骨髓增生異常綜合征患者ABO血型鑒定

蒿廣德，劉 敏，齊文玲，蒲麗蓉

（廣元市第一人民醫(yī)院 輸血科，四川 廣元628017）

骨髓增生異常綜合征（MDS）是血液系統(tǒng)的惡性疾病，常常伴有血液系統(tǒng)細(xì)胞不同程度的貧血而需要輸血。國(guó)內(nèi)外均有報(bào)導(dǎo)骨髓增生異常綜合征疾病在發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，患者的血型抗原可能減弱或丟失或抗體效價(jià)降低的情況［1，2］，故血型的正確鑒定是確保患者安全輸血的前提。

1 材料與方法

1.1 樣本 收集2009年2月～2011年3月在本院住院診斷為骨髓增生異常綜合征患者28例，其中男性17人，女性11人，年齡35～62歲?；颊咦≡簳r(shí)收集第一次標(biāo)本檢測(cè)ABO血型（O型血檢測(cè)H抗原），及血清中ABO抗體。經(jīng)入院治療病情好轉(zhuǎn)后1個(gè)月后復(fù)查。

1.2 樣本收集 收集患者住院首次采集EDTA抗凝全血1ml，采用正反定型檢測(cè)ABO血型。檢測(cè)ABO血型后提取DNA用50μl的ddH2O溶解，儲(chǔ)存在﹣20℃待用基因分型方法檢測(cè)。

1.3 血型血清學(xué)檢測(cè) 抗－A，B（效價(jià)128）抗－A（效價(jià)256）、抗－B（效價(jià)128）是長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限公司試劑。抗－H（效價(jià)32）檢測(cè)紅細(xì)胞上H抗原含量。吸收放散試劑和反定型試劑用上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)A、B、O紅細(xì)胞。ABO正反定型技術(shù)參照中國(guó)輸血技術(shù)操作規(guī)程［3］。

1.4 ABO血型基因檢測(cè) 使用G ＆ T公司ABO基因檢測(cè)試劑對(duì)28例標(biāo)本對(duì)其ABO血型進(jìn)行定型，入院和經(jīng)一月治療后同血清學(xué)檢測(cè)同步進(jìn)行，共作2次基因檢測(cè)。根據(jù)說(shuō)明書操作，每份DNA標(biāo)本檢測(cè)A101、A201、B和O共4個(gè)基因，PCR反應(yīng)體積10μl。按94℃，3min；94℃，30s、60℃，30s、72℃，90s；30個(gè)循環(huán)后72℃，5min；4℃循環(huán)參數(shù)擴(kuò)增。擴(kuò)增結(jié)束PCR產(chǎn)物在2%的瓊脂糖內(nèi)電泳30min，結(jié)束電泳，凝膠成像記錄結(jié)果。內(nèi)對(duì)照產(chǎn)物長(zhǎng)度207bp。A101血型基因定型產(chǎn)物長(zhǎng)75bp，A201血型基因定型產(chǎn)物長(zhǎng)117bp，B血型基因定型產(chǎn)物長(zhǎng)90bp，O血型基因定型產(chǎn)物長(zhǎng)129bp。

1.5 正常對(duì)照 采用效價(jià)為8和256的抗A、抗B與效價(jià)為32的抗H檢查10名健康供血者ABO血型。

2 結(jié)果

2.1 正常對(duì)照組ABO血型檢測(cè) 10例獻(xiàn)血者標(biāo)本分別用效價(jià)為4的抗A、抗B、抗H的血清檢測(cè)其血型，結(jié)果同用效價(jià)為256的抗A、抗B和效價(jià)為32的抗H血清檢測(cè)ABO血型結(jié)果一致。A型血5例，B型血3例，AB型血1例，O型血1例。

2.2 患者組ABO血型檢測(cè) 患者28例標(biāo)本入院及住院治療后經(jīng)正反定型檢測(cè)和吸收放散試驗(yàn)檢測(cè)，血型最后檢測(cè)結(jié)果A型血13例，B型血10例，O型血4例，AB型血2例。其中11例患者存在抗原減弱或丟失，入院時(shí)檢測(cè)血型結(jié)果，1例正反定型不符（正定型為A，反定型為AB），吸收放散試驗(yàn)檢測(cè)為AB。另1例正反定型為O型，一月后檢測(cè)為A型血。11例抗原減弱或消失患者在入院時(shí)抗原效價(jià)和一月后經(jīng)治療病情好轉(zhuǎn)后的效價(jià)見(jiàn)表1。

表1 11例MSO患者ABO抗原減弱情況

2.3 分子生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果 28例骨髓增生異常綜合征患者入院時(shí)的基因檢測(cè)結(jié)果A型血13例，B型血10例，O型血4例，AB型血2例。其中正反定型不符的1例血清學(xué)檢測(cè)，（正定型為A型，反定型為AB型，表1中11號(hào)標(biāo)本），基因檢測(cè)為AB血型（圖1基因檢測(cè)結(jié)果），吸收放散試驗(yàn)檢測(cè)證實(shí)存在B抗原?；颊呓?jīng)治療1月后再經(jīng)基因檢測(cè)，結(jié)果仍為AB血型，血清學(xué)檢測(cè)正反定型一致為AB型。另1例患者入院時(shí)正反定型為O型，吸收放散試驗(yàn)未證明存在A、B抗原（表1中6號(hào)標(biāo)本），基因檢測(cè)為A型（圖2基因檢測(cè)結(jié)果），一月后血清學(xué)檢測(cè)為A型。血型基因檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)電泳圖1和圖2。

圖1 基因檢測(cè)結(jié)果為AB血型

圖2 基因檢測(cè)結(jié)果為A血型

3 討論

MDS是一種常見(jiàn)的造血系統(tǒng)惡性疾病，放射線、化學(xué)藥物、病毒等均可引起。貧血是明顯的臨床表現(xiàn)，是老年人MDS就診的主要原因，而臨床輸血也是這個(gè)疾病的一個(gè)重要治療手段［3］。本實(shí)驗(yàn)中28例骨髓異常增生患者中有11例患者存在抗原減弱或消失，經(jīng)1月治療后效價(jià)均較入院時(shí)提高。正反定型不符患者在入院時(shí)血型正定型方法檢測(cè)漏檢B抗原，經(jīng)治療B抗原恢復(fù)。11例患者血型抗原在疾病發(fā)展時(shí)存在變化，其中9例血型抗原出現(xiàn)減弱，2例患者抗原出現(xiàn)丟失。除2例抗原丟失患者，其余患者正反定型結(jié)果一致，本實(shí)驗(yàn)中經(jīng)一月治療患者血型抗原效價(jià)增高，證明此疾病可以導(dǎo)致血型抗原的減弱。2例抗原出現(xiàn)丟失的患者，1例正反定型不符，經(jīng)吸收放散檢測(cè)和基因檢測(cè)均證實(shí)了B抗原的存在。1例由于患者真正血型為A型，由于A抗原的丟失沒(méi)有在檢測(cè)中表現(xiàn)出正反定型的不符，而吸收放散檢測(cè)在入院時(shí)也出現(xiàn)了漏檢，基因檢測(cè)準(zhǔn)確對(duì)其定型。一月后患者病情好轉(zhuǎn)血型恢復(fù)也證實(shí)了基因檢測(cè)的準(zhǔn)確性。正是由于基因由遺傳決定［4］，不受疾病發(fā)生發(fā)展等影響，為臨床疑難血型定型及配血提供了技術(shù)保證和輸血安全保障。

由于骨髓異常增生綜合征患者存在血型抗原減弱或消失的可能，所以對(duì)患者血型的正確定型非常重要。常規(guī)的血型正反定型不能夠類似骨髓異常增生患者檢測(cè)血型時(shí)正確的定型，所以對(duì)這樣的患者應(yīng)該輔以吸收放散檢測(cè)和分子生物學(xué)的方法。吸收放散檢測(cè)可以在一定程度上證實(shí)弱抗原的存在。但吸收放散試驗(yàn)對(duì)丟失的抗原也不一定全部都能防止抗原的漏檢，所以本實(shí)驗(yàn)采用分子生物學(xué)的方法對(duì)標(biāo)本進(jìn)行血型基因的檢測(cè)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，血型基因檢測(cè)不受疾病發(fā)生發(fā)展或經(jīng)治療好轉(zhuǎn)的影響，結(jié)果可靠。骨髓異常增生患者疾病初期血型抗原可能存在變化，血清學(xué)檢測(cè)不能百分之百對(duì)其準(zhǔn)確定型，所以臨床醫(yī)生應(yīng)注意輔以吸收放散試驗(yàn)和分子生物學(xué)方法正確定型后在進(jìn)行輸血治療［5］。

［1］蘭炯采，胡利亞.骨髓增生異常綜合征血型變異及其臨床意義［J］.中華血液學(xué)雜志，1988，9：709.

［2］Chester M A，Olsson M L.The ABO blood group gene.A locus of considerable qenetic diversiey［J］.Transfusion Medicine Reviews，2001，15：177.

［3］Tricot G.The role of aggressive chemotherapy in the treatment of the myelodysplastic syndromes［J］.Br Hematol，1986，63：477.

［4］Yamamoto F.Molecular genetics of ABO［J］.Vox Sang，2000，78：91.

［5］Hosoi E.Genetis analyses of the ABO blood groups and application of the clinical laboratories［J］.Rinsho Byori，1997，45（2）：148.