不同培養(yǎng)基對(duì)乙酰螺旋霉素片含量測(cè)定的影響

廣東省韶關(guān)市食品藥品檢驗(yàn)所（512028）朱興保 嚴(yán)曉明 王莉蓓

乙酰螺旋霉素為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，《中國(guó)藥典》2010年版（二部）規(guī)定其含量測(cè)定方法為抗生素微生物檢定法，其中管碟法是目前較常用的方法之一。由于管碟法測(cè)定抗生素效價(jià)的影響因素較多，除檢驗(yàn)者操作技術(shù)、抑菌圈的測(cè)量、供試品與標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制等人為因素外，培養(yǎng)基的質(zhì)量也是重要的影響因素之一[1][2]。我國(guó)生產(chǎn)培養(yǎng)基已有相當(dāng)長(zhǎng)的歷史，但生產(chǎn)出的培養(yǎng)基卻參差不齊，為探討培養(yǎng)基對(duì)抗生素微生物檢定結(jié)果的影響情況，本文對(duì)常用的培養(yǎng)基進(jìn)行了檢測(cè)分析比對(duì)。

附表 采用不同生產(chǎn)廠家及同一生產(chǎn)廠家不同批號(hào)培養(yǎng)基的測(cè)定乙酰螺旋霉素含量結(jié)果

1 儀器與試藥

ZY-300Ⅳ多功能微生物自動(dòng)測(cè)量分析儀（北京先驅(qū)威鋒技術(shù)開發(fā)公司）；梅特勒托利多XS-105電子天平；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱。乙酰螺旋霉素標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，規(guī)格：200mg，批號(hào)：130347-200403）；抗生素檢定培養(yǎng)基Ⅱ號(hào)（7.8～8.0）（北京某廠，批號(hào)分別：100616，110201，110910；廣東某廠，批號(hào)：20110524；青島某廠，批號(hào)：20110111）；枯草芽孢桿菌[ CMCC（B）63 501 ]（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備 精密稱取乙酰螺旋霉素標(biāo)準(zhǔn)品18.55mg，用10ml乙醇溶解后，加滅菌水制成每1ml中含1000單位的溶液，另取乙酰螺旋霉素片適量，同法制成每1ml中含1000單位的溶液，精密量取上述兩種溶液適量，臨用前用滅菌磷酸鹽緩沖液（pH=7.8）稀釋至每1ml中含5單位和10單位的溶液，作為標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液。

2.2 培養(yǎng)基配制 稱取抗生素檢定培養(yǎng)基Ⅱ號(hào)（7.8～8.0）干粉適量，按說明書配制，用1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值使滅菌后為8.0～8.2。

2.3 檢驗(yàn)方法 按照《中國(guó)藥典》2010年版（二部）抗生素微生物檢定法（附錄XI A）管碟法的二劑量法[3]，以枯草芽孢桿菌為試驗(yàn)菌，以抗生素檢定培養(yǎng)基Ⅱ號(hào)（7.8～8.0）為檢定培養(yǎng)基，在35～37℃中培養(yǎng)16小時(shí)后，用ZY-300Ⅳ多功能微生物自動(dòng)測(cè)量分析儀測(cè)量抑菌圈直徑，按照生物檢定統(tǒng)計(jì)法中的（2.2）方法進(jìn)行可靠性測(cè)驗(yàn)及效價(jià)計(jì)算，按乙酰螺旋霉素計(jì)算出標(biāo)示量的百分含量。

2.4 檢驗(yàn)結(jié)果 分別采用不同廠家及同一廠家不同批號(hào)的抗生素檢定培養(yǎng)基Ⅱ號(hào)（7.8～8.0），檢測(cè)乙酰螺旋霉素片的含量，比較不同批號(hào)間的結(jié)果差異，結(jié)果見附表。經(jīng)t檢驗(yàn)，乙酰螺旋霉素片含量測(cè)定結(jié)果，與青島某廠批號(hào)20110111比較P＜0.05，與北京某廠批號(hào)100616比較P＜0.05，均有顯著差異。

兩人采用同一批號(hào)培養(yǎng)基，在相同條件下檢測(cè)乙酰螺旋霉素的含量，各進(jìn)行六次，比較不同人員測(cè)定結(jié)果的重現(xiàn)性，結(jié)果分別為90.1%，90.6%，90.4%，91.2%，91.5%，90.9%和90.4%，92.0%，91.4%，90.2%，90.3%，91.3%，平均值分別為90.8%和90.9%，經(jīng)F檢驗(yàn)，P＞0.05，結(jié)果無(wú)顯著差異。

3 討論

結(jié)果顯示，不同生產(chǎn)廠家與同一生產(chǎn)廠家生產(chǎn)的不同批號(hào)的培養(yǎng)基檢測(cè)結(jié)果均有差異，北京某廠批號(hào)100616與青島某廠批號(hào)20110111的產(chǎn)品之間平均含量相差為5.4%；北京某廠生產(chǎn)的不同批號(hào)培養(yǎng)基測(cè)出的結(jié)果也有明顯差異，其中批號(hào)100616與110201產(chǎn)品之間的平均含量相差4.4%。為排除人員實(shí)驗(yàn)操作因素，選擇不同實(shí)驗(yàn)者采用同廠家同批號(hào)培養(yǎng)基，在相同條件下檢測(cè)同一批的供試品，結(jié)果表明差異不明顯，重現(xiàn)性較好。

目前，培養(yǎng)基除用于藥品檢驗(yàn)外，還廣泛用于醫(yī)院臨床檢驗(yàn)、預(yù)防醫(yī)學(xué)、動(dòng)植物檢驗(yàn)、微生物學(xué)等各領(lǐng)域，但培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家較多，以致生產(chǎn)出來(lái)的培養(yǎng)基的質(zhì)量參差不齊，即使同一廠家不同批次的產(chǎn)品也會(huì)有明顯差別，直接影響到用于含量測(cè)定的微生物檢定法的準(zhǔn)確性，尤其對(duì)藥檢所仲裁或判斷邊緣產(chǎn)品是否符合規(guī)定時(shí)加大了難度。因此，建議制定培養(yǎng)基質(zhì)量控制的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，嚴(yán)格從生產(chǎn)商的產(chǎn)品供應(yīng)到實(shí)驗(yàn)室制備、產(chǎn)品使用、產(chǎn)品銷毀和最終產(chǎn)品的質(zhì)量控制等各方面和各環(huán)節(jié)作出詳細(xì)規(guī)定，用于保證微生物培養(yǎng)基的質(zhì)量。