• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    紫外線照射對(duì)果蠅凋亡相關(guān)基因reaper、grim、hid表達(dá)的影響

    2012-11-21 01:12:34應(yīng)瓊瓊陜西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院陜西西安710062
    中國老年學(xué)雜志 2012年11期
    關(guān)鍵詞:果蠅紫外線引物

    應(yīng)瓊瓊 劉 婷 顧 蔚 (陜西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,陜西 西安 710062)

    紫外線照射對(duì)果蠅凋亡相關(guān)基因reaper、grim、hid表達(dá)的影響

    應(yīng)瓊瓊 劉 婷 顧 蔚 (陜西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,陜西 西安 710062)

    目的 探討紫外線照射對(duì)果蠅凋亡相關(guān)基因reaper(rpr),grim,hid表達(dá)的影響。方法 收集8 h內(nèi)羽化果蠅,雌雄分開培養(yǎng)至10日齡,紫外線照射0,0.5,1,1.5,2 h。提取果蠅總RNA,運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)方法檢測各組果蠅rpr、grim、hid基因的表達(dá)。結(jié)果 對(duì)照組果蠅rpr、grim、hid基因表達(dá)較弱,照射后rpr、grim、hid基因的表達(dá)量呈現(xiàn)先增后減的趨勢。結(jié)論 紫外線照射可增加果蠅凋亡相關(guān)基因rpr,grim,hid的表達(dá),可能是其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制之一,但照射達(dá)到一定時(shí)間,基因表達(dá)減弱,可能是其引起衰老的原因。

    紫外線照射;黑腹果蠅;凋亡相關(guān)基因;基因表達(dá)

    紫外線照射會(huì)影響果蠅幼蟲的細(xì)胞形態(tài),并且影響細(xì)胞分裂〔1〕,會(huì)損傷果蠅基因組 DNA,從而引起更多的細(xì)胞凋亡〔2〕,顯著降低果蠅壽命和繁殖力,對(duì)求愛行為也會(huì)產(chǎn)生不利影響〔3〕,連續(xù)照射果蠅三代,結(jié)果顯示子代數(shù)量減少,羽化時(shí)間縮短,體重減輕,具有致畸和間接誘變效應(yīng)〔4〕。機(jī)體通過凋亡的方式清除受損細(xì)胞,短時(shí)間的紫外線照射會(huì)引起果蠅損傷修復(fù)能力的增強(qiáng)〔5〕,若照射時(shí)間過久這種損傷沒有及時(shí)修復(fù),會(huì)導(dǎo)致基因突變,細(xì)胞癌變或死亡,從而誘發(fā)癌癥〔6〕。因此,有關(guān)紫外線誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制成為此領(lǐng)域研究熱點(diǎn)。輻射會(huì)引起果蠅細(xì)胞凋亡的變化,但對(duì)其規(guī)律及相關(guān)基因的表達(dá)目前沒有足夠的分析,因此本實(shí)驗(yàn)通過紫外線照射處理果蠅,從mRNA水平上來探討其對(duì)果蠅凋亡相關(guān)基因rpr,grim,hid表達(dá)的影響。

    1 材料與方法

    1.1 動(dòng)物 野生型黑腹果蠅Canton-S品系,培養(yǎng)于恒溫恒濕培養(yǎng)箱,(25±1) ℃,相對(duì)濕度(RH)60% ~75%,12 L:12 D。

    1.2 試劑與儀器 Trizol、PrimeScriptTMRT reagent Kit、Taq酶、dNTP均購自TaKaRa公司;氯仿、異丙醇、無水乙醇均為分析純。254.7 nm紫外燈(220 V,15 W);Microfuge 22 R離心機(jī)、DU 730核酸/蛋白分析儀,BECKMAN公司;PTC-200 PCR,BIORAD公司;Tanon-1600全自動(dòng)數(shù)碼凝膠圖像處理系統(tǒng),上海天能科技有限公司。

    1.3 實(shí)驗(yàn)方法

    1.3.1 培養(yǎng)基配制 本實(shí)驗(yàn)果蠅采取玉米-糖-酵母(CSY)基本培養(yǎng)基培養(yǎng)〔7,8〕。

    1.3.2 紫外線照射 收集基本培養(yǎng)基中8 h內(nèi)羽化未交配的果蠅,按雌雄隨機(jī)分管培養(yǎng),每3天更換一次培養(yǎng)基,培養(yǎng)至10日齡后進(jìn)行紫外線照射。每組雌雄果蠅各20只,放在培養(yǎng)皿中,表面覆蓋一層有孔薄膜,置于紫外光源下15 cm處分別照射 0,0.5,1,1.5,2 h。

    1.3.3 果蠅rpr,grim,hid基因表達(dá)的檢測 采用Trizol常規(guī)一步法提取總RNA,測定RNA樣品純度,取總RNA 1 μg,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。PCR引物由上海生工公司合成,以GAPDH作為內(nèi)參基因。引物序列如下,rpr上游引物:5'-TGGCAGTGGCATTCTACATACC-3',下游引物:5'-ATCCTCATTGCGATGGCTTG-3',退火溫度:64℃,擴(kuò)增片段長度:296 bp。grim上游引物:5'-GTTCGTCAAAAAGCGACAAGTT-3',下游引物:5'-TGGCCATGGCGGTATTTAAT-3',退火溫度:55℃,擴(kuò)增片段長度:253 bp。hid上游引物:5'-GCAGGAAGGAAGGAAGCGGATAAG-3',下游引物:5'-GAGGTGGTGGTGTTCGGCGATT-3',退火溫度:66 ℃,擴(kuò)增片段長度:201 bp。GAPDH上游引物:5'-TGGGATACACCGATGAGG-3',下游引物:5'-TGTGGGTGGGTAGTGTTCTT-3',退火溫度:54℃,擴(kuò)增片段長度:220 bp。PCR反應(yīng)體系:10×PCR Buffer 2.0 μl,Mg2+1.2 μl,Taq 酶 0.2 μl,dNTPs 0.8 μl,模板 cDNA 1.0 μl,上下游引物各 0.4 μl,加滅菌蒸餾水補(bǔ)充至20 μl。PCR反應(yīng)程序:95℃預(yù)變性5 min;95℃變性30 s,退火30 s,72℃延伸20 s,共35個(gè)循環(huán);最后72℃延伸5 min。取5 μl PCR產(chǎn)物加上樣緩沖液經(jīng)1.2%瓊脂糖凝膠(含EB)電泳分離,凝膠成像系統(tǒng)觀察結(jié)果并拍照。所有樣本均取樣3次,進(jìn)行3次RT-PCR分析,要求相同結(jié)果需達(dá)到2次以上。

    2 結(jié)果

    2.1 RNA質(zhì)量檢測 用核酸∕蛋白分析儀檢測總RNA,其OD260/OD280比值在1.8~2.0之間,符合后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)要求。瓊脂糖甲醛變性凝膠電泳檢測到28 S、18 S、5 S三條帶,且18 S較寬較亮,28 S與5 S亮度接近,弱于18 S,RNA結(jié)構(gòu)基本保持完整,DNA與蛋白質(zhì)的污染極少,表明抽提到較高質(zhì)量的總RNA(圖1)。

    2.2 內(nèi)參基因GAPDH的表達(dá) 紫外線照射前后,均擴(kuò)增出GAPDH基因,片段大小為220 bp,與預(yù)期相同(圖2),且在各樣本中表達(dá)均一,表明該內(nèi)參基因及RT-PCR體系符合半定量表達(dá)分析的要求。

    2.3 果蠅rpr基因的表達(dá) 對(duì)照組果蠅rpr基因表達(dá)非常弱,照射后rpr基因表達(dá)量顯著增加(圖2),雄蠅照射1.5 h表達(dá)量最高,2.0 h時(shí)表達(dá)量下調(diào)回對(duì)照組水平,雌蠅照射0.5 h表達(dá)量最高,隨時(shí)間延長表達(dá)量略有下調(diào)。

    2.4 果蠅grim基因的表達(dá) 對(duì)照組果蠅grim基因表達(dá)非常弱,照射后grim基因表達(dá)量顯著增加(圖2),雄蠅照射1.0,1.5 h表達(dá)量最高,雌蠅照射0.5,1.0,1.5 h表達(dá)量最高,2.0 h時(shí)均下調(diào)回對(duì)照組水平。

    2.5 果蠅hid基因的表達(dá) 對(duì)照組果蠅hid基因表達(dá)較弱,照射后hid基因表達(dá)量顯著增加(圖2),雄蠅照射0.5 h表達(dá)量最高,1.5 h時(shí)表達(dá)量下調(diào)回對(duì)照組水平,雌蠅照射1.0 h表達(dá)量最高,2.0 h時(shí)表達(dá)量均顯著下調(diào)。

    圖1 果蠅總RNA

    圖2 紫外線照射后果蠅體內(nèi)GAPDH、rpr、grim、hid基因的表達(dá)

    3 討論

    本文結(jié)果表明紫外線照射可以誘導(dǎo)rpr,grim,hid的表達(dá),導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,從而修復(fù)造成的損傷。但當(dāng)照射達(dá)到一定時(shí)間,損傷程度超過了生物體修復(fù)能力,凋亡基因的表達(dá)減弱甚至低于正常水平,組織、器官的功能就逐步發(fā)生障礙,導(dǎo)致壽命降低,與本實(shí)驗(yàn)室前期所證實(shí)的γ射線照射雄蠅能顯著縮短其壽命相符〔8〕。Bergmann等〔9〕研究發(fā)現(xiàn),在果蠅的發(fā)育進(jìn)程中,rpr和grim僅在將要死亡的細(xì)胞中表達(dá),而hid可以在正常存活的細(xì)胞中表達(dá),與本文結(jié)果一致。有關(guān)衰老機(jī)制的學(xué)說認(rèn)為,體內(nèi)某種程度的損傷不斷累積,能影響細(xì)胞功能,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡,最終造成衰老,實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示對(duì)照組雄蠅rpr、grim、hid基因表達(dá)量高于雌蠅,間接表明雄蠅體內(nèi)細(xì)胞凋亡的程度高于雌蠅,這就和雄蠅壽命普遍低于雌蠅相一致。果蠅體內(nèi)hid基因?qū)ψ贤饩€照射的耐受程度可能低于rpr和grim基因。此外,雌雄果蠅的rpr、grim、hid基因表達(dá)量達(dá)到最高時(shí)所對(duì)應(yīng)的紫外線照射時(shí)間各不相同,這可能與雌雄個(gè)體內(nèi)該基因?qū)ψ贤饩€照射的敏感度不同有關(guān),雌蠅體內(nèi)rpr、grim基因?qū)ψ贤饩€刺激的敏感度高于雄蠅,而hid基因剛好相反。由本實(shí)驗(yàn)可得出,紫外線照射能影響果蠅凋亡相關(guān)基因rpr、grim、hid表達(dá),照射一定時(shí)間,基因表達(dá)減弱,進(jìn)而導(dǎo)致生物體機(jī)能紊亂,機(jī)體逐漸趨于衰老。高強(qiáng)度的紫外線照射會(huì)對(duì)人皮膚產(chǎn)生紅斑效應(yīng),導(dǎo)致皮膚癌〔6〕,還可損傷呼吸系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)以及誘發(fā)白內(nèi)障等諸多疾病〔10〕。因此紫外輻射對(duì)于生物體的影響效應(yīng)越來越多的受到關(guān)注和重視。

    1 Soustelle L,Aigouy B,Asensio ML,et al.UV laser mediated cell selective destruction by confocal microscopy〔J〕.Neu Dev,2008;3(11):90-105.

    2 Luo X,Puig O,Hyun J,et al.Foxo and Fos regulate the decision between cell death and survival in response to UV irradiation〔J〕.EMBO J,2007;26(5):380-90.

    3 王哲鵬,劉瑞芳,王安如,等.紫外輻射對(duì)野生型、黑檀體和黃體果蠅壽命、繁殖力、求愛行為及生化指標(biāo)的影響〔J〕.生命科學(xué),2008;38(9):816-24.

    4 張建民.紫外線對(duì)黑尾果蠅的生物學(xué)效應(yīng)〔J〕.昆蟲知識(shí),1994;31(4):242-4.

    5 Aguilar-Fuentes J,F(xiàn)regosol M,Herreral M.P8/TTDA overexpression enhances UV-irradiation resistance and suppresses TFIIH mutations in a Drosophila trichothiodystrophy mode〔lJ〕.EMBO J,2006;26(5):380-8.

    6 翟興禮,史本林.紫外線輻射對(duì)生物的影響〔J〕.農(nóng)業(yè)與技術(shù),2000;20(1):44-5.

    7 顧 蔚,車娜克,單玉龍,等.酵母粉對(duì)果蠅精子發(fā)生之影響〔J〕.西北大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2006;36(6):932-5.

    8 侯江瑜,顧 蔚,韓和同,等.γ射線輻照對(duì)雄果蠅壽命及子代生理的影響〔J〕.核農(nóng)學(xué)報(bào),2010;24(2):407-10.

    9 Bergmann A,Agapite J,McCall K,et al.The Drosophila gene hid is a direct molecular target of Ras-dependent survival signaling〔J〕.Cell,1998;95:331-41.

    10 Tanaka K,Kamiuchi S,Ren Y,et al.UV-induced skin carcinogenesis in xeroderma pigmentosum group A(XPA)gene-knockout mice with nucleotide excision repair-deficiency〔J〕.Mut Res,2001;477(2):31-40.

    Effect of ultraviolet irradiation on the expressions of apoptosis related genes reaper,grim,hid in Drosophila YING Qiong-Qiong,LIU Ting,GU Wei.

    College of Life Sciences,Shaanxi Normal University,Xi'an 710062,Shaanxi,China

    Objective To study the effect on the expressions of apoptosis related genes reaper(rpr),grim,hid in Drosophila melanogaster after ultraviolet irradiation.Methods The flies of Drosophila were collected within 8 hours after eclosion.After cultured on standard medium for 10 days,flies were exposed to ultraviolet for different times(0.0 ,0.5,1.0,1.5,2.0 h).Then the total RNA from flies were extracted.The expressions of genes rpr,grim,hid were detected by Reverse Transcription PCR(RT-PCR).Results In the control group,the expressions of apoptosis related genes rpr,grim,hid in Drosophila were weak.After ultraviolet irradiation,the expressions of genes rpr,grim,hid were increased at first and then decreased.Conclusions Ultraviolet irradiation can enhance the expressions of apoptosis related genes rpr,grim,hid in Drosophila,which may be one of the molecular mechanisms of apoptosis induced by ultraviolet.But after a certain time exposure,expressions are decreased,which may be the cause of aging.

    Ultraviolet irradiation;Drosophila melanogaster;Apoptosis related gene;Gene expression

    Q786

    A

    1005-9202(2012)11-2307-03;

    10.3969/j.issn.1005-9202.2012.11.044

    中央高?;究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金(GK201002042)

    顧 蔚(1963-),男,博士,副教授,碩士生導(dǎo)師,主要從事發(fā)育遺傳與衰老研究。

    應(yīng)瓊瓊(1988-),女,在讀碩士,主要從事發(fā)育遺傳學(xué)研究。

    〔2011-07-27收稿 2011-12-12修回〕

    (編輯 曹夢園)

    猜你喜歡
    果蠅紫外線引物
    果蠅也會(huì)“觸景傷身”
    小果蠅大貢獻(xiàn)
    DNA引物合成起始的分子基礎(chǔ)
    高中生物學(xué)PCR技術(shù)中“引物”相關(guān)問題歸類分析
    紫外線指數(shù),提醒你保護(hù)皮膚
    果蠅遇到危險(xiǎn)時(shí)會(huì)心跳加速
    看不見的光——紅外線與紫外線
    SSR-based hybrid identification, genetic analyses and fingerprint development of hybridization progenies from sympodial bamboo (Bambusoideae, Poaceae)
    讓人又愛又恨的紫外線
    小果蠅助力治療孤獨(dú)癥
    免费看a级黄色片| 麻豆成人午夜福利视频| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲成人免费电影在线观看| av欧美777| 俄罗斯特黄特色一大片| 免费在线观看黄色视频的| 国产精品永久免费网站| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 人人妻人人澡欧美一区二区| 免费观看人在逋| 麻豆国产av国片精品| 正在播放国产对白刺激| 亚洲三区欧美一区| 深夜精品福利| 欧美乱妇无乱码| 国产人伦9x9x在线观看| 一二三四在线观看免费中文在| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| www日本黄色视频网| 在线永久观看黄色视频| 日本免费a在线| 久久这里只有精品19| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲五月色婷婷综合| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 两个人视频免费观看高清| 国产麻豆成人av免费视频| 精品国内亚洲2022精品成人| 18禁观看日本| 亚洲性夜色夜夜综合| 三级毛片av免费| 久久青草综合色| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 国产成人一区二区三区免费视频网站| 亚洲av成人一区二区三| 国产亚洲精品第一综合不卡| 午夜亚洲福利在线播放| 成人三级做爰电影| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 日韩欧美三级三区| 麻豆国产av国片精品| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 欧美亚洲日本最大视频资源| 色综合站精品国产| 久99久视频精品免费| 免费观看精品视频网站| 成人国产一区最新在线观看| 嫩草影院精品99| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 亚洲,欧美精品.| 色精品久久人妻99蜜桃| 国产精品 欧美亚洲| 成人国产综合亚洲| 欧美激情 高清一区二区三区| 久久久久国内视频| 免费观看精品视频网站| 神马国产精品三级电影在线观看 | 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 看片在线看免费视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 精品电影一区二区在线| 一区二区三区精品91| 亚洲无线在线观看| 一级片免费观看大全| 国产色视频综合| av视频在线观看入口| 久久 成人 亚洲| 中文在线观看免费www的网站 | 欧美日韩乱码在线| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 麻豆成人av在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲国产欧美网| 午夜福利一区二区在线看| 久久精品国产综合久久久| 熟女电影av网| 啦啦啦免费观看视频1| 长腿黑丝高跟| 久久亚洲精品不卡| 757午夜福利合集在线观看| 制服诱惑二区| 午夜福利18| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 哪里可以看免费的av片| 久久天堂一区二区三区四区| 午夜福利欧美成人| 黄色毛片三级朝国网站| www.www免费av| 欧美成人午夜精品| 中国美女看黄片| 午夜福利在线在线| 在线av久久热| 国产精品免费视频内射| 亚洲avbb在线观看| 欧美黑人巨大hd| 天天添夜夜摸| 国产成年人精品一区二区| 色哟哟哟哟哟哟| aaaaa片日本免费| 亚洲第一青青草原| 日韩国内少妇激情av| 亚洲成a人片在线一区二区| av在线播放免费不卡| 午夜久久久在线观看| 18美女黄网站色大片免费观看| 成人国语在线视频| 免费无遮挡裸体视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 搞女人的毛片| 欧美人与性动交α欧美精品济南到| 久久久久久国产a免费观看| 男女午夜视频在线观看| 婷婷丁香在线五月| 欧美性猛交黑人性爽| 亚洲性夜色夜夜综合| 黄色视频不卡| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲成a人片在线一区二区| 亚洲性夜色夜夜综合| 欧美在线黄色| 日韩精品中文字幕看吧| aaaaa片日本免费| 天天添夜夜摸| 天堂动漫精品| 久久国产精品影院| 亚洲avbb在线观看| 麻豆国产av国片精品| 18禁观看日本| netflix在线观看网站| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 少妇 在线观看| 欧美大码av| 一区二区三区精品91| 国产精品av久久久久免费| 国产主播在线观看一区二区| 一级黄色大片毛片| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 国产真实乱freesex| 日韩免费av在线播放| 看免费av毛片| 国产激情久久老熟女| 欧美乱码精品一区二区三区| 黄色女人牲交| 一区福利在线观看| 999久久久精品免费观看国产| 校园春色视频在线观看| 最近最新免费中文字幕在线| 欧美性猛交黑人性爽| 老司机靠b影院| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲欧美激情综合另类| 中文字幕av电影在线播放| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 免费看美女性在线毛片视频| 成人三级做爰电影| 少妇 在线观看| 亚洲,欧美精品.| 欧美成狂野欧美在线观看| 亚洲精品久久国产高清桃花| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲成人久久性| 欧美最黄视频在线播放免费| 精品久久蜜臀av无| 国产精品 国内视频| 宅男免费午夜| 国产男靠女视频免费网站| 亚洲av电影在线进入| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲一区高清亚洲精品| 操出白浆在线播放| 一个人免费在线观看的高清视频| 亚洲男人天堂网一区| 欧美黑人欧美精品刺激| 99热只有精品国产| 亚洲精品色激情综合| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产免费av片在线观看野外av| 免费高清视频大片| 国产精品久久视频播放| 国产成人啪精品午夜网站| 岛国在线观看网站| 精华霜和精华液先用哪个| 淫秽高清视频在线观看| 午夜免费观看网址| 在线观看一区二区三区| 国内揄拍国产精品人妻在线 | 一区二区三区高清视频在线| 欧美三级亚洲精品| 亚洲精品中文字幕在线视频| 国产99白浆流出| 国产午夜福利久久久久久| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 一级毛片女人18水好多| 成人三级黄色视频| 国产成人精品无人区| 99久久精品国产亚洲精品| 黄片大片在线免费观看| 日韩欧美免费精品| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 啪啪无遮挡十八禁网站| 好男人在线观看高清免费视频 | 欧美乱码精品一区二区三区| 欧美不卡视频在线免费观看 | 高清在线国产一区| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 在线播放国产精品三级| 欧美另类亚洲清纯唯美| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 老汉色av国产亚洲站长工具| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 国产精品亚洲一级av第二区| 巨乳人妻的诱惑在线观看| or卡值多少钱| 欧美黄色片欧美黄色片| 99在线人妻在线中文字幕| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 黄频高清免费视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产精品日韩av在线免费观看| 午夜福利在线观看吧| 真人一进一出gif抽搐免费| 在线av久久热| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产精品二区激情视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 97碰自拍视频| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 中文字幕人妻丝袜一区二区| 欧美国产日韩亚洲一区| 久久人人精品亚洲av| 国产成人影院久久av| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 欧美日韩一级在线毛片| 精品福利观看| av在线天堂中文字幕| 亚洲天堂国产精品一区在线| 不卡一级毛片| 天堂√8在线中文| 在线观看午夜福利视频| 亚洲欧美激情综合另类| 特大巨黑吊av在线直播 | 老司机深夜福利视频在线观看| 国产成人欧美| 18禁观看日本| 日韩欧美三级三区| 极品教师在线免费播放| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲欧美激情综合另类| 波多野结衣巨乳人妻| 色哟哟哟哟哟哟| 在线永久观看黄色视频| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 国产精品久久久久久精品电影 | 欧美黄色淫秽网站| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 黄色成人免费大全| 少妇被粗大的猛进出69影院| 免费高清视频大片| 欧美成人性av电影在线观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 国产乱人伦免费视频| 久久久久久久午夜电影| 高潮久久久久久久久久久不卡| 精华霜和精华液先用哪个| 一边摸一边抽搐一进一小说| www.精华液| 精品国产国语对白av| 中文资源天堂在线| 两个人看的免费小视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 亚洲成av人片免费观看| 国产成人影院久久av| 久久香蕉激情| 国产成+人综合+亚洲专区| 国产精品二区激情视频| 久99久视频精品免费| 精品国内亚洲2022精品成人| 亚洲专区中文字幕在线| 久久亚洲精品不卡| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 午夜福利在线观看吧| 99热6这里只有精品| 真人做人爱边吃奶动态| 在线观看www视频免费| 国产91精品成人一区二区三区| 国产成年人精品一区二区| 俄罗斯特黄特色一大片| 午夜免费激情av| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 男人的好看免费观看在线视频 | 欧美一区二区精品小视频在线| 中亚洲国语对白在线视频| 一级毛片精品| 国产高清视频在线播放一区| 国产精品一区二区三区四区久久 | 日韩欧美在线二视频| 丁香六月欧美| 婷婷亚洲欧美| 国产野战对白在线观看| 丝袜人妻中文字幕| 久久国产精品人妻蜜桃| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产视频内射| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 天堂√8在线中文| 两性夫妻黄色片| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 看免费av毛片| 亚洲精品国产区一区二| 日韩三级视频一区二区三区| 精品欧美国产一区二区三| 午夜免费鲁丝| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 18禁美女被吸乳视频| 一级毛片高清免费大全| 国产精品二区激情视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 又黄又粗又硬又大视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 亚洲七黄色美女视频| 真人做人爱边吃奶动态| 成人免费观看视频高清| 人人澡人人妻人| 自线自在国产av| 久久精品影院6| 亚洲五月婷婷丁香| 最近最新中文字幕大全电影3 | 国产精品亚洲一级av第二区| 美女午夜性视频免费| av视频在线观看入口| 日本一本二区三区精品| 午夜免费观看网址| 制服人妻中文乱码| 国产精品影院久久| 露出奶头的视频| 好男人在线观看高清免费视频 | 激情在线观看视频在线高清| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 在线播放国产精品三级| 久久精品人妻少妇| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 精品久久久久久久末码| 99久久国产精品久久久| 日本在线视频免费播放| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 亚洲,欧美精品.| 日韩有码中文字幕| 色哟哟哟哟哟哟| a在线观看视频网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 丝袜美腿诱惑在线| svipshipincom国产片| 久久香蕉精品热| 午夜免费观看网址| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 精品欧美国产一区二区三| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 久久婷婷成人综合色麻豆| 亚洲av电影在线进入| 精品一区二区三区av网在线观看| www.999成人在线观看| 国产精品亚洲av一区麻豆| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 亚洲无线在线观看| 国产激情久久老熟女| 亚洲精品在线美女| 色综合站精品国产| 亚洲欧美激情综合另类| 中文亚洲av片在线观看爽| 长腿黑丝高跟| 免费看日本二区| 少妇 在线观看| 亚洲片人在线观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 桃色一区二区三区在线观看| 色播在线永久视频| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 老司机午夜十八禁免费视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 999久久久国产精品视频| 国产av又大| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 少妇被粗大的猛进出69影院| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 亚洲精华国产精华精| 伦理电影免费视频| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产高清激情床上av| 亚洲国产欧美一区二区综合| 特大巨黑吊av在线直播 | 操出白浆在线播放| 国产精品99久久99久久久不卡| videosex国产| 亚洲人成伊人成综合网2020| 午夜久久久久精精品| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 51午夜福利影视在线观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产91精品成人一区二区三区| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 欧美午夜高清在线| 国内精品久久久久精免费| 亚洲成人国产一区在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 精品国产亚洲在线| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 91麻豆av在线| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲精品美女久久av网站| 国产亚洲av嫩草精品影院| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲中文av在线| 午夜福利视频1000在线观看| 中文资源天堂在线| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲性夜色夜夜综合| 一本精品99久久精品77| 午夜免费观看网址| 亚洲 欧美一区二区三区| 亚洲人成77777在线视频| 国产熟女xx| 狠狠狠狠99中文字幕| 在线国产一区二区在线| 日本精品一区二区三区蜜桃| aaaaa片日本免费| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 午夜免费观看网址| 最近最新中文字幕大全免费视频| 成人精品一区二区免费| 99国产极品粉嫩在线观看| 男人的好看免费观看在线视频 | 欧美一级a爱片免费观看看 | 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 大香蕉久久成人网| 日韩国内少妇激情av| 亚洲精品粉嫩美女一区| 看免费av毛片| 国产精品精品国产色婷婷| 国产精品一区二区免费欧美| 日韩精品青青久久久久久| а√天堂www在线а√下载| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久婷婷成人综合色麻豆| 90打野战视频偷拍视频| 九色国产91popny在线| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 欧美一区二区精品小视频在线| 老司机午夜十八禁免费视频| av在线播放免费不卡| 国产精品一区二区免费欧美| 一个人免费在线观看的高清视频| 欧美国产精品va在线观看不卡| 叶爱在线成人免费视频播放| www日本在线高清视频| 少妇粗大呻吟视频| 欧美激情高清一区二区三区| 国内精品久久久久精免费| av中文乱码字幕在线| 男女视频在线观看网站免费 | 国产aⅴ精品一区二区三区波| 免费av毛片视频| 人人澡人人妻人| a级毛片a级免费在线| 757午夜福利合集在线观看| 又大又爽又粗| 在线观看免费视频日本深夜| 99久久无色码亚洲精品果冻| 99久久99久久久精品蜜桃| 欧美黄色片欧美黄色片| 精品一区二区三区四区五区乱码| 一级a爱视频在线免费观看| 国产一区二区在线av高清观看| 国产av一区在线观看免费| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 18禁美女被吸乳视频| 怎么达到女性高潮| 美女午夜性视频免费| 日本一区二区免费在线视频| 丝袜在线中文字幕| x7x7x7水蜜桃| 欧美黑人精品巨大| 亚洲 欧美一区二区三区| 性色av乱码一区二区三区2| 国语自产精品视频在线第100页| 给我免费播放毛片高清在线观看| 成人av一区二区三区在线看| 久久香蕉激情| 色哟哟哟哟哟哟| 麻豆av在线久日| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| АⅤ资源中文在线天堂| 国产高清videossex| 两个人免费观看高清视频| 亚洲男人的天堂狠狠| 男女下面进入的视频免费午夜 | x7x7x7水蜜桃| 欧美三级亚洲精品| 99riav亚洲国产免费| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 黄色视频,在线免费观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产成年人精品一区二区| 人妻久久中文字幕网| www.自偷自拍.com| 亚洲人成电影免费在线| 久久香蕉精品热| 亚洲国产精品成人综合色| 国产精品99久久99久久久不卡| 91成年电影在线观看| 亚洲在线自拍视频| 日韩三级视频一区二区三区| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲真实伦在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 777久久人妻少妇嫩草av网站| www.www免费av| 一级黄色大片毛片| 国产高清有码在线观看视频 | 看片在线看免费视频| 久久99热这里只有精品18| 少妇的丰满在线观看| 91字幕亚洲| 好男人在线观看高清免费视频 | 国产伦人伦偷精品视频| 久久久久久久久中文| 精品乱码久久久久久99久播| 特大巨黑吊av在线直播 | 久99久视频精品免费| 悠悠久久av| 久99久视频精品免费| 日韩精品青青久久久久久| 国产国语露脸激情在线看| 少妇粗大呻吟视频| 真人一进一出gif抽搐免费| 女同久久另类99精品国产91| 日本 欧美在线| 久热爱精品视频在线9| а√天堂www在线а√下载| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产高清激情床上av| 午夜福利成人在线免费观看| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美成人性av电影在线观看| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 久久久久国产一级毛片高清牌| 91成人精品电影| 狂野欧美激情性xxxx| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 天天一区二区日本电影三级| 麻豆国产av国片精品| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 日本a在线网址| 亚洲色图av天堂| 又大又爽又粗| 女同久久另类99精品国产91| 母亲3免费完整高清在线观看| 免费无遮挡裸体视频| 69av精品久久久久久| 欧美不卡视频在线免费观看 | 亚洲国产精品成人综合色| 天天一区二区日本电影三级| 91成年电影在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 亚洲中文av在线| 人人妻人人看人人澡| 免费看美女性在线毛片视频| 一区二区三区激情视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 香蕉av资源在线| 中文字幕精品免费在线观看视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 久久国产乱子伦精品免费另类| 人人澡人人妻人| 亚洲七黄色美女视频| 成人av一区二区三区在线看| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久久久久国产a免费观看| 日韩精品中文字幕看吧| 午夜免费激情av| 少妇粗大呻吟视频| 99热6这里只有精品| 无遮挡黄片免费观看| 免费看日本二区| 99re在线观看精品视频| 91麻豆av在线| 男女做爰动态图高潮gif福利片|