，其機理比較復雜［4］，目前尚未有完全了解清楚。從實驗結果來看，自發(fā)高血壓模型大鼠的心血管重構事件均表為膠原纖維的增生，有研究表明［5-6］，高血壓時血管結構的改變主要機制為動脈血管中膜平滑肌細胞增殖/凋亡失衡，膠原降解制衡，從而出現肥大、增生以及結締組織增加等，其結果是血管壁增厚，壁腔比例明顯加大，血流阻力和血管反應性增加，血管順應性下降，使重要組織臟器如心、腎等缺血、缺氧，并繼而誘發(fā)器官的重塑。

六君丹參顆粒由陳夏六君子湯配伍丹參飲、水蛭構成，臨床上具有健脾益氣、活血化瘀的功效。既往已有該方面的的中醫(yī)藥科研多為運用平肝潛陽等方劑進行研究，健脾活血化痰作為主流治法的研究尚不多。本動物實驗研究表明，六君丹參顆粒具有顯著的具有逆轉血管重構的作用，同時對重要臟器如心臟的重構也有良好的干預作用，電鏡（圖2）顯示心肌纖維排列有改善，線粒體形態(tài)回復正常，提示該藥對受損的心肌有良好的修復作用，并且安全有效。MMP-2、9是MMPs家族中的明膠酶系，表達于體內各種細胞和組織之中，包括血管平滑肌和內皮細胞，參與生理重塑、組織修復和血管新生，在高血壓病心血管的重塑之中扮演著重要角色［7-8］。研究表明抑制該兩種酶可降低膠原含量，抑制間質纖維化，有助于逆轉血管重塑［9-10］。但檢測提示與對照組相比差異無統(tǒng)計學意義，提示該藥對血管重塑的逆轉作用并非通過抑制MMP-2、9而起作用，因此其機制尚需進一步探討。

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