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    果糖基肽氧化酶法測定糖尿病患者HbA1c

    2012-11-12 07:37:06
    微循環(huán)學雜志 2012年1期
    關鍵詞:批間層析氧化酶

    劉 俊 付 波

    糖化血紅蛋白(HbA1c)含量可反映糖尿?。―M)患者過去2~3個月時間內平均血糖水平,如果能將其降至8.1%以下,DM并發(fā)癥的發(fā)生將會大大減少。因此,一種快速、簡便,準確性及精密度均符合臨床要求的HbA1c檢測方法對DM治療、預后均有重要意義。本文采用一種新的酶學方法——果糖基肽氧化酶法測定58例DM患者HbA1c濃度,并與陽離子交換高效液相層析法進行線性回歸對比分析,以及觀察其精密度和各種干擾因素的影響。

    1 資料與方法

    1.1 檢測對象

    選取58例DM患者,其中男39例,女19例;年齡17~59歲,平均46.55歲;T1DM 15例,T2DM 43例,均符合1999年WHO和美國DM協(xié)會診斷標準[1]。

    1.2 儀器與試劑

    美國雅培AEROSET全自動生化分析儀,所用果糖基肽氧化酶法試劑、前處理液、校準品及質控品由日本第一化學公司提供;陽離子交換高效液相層析全自動HbA1c分析儀(HLC-723G7)及配套試劑由日本TOSOH公司提供。

    1.3 檢測方法

    采集58例DM 患者空腹靜脈血2ml,EDTAK2抗凝,同時用兩種方法檢測HbA1c含量。果糖基肽氧化酶法:標本經800g離心力離心5min,取紅細胞層25μl加入500μl前處理液中,放置5min后上機測定。其原理為:第一反應中,在蛋白酶的作用下切斷源于血紅蛋白A1c的β鏈N末端的糖化二肽,同時通過測定600nm與800nm的吸光度差,求出Hb的濃度;第二反應中,果糖基肽氧化酶作用于糖化二肽,在過氧化物酶存在下生成的過氧化氫與N-(羧甲基氨基羰基)-4,4’二甲胺基二苯胺化鈉(顯色劑)產生顯色反應。通過測定此吸光度求出HbA1c的濃度,根據求得的HbA1c濃度與Hb濃度計算出HbA1c(%)。陽離子交換高效液相層析法:直接檢測血液總Hb中的A1c(%)。

    1.4 分析指標

    (1)對兩種方法的測定結果進行線性回歸分析,以評價兩種檢測結果的相關性。(2)取HbA1c低、高值質控品各1份,采用果糖基肽氧化酶法同批檢測20次,評估批內精密度。(3)低、高值兩種質控物分別連續(xù)測定20天,計算批間精密度。(4)分別在樣本中加入不同濃度脂肪乳、葡萄糖和膽紅素,評價其對果糖基肽氧化酶法測定HbA1c結果的干擾情況。

    2 結 果

    2.1 兩種檢測方法的線性回歸分析

    對兩種檢測方法的測值進行線性回歸,結果顯示兩者呈顯著正相關(r=0.9637),線性方程Y=0.9711X+0.1607(Y為果糖基肽氧化酶法測定值,X為陽離子交換高效液相層析法測定值)。

    2.2 果糖基肽氧化酶法的精密度

    果糖基肽氧化酶法測定HbA1c低、高值質控品的批內變異系數分別是3.10%、3.50%,平均變異系數為3.30%;批間變異系數分別為4.20%、4.30%,平均批間變異系數4.25%。見表1。

    表1 果糖基肽氧化酶法的精密度(%)

    2.3 干擾試驗

    將不同濃度膽紅素(100~500μmol/L)、脂肪乳(0.5~2.0%)、葡萄糖(2.0~10.0g/L)分別加入待測樣本中,采用果糖基肽氧化酶法測定加入干擾物前后的測定值偏差,結果顯示各種濃度膽紅素、脂肪乳、葡萄糖對測定結果無明顯干擾,偏差均<0.30%。

    3 討 論

    HbA1c作為DM篩選、診斷、血糖控制、療效觀察的有效檢測指標在臨床中已廣泛應用。目前主要檢測方法有五種:陽離子交換高效液相層析法、微柱法、電泳法、親和層析法、免疫法,其中離子交換高效液相層析法是金標準方法,而免疫法是目前生化分析儀上常用的檢測方法。因為各種方法的原理不同,測定結果的準確度、重復性可能有所差異。本文采取DM患者血標本,應用果糖基肽氧化酶法和離子交換高效液相層析法測定,結果表明兩法相關性良好,r=0.9637,批內和批間CV分別為3.30%、4.25%,符合試劑盒批內CV≤5%、批間CV≤10%的要求。同時也觀察了主要干擾因素膽紅素、脂肪乳、葡萄糖對檢測結果的影響,結果顯示三者加入標本中引起的偏差均小于0.30%,可以忽略不計。

    值得注意的是,在采用果糖基肽氧化酶法測定DM患者HbA1c濃度時,(1)高速離心后,需正確采集血液細胞層,因為不同層面的血細胞HbA1c結果會有較大差別[2],建議使用800g離心力離心5min,在血細胞層高度的20~80%范圍內采集標本;(2)同時應該避免標本溶血或保存時間過長;(3)所測標本的 Hb濃度高于160g/L或低于50g/L時,應調整前處理液的用量,以得到更準確的結果;(4)使用糖與氨基酸混合輸液患者,其標本測定結果可能出現假性增高。

    1 葉任高,陸再英主編.內科學[M].第6版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2004.787~795.

    2 宮下瞮夫.日本臨床檢查自動化學會會志,2004,29:181.

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