檸檬總提取物對正常大鼠及SHR血壓、血脂影響的實驗研究

李軍暉，劉曉帥，王果，劉孝林，曾南

檸檬（Citrus limon）又名檸果、洋檸檬、益母果，屬蕓香科(Rutaceae)柑橘屬常綠小喬木。我國栽培的檸檬主要分布在長江以南，以四川栽培最多。四川省資陽市安岳縣是檸檬之鄉(xiāng)，也是全國唯一的檸檬商品生產(chǎn)基地縣。檸檬含有豐富的檸檬酸、Vc 、VB 、VE 、黃酮類、揮發(fā)油、橙皮苷、多種礦物質(zhì)及微量元素等，是一種營養(yǎng)和藥用價值都極高的水果，具有殺菌、美容、穩(wěn)定情緒、提神、潤喉、降低膽固醇、預(yù)防壞血病、防止腎結(jié)石和心血管動脈硬化等功效[1]。本研究以安岳檸檬為研究對象，就其總提取物對正常大鼠及自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）的血壓、血脂水平的影響進行了試驗研究，以期為安岳檸檬的進一步加工利用提供實驗依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物

新鮮檸檬，由資陽市安岳縣農(nóng)業(yè)局檸檬辦提供。檸檬總提取物，棕色液體分層，濃度50%，批號20100727，由成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院化學(xué)實驗室夏厚林教授提供。試驗時，采用0.5 %吐溫80溶液配制各劑量組藥液，濃度分別為0.3 g mL-1、0.18 g mL-1、0.108 g mL-1（即高、中、低劑量組），置4℃冰箱中保存?zhèn)溆?。硝苯地平片，?guī)格10 mg，100片/瓶，批號100402，重慶青陽藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。

1.2 試劑

葡萄糖（GLU）、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）試劑盒，四川省邁克科技有限責任公司產(chǎn)品，批號分別為0310101、0610131、0610101。

1.3 動物

SD大鼠，SPF級，雌雄各半，體重180～220 g,由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供，合格證號：SCXK-川-2008-24。自發(fā)性高血壓大鼠（SHR），雄性，體重190～250 g；同源WKY大鼠10只，雄性，體重190～250 g，許可證號SCXK（滬）2007-0005，合格證號2007000514882，上海斯萊克實驗動物有限責任公司提供。

1.4 儀器

BL-420F生物機能信號系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司產(chǎn)品；無創(chuàng)血壓測定系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司產(chǎn)品；ST-360酶標儀、ST-360洗板機，上?？迫A實驗系統(tǒng)有限公司。

2 方法

2.1 對正常大鼠血壓的影響（頸動脈插管法）

取健康SD大鼠，體重180～220g，雌雄各半，按體重分層隨機分為5組：溶媒對照、硝苯地平、檸檬提取液高、中、低劑量組，連續(xù)灌胃給藥21 d。實驗當日，動物稱重麻醉，分離左側(cè)頸總動脈，行主動脈插管，銀針插入四肢皮下，行肢體導(dǎo)聯(lián)（標準II導(dǎo)聯(lián)）連接BL-420F生物信號系統(tǒng)，待波形穩(wěn)定后，記錄給藥前及末次給藥（十二指腸給藥）30 min后動物的心率、收縮壓、舒張壓、平均動脈壓，計算變化率，腹主動脈取血，分離血清測定GLU、TC、TG含量。

變化率（降壓率）=[（給藥前-給藥后）÷ 給藥前]×100%

2.2 對自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）血壓的影響（無創(chuàng)法）

取健康SHR，雄性，實驗前大鼠每日固定時間段于固定網(wǎng)套中測定尾動脈血壓1次，待大鼠血壓穩(wěn)定后，按體重和血壓值（記錄給藥前血壓、心率）隨機分組：SHR自身正常對照（同源WKY）、SHR對照、SHR+硝苯地平、SHR+檸檬提取液高、中、低劑量。然后開始每日灌胃給藥1次，連續(xù)灌胃給藥28d。并分別于給藥7、14、21、28 d時測定給藥后2小時大鼠的血壓（一般重復(fù)測定3次，每次間隔1min，取其平均值作為測定值）和心率。給藥28 d后，測定完血壓與心率后，處死動物，取血，分離血清，按試劑盒說明測定血清GLU、TC、TG含量。

3 結(jié)果

3.1 檸檬總提取物連續(xù)給藥21 d對正常大鼠血壓、血脂與血糖水平的影響

結(jié)果表明，檸檬總提取物連續(xù)給藥21 d，對麻醉大鼠的血壓有降低趨勢，其中6.0 g kg-1對平均動脈壓有顯著降低作用（P<0.05）；各劑量組對大鼠血清TG含量有顯著降低作用（P<0.01），血糖與總膽固醇水平影響不明顯。見表1、2。

表1 檸檬總提取物給藥21 d對正常大鼠血壓的影響（x±SD）

表2 檸檬總提取物給藥21 d對正常大鼠血清GLU、TC、TG含量的影響（x±SD）

3.2 檸檬總提取物連續(xù)給藥28 d對SHR血壓、血脂與血糖水平的影響

結(jié)果表明，檸檬總提取物6.0 g kg-1連續(xù)給藥21天時，對SHR的收縮壓、舒張壓及平均動脈血壓有降低趨勢，其余給藥時間點（7、14、28 d），對SHR血壓影響不明顯。連續(xù)給藥28 d，6.0 g kg-1、2.16 g kg-1對SHR的血清TG含量有降低作用（P<0.05），對血糖與總膽固醇水平影響不明顯。見表3、4。

表3 檸檬總提取物不同給藥時間對SHR血壓的影響（x±SD）

注：與SHR模型組比較， *P<0.05，** P<0.01

表4 檸檬總提取物連續(xù)給藥28d對SHR血清GLU、TC、TG含量的影響（x±SD）

4 討論

有研究報道表明，檸檬果醇提水液有明顯增加豚鼠離體心臟冠脈流量、抗小鼠缺氧、降低家兔血壓的作用，對犬血壓呈現(xiàn)雙相反應(yīng)，先有短暫升壓然后降壓[2]。為進一步探討其對血壓、血脂的影響，本研究以檸檬之鄉(xiāng)安岳的新鮮檸檬為研究對象，采用正常大鼠與SHR，觀察其總提取物連續(xù)灌胃給予對大鼠血壓及血清脂質(zhì)、血糖水平的影響，以期進一步明確檸檬的降壓與降脂保健作用。結(jié)果表明，安岳檸檬總提取物連續(xù)給藥21 d，對麻醉正常大鼠的血壓有降低趨勢，其中6.0 g kg-1對平均動脈壓有顯著降低作用（P<0.05），但檸檬總提取物連續(xù)給藥7、14、21、28 d，無創(chuàng)法觀測SHR的血壓，發(fā)現(xiàn)除6 g kg-1劑量在連續(xù)給藥21 d時，對SHR的收縮壓、舒張壓及平均動脈血壓有降低趨勢外，其余給藥時間點對SHR高血壓影響均不明顯。無論對正常大鼠還是SHR，檸檬總提取物連續(xù)給藥21 d或28 d，能明顯降低大鼠血清甘油三酯含量，但對血糖與總膽固醇水平影響不明顯。本實驗結(jié)果提示，安岳檸檬總提取物具有較明確的降低甘油三酯作用，能改善血脂代謝；其降血壓作用則有待進一步考證——對正常麻醉大鼠以十二指腸方式給藥能顯著降低血壓，但對SHR以灌胃方式給藥對血壓無明顯影響，結(jié)果的差異推測與給藥途徑有關(guān)，灌胃方式給藥可能對其降壓成分有所破壞，因此不排除藥物可能具有降血壓的作用。

近年來，檸檬提取物藥理作用的研究主要集中在抗菌、抗病毒方面[3~4]，其次即為其所含化學(xué)成分如檸檬苦素、檸檬酸、檸檬烯等的抗腫瘤、抗病原微生物、改善糖代謝的藥理研究，然而檸檬的很多保健作用報道其實并非是檸檬總提取物的作用，往往是其單體成分的一些作用，以檸檬總提取物為研究對象的報道較少。安岳檸檬果實及其檸檬油的品質(zhì)居全國首位，為進一步綜合利用開發(fā)安岳檸檬，有必要對其降壓、降血脂等作用進行實驗研究，提供更詳實的科學(xué)依據(jù)。

[1] 高 俊燕,朱春華,李進學(xué),等.檸檬加工綜合利用的研究進展[J].亞熱帶農(nóng)業(yè)研究,2009,5(1):64.

[2] 姚 權(quán)瑞,陳柏遐.檸檬果對心血管系統(tǒng)作用的部分研究[J].桂林醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1990,3(1):12.

[3] 王 玉芝,張向宇,劉劍,等.檸檬提取物抗單純皰疹病毒實驗研究[J].實用口腔醫(yī)學(xué)雜志,2008,24(5):627.

[4] 張 緯,徐建設(shè),孫曉明,等.檸檬提取物對多重耐藥金黃色葡萄球菌的抑菌作用[J].天津醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2008,14(1):47.