蒙醫(yī)溫針對炎癥大鼠血清白介素和腫瘤壞死因子α含量的影響*

吳七柱 阿古拉 朝魯門 烏云格日樂 李玉棠 陳英松

（內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110）

細(xì)胞因子不僅可以激活免疫系統(tǒng)，而且對神經(jīng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)也有重要的調(diào)節(jié)作用［1］。蒙醫(yī)溫針對免疫性疾病有較好的調(diào)節(jié)作用。尤其是對白細(xì)胞介素等細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用顯著［2］。本實(shí)驗(yàn)通過觀察蒙醫(yī)溫針對佐劑性關(guān)節(jié)炎大鼠白細(xì)胞介素-2（IL-2）、白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子α（TNF-α）的影響，探討蒙醫(yī)溫針療法對免疫性疾病的作用機(jī)制，從而對臨床應(yīng)用此療法提供初步科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物與試劑 （1）健康雄性Wistar大鼠，清潔級，體質(zhì)量180～200g，由內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供。在適應(yīng)性喂養(yǎng)前進(jìn)行痛閾篩選，標(biāo)準(zhǔn)為痛閾測定在10s左右能引起縮腿反應(yīng)或甩尾者用于實(shí)驗(yàn)，凡痛閾值＞15s或＜7s者，表示動物反應(yīng)遲鈍或過敏，剔去不用。（2）弗氏完全佐劑（CFA）為 Sigma 產(chǎn)品；IL-2、IL-4、IL-6（ELISA 法）、TNF-α（放射免疫法）試劑盒及試驗(yàn)試劑，均購自上海綠鳥科技有限公司。MYL-Ⅰ型蒙醫(yī)療術(shù)溫針儀、銀針均由內(nèi)蒙古元陽中蒙醫(yī)科技開發(fā)有限責(zé)任公司提供。

1.2 儀器 MYL-Ⅰ型蒙醫(yī)療術(shù)溫針儀：由內(nèi)蒙古元陽中蒙醫(yī)科技有限責(zé)任公司提供；80-式離心沉淀機(jī)：上海手術(shù)器械廠；LC100高效液相色譜儀：上海荊和分析儀器有限公司。

1.3 動物及分組 將30只入選大鼠隨機(jī)分為3組，每組10只。正常組：不造模，不治療。模型組：大鼠右后足掌皮下注射CFA 0.1mL，造成佐劑性關(guān)節(jié)炎模型。正常組與模型組每日以與蒙醫(yī)溫針組相同的方式捆綁固定。溫針組：于造模當(dāng)天，取大鼠蒙醫(yī)臟腑總穴（位于第三腰上凹正中）［3，用特制銀針斜刺后，接蒙醫(yī)療術(shù)溫針儀，電流強(qiáng)度100mA，溫度40℃，持續(xù)15min。3d治療1次，連續(xù)7次。

1.4 標(biāo)本采集與檢測 末次治療24h后采集下腔靜脈血2mL，室溫血液自然凝固15～20min后，3000r/min離心10min，用移液器吸取上清，-20℃保存。采用酶聯(lián)免疫法吸附法（ELISA法）測定血清IL-2、IL-4、IL-6含量，采用放射免疫法測定TNF-α含量，按試劑盒說明書進(jìn)行操作。

2 結(jié) 果

2.1 蒙醫(yī)溫針對炎癥大鼠（AA大鼠）血清IL-2、IL-4、IL-6含量的影響 見表1。模型組IL-2、IL-6含量與正常組比較，有顯著差異（P＜0.05或0.01）；溫針組IL-2、IL-6含量與正常組相當(dāng)，與模型組有顯著差異（P＜0.01）。

表1 各組IL-2、IL-4、IL-6 含量比較（ng/mL，）

表1 各組IL-2、IL-4、IL-6 含量比較（ng/mL，）

與正常組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

組 別 n IL-2 IL-4 IL-6正常組 10 4.647±0.288 6.462±0.421 80.558±6.964模型組 10 2.907±0.602* 5.057±0.771 172.120±23.612**溫針組 10 4.973±0.226△△ 5.073±0.819 99.907±5.229△△

2.2 蒙醫(yī)溫針對AA大鼠血清TNF-α含量的影響 見表2。模型組TNF-α含量顯著升高，與正常組及溫針組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），溫針組TNF-α含量與模型組相比有顯著差異（P＜0.04）。

表2 各組TNF-α 含量比較（ng/mL，）

表2 各組TNF-α 含量比較（ng/mL，）

組 別 n TNF-α正常組 10 7.8124±0.9151模型組 10 24.1813±3.2753**溫針組 10 11.4167±1.5089△

3 討 論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）屬自身免疫性疾病，目前常用非甾體抗體炎藥及免疫抑制劑改善臨床癥狀，但由于副作用大，影響了治療效果［4-6］。而RA屬蒙醫(yī)“黃水病”范疇，其致病因素是“黃水”，據(jù)蒙醫(yī)文獻(xiàn)及臨床實(shí)踐證明，蒙醫(yī)溫針治療RA，療效顯著。在前期研究工作中，筆者觀察到蒙醫(yī)溫針能明顯抑制大鼠AA原發(fā)腫脹，提高其痛閾，同時調(diào)整T細(xì)胞亞群；并且在改善癥狀，緩解病情方面作用顯著［7-8］。

IL、TNF在RA中激活血管內(nèi)皮細(xì)胞，增強(qiáng)內(nèi)皮細(xì)胞黏附分子的表達(dá)，在關(guān)節(jié)炎時血液中的白細(xì)胞與黏附分子相互作用而被匯集到關(guān)節(jié)腔內(nèi)，從而加強(qiáng)炎癥的細(xì)胞反應(yīng)，同時激活結(jié)締組織細(xì)胞和多型核細(xì)胞產(chǎn)生小分子炎癥遞質(zhì)加重炎癥反應(yīng)，并減少破骨細(xì)胞糖蛋白的合成而導(dǎo)致骨和軟骨的破壞。TNF-α即腫瘤壞死因子超家族的一員，是RA發(fā)病中的重要因子之一，是體內(nèi)存在的一種具有廣泛生物活性的細(xì)胞因子［9］，主要由單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，具有多種生物活性，是細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)瀑布啟動的起點(diǎn)［10］，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞吸附白細(xì)胞，造成炎癥局部白細(xì)胞聚集，尤其是滑液中異常升高的TNF-α對RA的發(fā)病可能起主導(dǎo)作用。因此，抑制TNF-α的作用對控制RA的病情和改善預(yù)后非常重要［11］。IL-2是T淋巴細(xì)胞受抗原或有絲分裂原刺激后產(chǎn)生的一種細(xì)胞因子，廣泛的參與免疫應(yīng)答的各種調(diào)節(jié)，是體內(nèi)最強(qiáng)的T細(xì)胞生長因子，通過提高T細(xì)胞的數(shù)量和功能增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能，同時還促進(jìn)B細(xì)胞的生長和分化，促進(jìn)抗體的生成［12-15］。IL-4在RA中的作用，一是促進(jìn)巨噬細(xì)胞黏附到血管內(nèi)皮細(xì)胞上，然后逸出血管，沿趨化梯度移動到炎癥部位；二是通過促進(jìn)Th2細(xì)胞擴(kuò)增，抑制Th1細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，從而抑制RA患者體內(nèi)異常的免疫反應(yīng)。正常機(jī)體的IFN-γ能阻斷IL-4對B細(xì)胞的增殖作用，此外IFN-γ具有抑制B細(xì)胞的活化作用［16］。IL-6具有多種生物活性，RA患者血清、關(guān)節(jié)液或滑膜細(xì)胞培養(yǎng)液上清液中可檢測出非常高的IL-6活性，并且血清中IL-6活性與RA疾病的活動程度相關(guān)。IL-6在RA中的作用是增強(qiáng)IL-1和TNF的某些生物效應(yīng)；IL-6還可能調(diào)節(jié)成纖維細(xì)胞的增殖［17］，放大對關(guān)節(jié)的損害作用，并誘導(dǎo)其他細(xì)胞因子如IL-1、IL-2的產(chǎn)生并發(fā)揮致病作用；IL-6異常表達(dá)和失調(diào)是RA的典型特征，是病程進(jìn)展的重要病理因子［18］。

蒙醫(yī)理論認(rèn)為RA不但與黃水有密切關(guān)系，還與三根 （赫依、希拉、巴達(dá)干）功能失調(diào)密切相關(guān)，尤其以赫依功能失調(diào)為甚。關(guān)節(jié)炎發(fā)生雖說以黃水為主要病因，但只要赫依參與其病情更加復(fù)雜。本實(shí)驗(yàn)所取的臟腑總穴調(diào)節(jié)三根功能紊亂、提高免疫功能等方面有較好效果［19］。蒙醫(yī)溫針療法是用銀針在人體的固定穴位或其他部位給予針刺加溫灸刺激，達(dá)到預(yù)防和治療疾病目的的一種蒙醫(yī)傳統(tǒng)外治療術(shù)［20］，具有改善氣血循行、調(diào)節(jié)赫依巴達(dá)干的功能失調(diào)、提高機(jī)體免疫功能，激發(fā)調(diào)動和增強(qiáng)機(jī)體的抗病能力等作用［21］外，還具有抗炎、止痛、調(diào)節(jié)神經(jīng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)作用［22］。各種黃水病及赫依性疾病正是蒙醫(yī)溫針治療的優(yōu)勢病種。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，取臟腑總穴溫針刺激能夠調(diào)解AA大鼠血中IL-2、IL-6和TNF-α的含量。提示蒙醫(yī)溫針療法可能通過調(diào)解AA大鼠血中IL-2、IL-6和TNF-α的含量，抑制AA大鼠骨與軟骨的破壞，減輕滑膜炎癥。此結(jié)果為治療RA提供了初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)中溫針對IL-4的調(diào)節(jié)作用不太明顯，其作用機(jī)理有待于進(jìn)一步研究。

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