直接ELISA法與間接ELISA法檢測(cè)HIV抗體的對(duì)比分析

喬健健

直接ELISA法與間接ELISA法檢測(cè)HIV抗體的對(duì)比分析

喬健健

目的合理選擇檢測(cè)試劑，建立一種準(zhǔn)確的ELISA檢測(cè)方法。方法直接ELISA法和間接ELISA法對(duì)不同血液標(biāo)本分別進(jìn)行HIV抗體的檢測(cè)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較分析。結(jié)果間接ELISA法檢測(cè)后會(huì)出現(xiàn)不同例數(shù)的假陽(yáng)性結(jié)果，而直接ELISA法未出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。結(jié)論直接ELISA法檢測(cè)結(jié)果假陽(yáng)性率低，作為新一代試劑，可逐步取代間接ELISA法。

酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定法;直接ELISA法;間接ELISA法;HIV;檢測(cè)

檢測(cè)人類(lèi)免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)抗體的常用實(shí)驗(yàn)方法有蛋白印跡法、酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay，ELISA)法、膠體金法等。ELISA法的操作步驟簡(jiǎn)便，試劑成本較低，檢測(cè)靈敏度較高，尤其適合于標(biāo)本的快速批量檢測(cè)，因而我國(guó)血站、衛(wèi)生防疫部門(mén)更常使用 ELISA法進(jìn)行血液篩查和檢測(cè)［1］。ELISA法有直接檢測(cè)法和間接法，間接ELISA法會(huì)造成較大的假陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果，浪費(fèi)原本緊張的臨床血液資源，打擊了一部分獻(xiàn)血者的參與積極性，甚至?xí)霈F(xiàn)不良社會(huì)影響和糾紛［2］。為了合理選擇檢測(cè)試劑，建立一種準(zhǔn)確的ELISA檢測(cè)方法，本文采用直接ELISA法和間接ELISA法分別進(jìn)行HIV抗體的檢測(cè)，并對(duì)結(jié)果進(jìn)行比較分析，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源 隨機(jī)選取本中心接收的血液標(biāo)本314例，采用間接ELISA法檢測(cè)結(jié)果HIV陽(yáng)性8例的血液標(biāo)本，經(jīng)過(guò)上級(jí)確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室確認(rèn)的HIV陽(yáng)性3例的血液標(biāo)本。

1.2 儀器 ETI-MAX3000型全自動(dòng)酶免分析儀。

1.3 試劑 檢測(cè)所用的質(zhì)控血清為衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心提供。間接ELISA法試劑盒分別購(gòu)自國(guó)內(nèi)公司 (A)與公司(B)。直接ELISA法為雙抗原夾心法，所用國(guó)產(chǎn)試劑盒購(gòu)自國(guó)內(nèi)某公司(C)，進(jìn)口試劑盒購(gòu)自日本某公司(D)。所有試劑均在有效期內(nèi)使用，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)規(guī)定的操作步驟進(jìn)行。

1.4 檢測(cè)方法 將血液樣品離心后，通過(guò)自動(dòng)加樣器加樣，在全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析系統(tǒng)中進(jìn)行兩次免疫初篩。對(duì)于初篩陽(yáng)性血液標(biāo)本采用雙孔平行檢測(cè)法再次檢測(cè)。采用GeneLab試劑將ELISA法初篩結(jié)果陽(yáng)性的血液標(biāo)本進(jìn)行免疫學(xué)蛋白印跡法確證實(shí)驗(yàn)。

2 結(jié)果

間接ELISA法和直接ELISA法檢測(cè)HIV抗體的陽(yáng)性結(jié)果比較見(jiàn)表1?？梢?jiàn)，間接ELISA法檢測(cè)后會(huì)出現(xiàn)不同例數(shù)的假陽(yáng)性結(jié)果，而直接ELISA法未出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

表1 間接法和直接法檢測(cè)HIV抗體的陽(yáng)性結(jié)果比較

3 討論

ELISA法是進(jìn)行HIV感染情況的最常用初篩方法。間接ELISA法采用非特異性的抗人IgG作為酶標(biāo)二抗，只可檢測(cè)IgG抗體，對(duì)在微孔板上吸附的抗體無(wú)篩查功能，因而間接ELISA法特異性較低。影響間接ELISA法特異性的因素較多，但大比例的是由非特異性因素造成的。這是由于HIV抗原和其他逆轉(zhuǎn)錄病毒抗原存在交叉反應(yīng)，而一些人血清中的HIV抗體和HIV感染的淋巴細(xì)胞抗原也存在交叉反應(yīng)，所以會(huì)出現(xiàn)一定比例的假陽(yáng)性結(jié)果［3］。直接ELISA法的采用固相抗原的抗-HIV抗原作為酶標(biāo)，固相抗原和抗-HIV抗原可對(duì)血清中的HIV抗體進(jìn)行雙重識(shí)別［4］，因此，直接EL ISA法特異性較高，其檢測(cè)HIV抗體的假陽(yáng)性結(jié)果比間接ELISA法降低。

可用于ELISA法檢測(cè)的試劑盒較多，國(guó)產(chǎn)試劑盒價(jià)格較低、靈敏度較高，而進(jìn)口試劑盒價(jià)格較昂貴、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性高［5］。目前國(guó)內(nèi)ELISA法檢測(cè)試劑盒沒(méi)有采用統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，因而國(guó)產(chǎn)間接法試劑盒的檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)不同例數(shù)的陽(yáng)性結(jié)果。在國(guó)產(chǎn)和進(jìn)口直接ELISA法試劑盒的對(duì)比中，二者的檢測(cè)結(jié)果無(wú)差異，均和確證實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。因此，使用國(guó)產(chǎn)雙抗原直接ELISA法試劑盒來(lái)進(jìn)行血液的HIV篩查工作，成本較低，而特異性、靈敏度均符合要求。

［1］殷勤，盛磊.不同孵育方式對(duì)ELISA法抗-HIV(1+2)檢測(cè)結(jié)果的影響．臨床檢驗(yàn)雜志，2005，23(6):444-446．

［2］何紅霞，貌盼勇，侯俊，等.雙抗原夾心法檢測(cè)抗HIV-1/2總抗體方法的建立和評(píng)價(jià)．中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志，2002，16(3):571-573．

［3］李鎣玲，黃玲，馬海燕，等.抗-HIV(1/2)間接法與雙抗原夾心法的比較．廣西預(yù)防醫(yī)學(xué)，2004，10(1):62-62．

［4］張宏萍.三種方法篩查HIV抗體的比較．上海預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，24(3):155-156．

［5］強(qiáng)來(lái)英，林旭東，沈彤慶，等.國(guó)產(chǎn)抗-HIV ELISA診斷試劑質(zhì)量提高的血清學(xué)證實(shí)．中國(guó)輸血雜志，2003，16(2):81-83．

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