復(fù)方板藍(lán)根噴霧劑的制備與質(zhì)量控制研究

廣東嶺南職業(yè)技術(shù)學(xué)院（510663）曹智啟 羅憲堂 楊鳳瓊 李巖

復(fù)方板藍(lán)根噴霧劑處方由板藍(lán)根和大青葉組成，具有清熱解毒、涼血利咽之功能，用于治療溫毒發(fā)斑、舌絳紫暗、喉痹、爛喉丹痧、癰腫等癥[1]。目前臨床上廣泛使用的劑型是板藍(lán)根沖劑和糖漿劑。但由于含糖量高，服用量大，糖尿病和肥胖病癥者不宜服用。為此，我們?cè)谠菨{劑的基礎(chǔ)上，改進(jìn)制劑工藝而制成復(fù)方板藍(lán)根噴霧劑(以下稱本品)，解決了上述問題，而且有使用方便的特點(diǎn)。采用高效液相色譜(HPLC)法對(duì)靛玉紅的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果滿意，并具有簡(jiǎn)便、快捷、分離度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點(diǎn)，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

1 制備工藝

1.1 處方 板藍(lán)根500g，大青葉500g。

1.2 工藝 稱取處方量的板藍(lán)根及大青葉，粉碎，混合，用6倍量的65%乙醇滲漉法提取，漉液回收乙醇后，加水放置，濾過，制成1000ml，即得。

2 質(zhì)量控制

2.1 性狀 本品為噴霧劑，為棕褐色溶液，氣微，味微苦。

2.2 鑒別

2.2.1 取本品溶液1.0ml，置于濾紙上，晾干，置于紫外燈(365nm)下觀察，顯藍(lán)色熒光。

2.2.2 取本品溶液1.0ml，作為供試品溶液。另取靛玉紅對(duì)照品，分別加乙酸乙酯制成0.2mg/ml的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法制備硅膠G薄層板，取供試品溶液5ul，對(duì)照品溶液各5ul，分別點(diǎn)于硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90)一醋酸乙酯一二乙胺(7.5：5：1)展開，取出晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.3 檢查應(yīng)符合噴霧劑[2]項(xiàng)下有關(guān)的各項(xiàng)規(guī)定。

2.4 含量控制

2.4.1 儀器與試藥 LC-100型高效液相色譜儀(上海伍豐公司)，包括LC-100輸液泵、7725i手動(dòng)進(jìn)樣器、LC-100紫外檢測(cè)器、LC-100色譜工作站；AS20500B型超聲波清洗器(功率500W，天津奧特賽恩斯儀器有限公司)。靛玉紅對(duì)照品(供含量測(cè)定用，中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為0717—200404)；復(fù)方板藍(lán)根噴霧劑(廣東嶺南職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥物制劑室自制)；其它試劑均為AR級(jí)。

2.4.2 方法與結(jié)果

2.4.2.1 色譜條件 色譜柱：DiamonsiTM,C18(250mm×4.6mm，5um)；流動(dòng)相：甲醇一0.1%乙酸銨一乙酸(80∶20∶1)；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：286nm；理論塔板數(shù)按靛玉紅峰計(jì)算應(yīng)不低于5000，在此條件下靛玉紅能達(dá)到理想的分離效果，分離度>1.5。

2.4.2.2 溶液的制備

2.4.2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的靛玉紅對(duì)照品約0.5mg，分別置50ml的量瓶中，用甲醇溶解并定容，即得。

2.4.2.2.2 供試品溶液的制備 移取復(fù)方板藍(lán)根噴霧劑溶液約1ml，置10ml量瓶中，加甲醇約5ml，超聲處理20min，取出，放冷，加甲醇至刻度，用0.45um微孔濾膜過濾，即得。

2.4.2.2.3 陰性對(duì)照溶液 移取按處方比例及生產(chǎn)工藝制備的不含板藍(lán)根和大青葉原藥材的陰性樣品，按“2.4.2.2.2”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.4.2.3 空白試驗(yàn) 分別精密移取靛玉紅對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各20ul，注入色譜儀。結(jié)果供試品在靛玉紅對(duì)照品相應(yīng)位置處有相似的吸收峰，而陰性對(duì)照在此位置處無吸收峰，說明其他成分不干擾靛玉紅的測(cè)定。

2.4.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密移取靛玉紅對(duì)照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2ml分別用甲醇稀釋，定容至10ml容量瓶，注入HPLC色譜儀，測(cè)定峰面積，以峰面積積分值 (x)為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度 (y)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算，得靛玉紅的回歸方程為y=7.39903e-006x+0.000744645 (r2=0.999945，n=7)。結(jié)果表明，靛玉紅的進(jìn)樣量分別在0.0812～0.9745ug/ml范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.4.2.5 精密度試驗(yàn) 每次進(jìn)樣上述對(duì)照品溶液20ul，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定。結(jié)果靛玉紅峰面積的RSD=0.58%，表明儀器的精密度良好。

2.4.2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn) 移取復(fù)方板藍(lán)根噴霧劑樣品（批號(hào)為20110925）5ml，按“2.4.2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，每次進(jìn)樣20ul，共6次。結(jié)果靛玉紅的平均含量為1.643ug/ml，RSD= 0.51%，表明試驗(yàn)方法的重現(xiàn)性良好。

2.4.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密移取新配制的供試品溶液，按上述色譜條件分別于制備后2、4、6、8、10h內(nèi)各測(cè)定1次。結(jié)果靛玉紅含量的RSD=0.55%，表明在提取后10h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定。

2.4.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密移取已知含量的復(fù)方板藍(lán)根噴霧劑樣品（批號(hào)為20110925）5ml共6份，精密加入已知濃度的靛玉紅對(duì)照品溶液，按樣品測(cè)定方法測(cè)定。結(jié)果詳見附表1。

2.4.2.9 樣品含量測(cè)定 按上述色譜條件和測(cè)定方法測(cè)定樣品含量。結(jié)果詳見附表2。

附表1 靛玉紅的加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6)

附表2 復(fù)方板藍(lán)根噴霧劑中靛玉紅的含量測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 小結(jié)與討論

3.1 本品的制備工藝合理，采用醇水兩步提取，盡可能提取了其有效成分，且質(zhì)量可控制，可代替沖劑和糖漿劑用于臨床。

3.2 在展開劑中加入少量二乙胺使其成堿性，可避免靛玉紅產(chǎn)生拖尾現(xiàn)象。

3.3 在選擇系統(tǒng)適應(yīng)性條件時(shí)，流動(dòng)相曾選擇甲醇-0.1%醋酸(65：35)，結(jié)果靛藍(lán)與靛玉紅分離度不好，雜質(zhì)峰干擾太多，而且出峰時(shí)間長(zhǎng)。選用文中流動(dòng)相分離度大于1.5，分離效果較好。

3.4 本方法經(jīng)穩(wěn)定性試驗(yàn)證明，結(jié)果在2h內(nèi)穩(wěn)定。同時(shí)進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)和加樣回收率試驗(yàn)，結(jié)果滿意，可作為本品質(zhì)量控制的方法。