電項(xiàng)針干預(yù)對(duì)老年性癡呆大鼠5－HT及CHATmRNA的影響

霍 金，韓 數(shù)

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院，黑龍江哈爾濱150001)

老年性癡呆(Senile Dementia)，即阿爾茨海默病(Alzheimer＇s disease，AD)是一種發(fā)生于老年前期或老年期，以進(jìn)行性認(rèn)知障礙和記憶能力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。主要臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和記憶力減退、性格和行為改變、社交障礙、生活自理能力喪失，最終死亡。目前我國(guó)正逐漸步入老齡化社會(huì)，因而研究老年性癡呆的防治方法已成為社會(huì)迫切需要[1]。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化及原位雜交法觀察電項(xiàng)針干預(yù)對(duì)AD大鼠海馬區(qū)5－h(huán)ydroxytryptamine(5－HT)及乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(CHATmRNA)的影響，探討電項(xiàng)針治療AD的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

健康雄性Sprague－Dawley(SD)大鼠40只，體重(350±50)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。按組編號(hào)分籠，自由飲水進(jìn)食。

1.2 藥品及試劑

無(wú)水氯化鋁(天津市永大化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心)，D－半乳糖(上海源聚生物科技有限公司)，兔抗多克隆抗體(武漢博士德生物工程有限公司)。

1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器

德國(guó)菜卡2135型切片機(jī)，美國(guó)moticam3000顯微攝影成像系統(tǒng)，上海一恒電熱恒溫箱，針灸針用華佗牌直徑0.40 mm、長(zhǎng)25 mm無(wú)菌針灸針，電針采用DJ－6805型脈沖電針儀。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 動(dòng)物分組及造模方法

將40只大鼠隨機(jī)分為空白組、假損傷組、模型對(duì)照組、電項(xiàng)針治療組，每組10只?？瞻捉M給予常規(guī)飲水飼食;假損傷組給予常規(guī)飲食飼料，并胃飼及腹腔注射與模型對(duì)照組等容量之生理鹽水;模型對(duì)照組每只大鼠每日胃飼 20 mg·ml－1的 AlCl3水溶液 2 ml，腹腔注射D－半乳糖(48 mg·kg－1)，連續(xù)8周;電項(xiàng)針治療組造模處理同模型對(duì)照組。

1.4.2 治療方法

穴位與針具常規(guī)消毒，按照中國(guó)針灸學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)部提供的大鼠穴位圖譜及比較解剖學(xué)取穴[2]，取大鼠項(xiàng)部雙側(cè)的“風(fēng)池穴”、“供血穴”(頸4夾脊，深層布有椎動(dòng)脈);使用0.40 mm×25 mm毫針直刺3 mm，后接DJ－6805型脈沖電針儀，導(dǎo)線分別上下連接針柄，正極連“風(fēng)池穴”，負(fù)極連“供血穴”。采用疏密波，頻率為5～30 Hz，疏密周期6 s，強(qiáng)度以項(xiàng)部肌肉出現(xiàn)輕微抽動(dòng)為度，持續(xù)刺激20 min，每日1次，每針刺6天，休息1天，連續(xù)治療4周。

空白組、假損傷組、模型對(duì)照組不進(jìn)行針刺治療，4組同步飼養(yǎng)。

1.4.3 陽(yáng)性表達(dá)分析

使用美國(guó)motica3000顯微攝影成像，于400倍鏡下選取海馬CA1－CA3區(qū)攝影，每組選取10例照片，在Motic image 3.2圖像分析軟件下進(jìn)行分析，計(jì)算陽(yáng)性表達(dá)的灰度平均值和平均光密度進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

1.4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 電項(xiàng)針對(duì)AD大鼠5－HT活性的影響

模型對(duì)照組較空白組、假損傷組5－HT灰度平均值增高，平均光密度值下降(P＜0.05)，表明造模后5－HT陽(yáng)性表達(dá)降低;電項(xiàng)針治療后較模型對(duì)照組5－HT灰度平均值降低，平均光密度值增高(P＜0.05)，說(shuō)明5－HT陽(yáng)性表達(dá)有所恢復(fù)。見(jiàn)表1、圖1。

表1 電項(xiàng)針對(duì)AD大鼠5－HT陽(yáng)性表達(dá)的影響

圖1 各組大鼠海馬區(qū)5－HT的陽(yáng)性表達(dá)

圖2 各組大鼠海馬區(qū)CHATmRNA的陽(yáng)性表達(dá)

2.2 電項(xiàng)針對(duì)AD大鼠CHATmRNA的影響

模型對(duì)照組較空白組、假損傷組CHATmRNA灰度平均值增高，平均光密度值下降(P＜0.05)，表明造模后CHATmRNA陽(yáng)性表達(dá)降低;電項(xiàng)針治療后較模型對(duì)照組CHATmRNA灰度平均值降低，平均光密度值增高(P＜0.05)，說(shuō)明CHATmRNA陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)。見(jiàn)表2、圖2。

表2 電項(xiàng)針對(duì)AD大鼠CHATmRNA陽(yáng)性表達(dá)的影響

3 討論

老年性癡呆常見(jiàn)的病因病機(jī)為年老體衰、腎精不足、痰瘀阻絡(luò)、髓?？仗?，而其病性特點(diǎn)則以“本虛標(biāo)實(shí)，督脈不通，瘀血阻脈”為要。督脈“起于下極之俞”，為元?dú)庵矗叭虢j(luò)腦”將臟腑精微輸注入腦，充溢腦髓，奉養(yǎng)元神，督脈不通則臟腑精微輸布受阻，髓海失養(yǎng)，元神失調(diào)，引起“善忘”、“失智”等癡呆病的典型表現(xiàn)。針對(duì)于此本實(shí)驗(yàn)采用針刺雙側(cè)“風(fēng)池穴”及“供血穴”，輔以電針儀的電項(xiàng)針療法治療本病。“風(fēng)池穴”屬于足少陽(yáng)膽經(jīng)，其經(jīng)筋在額角與陽(yáng)蹺脈并行進(jìn)行左右交叉，而陽(yáng)蹺脈又從風(fēng)府入腦，因此選取風(fēng)池穴可使清陽(yáng)得升，腦髓得補(bǔ)，其神自明[3]。“供血穴”為“新穴”，從其定位(風(fēng)池穴下1.5寸，平下口唇處)上來(lái)說(shuō)，足太陽(yáng)、足少陽(yáng)、督脈，三陽(yáng)經(jīng)皆縱貫與旁，而頭為“諸陽(yáng)之會(huì)”，陽(yáng)經(jīng)皆上參入腦，因而供血穴對(duì)“脈絡(luò)瘀滯，髓海失養(yǎng)”所致的癡呆具有很好的治療效果?！帮L(fēng)池穴”及“供血穴”位于督脈兩側(cè)，針刺兩穴符合“近部選穴”和“對(duì)癥選穴”的選穴原則，通過(guò)電針可促使督脈輸布順暢，精微上達(dá)髓海奉養(yǎng)元神，元神得養(yǎng)，則癡呆對(duì)腦造成的損害均可得到改善。

5－HT作為單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，在腦內(nèi)參與多種生理功能和病理狀態(tài)調(diào)節(jié)，并與情緒智能密切相關(guān)。有研究證實(shí)，大部分AD患者腦內(nèi)伴有5－HT系統(tǒng)損害，在額葉5－HT含量?jī)H為原有的39%[4]。CHAT為膽堿能神經(jīng)元的標(biāo)志酶，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)參與合成Ach，也可作為Ach含量的間接指標(biāo)及膽堿能標(biāo)志[5]。大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，AD患者常伴有膽堿能神經(jīng)元缺失和變性，ChAT、AChE和Ach多功能在AD的發(fā)病中均有不同程度的損害[6]。在本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蛯?duì)照組中，5－HT及ChATmRNA在復(fù)合損傷造模后均出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)減弱，與空白組及假損傷組差異顯著(P＜0.05)。經(jīng)過(guò)治療后，5－HT及ChATmRNA的陽(yáng)性表達(dá)均有不同程度的增強(qiáng)，與模型對(duì)照組有明顯差異(P＜0.05)。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)證明電項(xiàng)針治療能夠提高中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝，并通過(guò)增強(qiáng)CHAT的陽(yáng)性表達(dá)改善AD大鼠海馬內(nèi)膽堿能系統(tǒng)功能，從而發(fā)揮防治老年性癡呆的作用。

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