高效液相色譜法測(cè)定活血定痛合劑中阿魏酸的含量

李 洋

南京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210046

高效液相色譜法測(cè)定活血定痛合劑中阿魏酸的含量

李 洋

南京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京 210046

目的:研究活血定痛合劑中阿魏酸的含量測(cè)定方法。方法:色譜柱:HangBang C18(200*4.6mm 5μm);流動(dòng)相:甲醇－0.6%冰醋酸 (45:55);檢測(cè)波長(zhǎng)為UV320nm;流速為0.5ml/min;結(jié)果:該方法的線性范圍為0.513～2.565μg(r=0.9999)，平均回收率為98.86%。結(jié)論:本法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、可行，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可用于活血定痛合劑的成分含量測(cè)定。

色譜法;高效液相;活血定痛合劑;阿魏酸;含量

活血定痛合劑由川芎、當(dāng)歸、赤芍、沒(méi)藥、紅花、桃仁、莪術(shù)、延胡索、續(xù)斷、青木香等中藥組成，具有治療風(fēng)濕痹痛、筋骨疼痛、跌打損傷，具有良好的臨床效果［1］。為了保證臨床用藥效果，控制活血定痛合劑的質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜法測(cè)定活血定痛合劑中阿魏酸含量的方法。經(jīng)方法學(xué)考察證實(shí)該方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀系統(tǒng)包括高效液相色譜儀 (Waters 515);P200高壓泵;Waters 2487紫外檢測(cè)器;色譜柱Hanbang C18(200*4.6mm 5μm);數(shù)據(jù)采集及處理采用HS色譜數(shù)據(jù)工作站V4.0+(杭州英譜科技)。

1.2 試藥

阿魏酸對(duì)照品，中國(guó)藥品生物制品檢定所 (批號(hào):0762－200603);活血定痛合劑，常熟市中醫(yī)院制劑室提供(批號(hào):20100708，20100821，20100923，20101122); 其他試劑均為分析純。

表1 活血定痛合劑加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)［2］

色譜柱:HangBang C18(200*4.6mm 5μm);流動(dòng)相:甲醇－0.6%冰醋酸 (45:55);使用前以0.45μM微孔濾膜減壓過(guò)濾，檢測(cè)波長(zhǎng)為UV320nm;流速為0.5ml/min。此條件下分離度＞2.0，理論塔板數(shù)按阿魏酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取阿魏酸對(duì)照品10.26mg，置100 mL量瓶中，加流動(dòng)相超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.1026mg/ml對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密吸取本品10 mL(約1/20瓶量)置100 mL容量瓶中，加流動(dòng)相40mL，密塞，搖勻，超聲處理 (功率300W，頻率100Hz)60分鐘，放冷，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，用0.45μM微孔濾膜減壓過(guò)濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系

取對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣5、10、15、20、25μL，即相當(dāng)于阿魏酸0.513，1.026，1.539，2.052，2.565μg的對(duì)照品溶液，測(cè)定峰面積，以阿魏酸質(zhì)量為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程以及線性范圍，分別為:Y=175785.2858X+373.7548，r=0.9999，阿魏酸進(jìn)樣量在0.513～2.565μg范圍內(nèi)峰面積與進(jìn)樣量呈良好線性。

2.5 加樣回收率

精密吸取已知含量的樣品溶液5份，分別置50mL量瓶中，每份精密加入一定量對(duì)照品溶液，然后用流動(dòng)相稀釋到刻度，照含量測(cè)定方法操作，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.6 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

在上述色譜條件下，取阿魏酸對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣8次20μL，記錄峰面積，RSD為1.08%。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一批號(hào)的樣品 (批號(hào):20100708)按照樣品測(cè)定的方法重復(fù)操作8次，測(cè)得阿魏酸平均含量和RSD，結(jié)果表明，重復(fù)性試驗(yàn)RSD為1.31% ，表明本法重現(xiàn)性很好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取樣品 (批號(hào):20100708)新配的供試品溶液分別在0、2、4、8、16h進(jìn)樣20μL，測(cè)定其中阿魏酸的峰面積，結(jié)果RSD為1.16%，表明供試品溶液在16 h穩(wěn)定。

2.9 樣品測(cè)定

取4批樣品，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測(cè)定含量，分別進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖，按外標(biāo)法計(jì)算樣品中阿魏酸的含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 HPLC測(cè)定活血定痛合劑中阿魏酸的含量結(jié)果

3 討論

3.1 根據(jù)所測(cè)四批樣品的含量結(jié)果，活血定痛合劑中阿魏酸的平均含量為28.75mg/瓶，因此可規(guī)定活血定痛合劑中阿魏酸 (C19H25O3)不得少于20mg/瓶。

3.2 提取方法的選擇 本實(shí)驗(yàn)曾用幾種方法處理樣品，結(jié)果以本文擬訂的方法結(jié)果最好，且操作簡(jiǎn)便，故選用超聲處理 (功率300W，頻率100Hz)60分鐘。

3.3 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 阿魏酸的分子光譜僅在320nm處有一中等強(qiáng)度的吸收峰，故選擇320nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。

［1］金鳳珠.活血定痛合劑的研制及臨床療效觀察［J］.吉林中醫(yī)藥，2001，(2):53.

［2］歐陽(yáng)強(qiáng)，劉義保，雷茂華.靖巔飲口服液中阿魏酸的含量測(cè)定［J］.中國(guó)新藥與臨床藥理，1999，10(5):293－294.

R284.1

A

1007－8517(2012)02－0041－01

2011.11.27)

李洋 (1972－)，男，壯族，江蘇省南京市人，南京中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院2007級(jí)博士研究生。E－mail:nzyylx@163.com。