藥對白術(shù)-陳皮揮發(fā)油成分GC-MS分析

楊小紅 ，羅 瓊，胡劍卓 ,陳 文 ，譚 敏

(1.湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410006；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,湖南 長沙 410005；3.長沙醫(yī)學(xué)院，湖南 長沙 410219)

白術(shù)(Atractylodes Macrocephala Koidz)為菊科植物的干燥根莖，有健脾益氣、燥濕利水、止汗安胎之效[1,2]。陳皮(Pericarpium Citri Reticulate)為蕓香科植物橘及其栽培變種的干燥成熟果皮。性溫味苦，具有理氣健脾，燥濕化痰之功效[3,4]。白術(shù)、陳皮為補(bǔ)氣、燥濕消痰、止瀉的常用配伍。白術(shù)重于補(bǔ)氣，陳皮重在理氣，兩者相配，補(bǔ)而不滯，理氣而不傷氣。共奏健脾化濕、行氣祛痰、止瀉之功效[5]。如異功散，參苓白術(shù)散，補(bǔ)中益氣湯等經(jīng)典方劑。白術(shù)和陳皮配伍后揮發(fā)油的化學(xué)成分是否有變化尚未見于報(bào)道。為此，本文分別提取組分的揮發(fā)油，經(jīng)GC-MS檢測鑒定單味白術(shù)、陳皮及二種藥材藥對揮發(fā)油的主要化學(xué)成分，探討單味藥和藥對揮發(fā)油是否存在差異，期望為簡化制劑工藝提供有用的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和研究方法。

1 材料與方法

1.1 材料

白術(shù)、陳皮 (購于湖南省藥材公司)；HP5890/5973GC/MS聯(lián)用儀(美國)；微型植物試樣粉碎機(jī)(天津泰斯特儀器有限公司)；電子調(diào)溫電熱套(天津泰斯特儀器有限公司)；醋酸乙酯、乙醇、乙醚(均為分析純)。

1.2 方法

1.2.1 揮發(fā)油的提取

分別取白術(shù)和陳皮粉末40 g，加適量水，浸泡1 h，用水蒸氣蒸餾法提取，得蒸餾液,取蒸餾液分別用適量乙醚萃取兩次。萃取液自然揮干，加入140 mL醋酸乙酯得單味待測液。白術(shù)和陳皮的收油率分別為1.12%、1.21%。稱取白術(shù)粉末40 g和陳皮粉末40 g，混勻，加水沒過，同上法提取復(fù)方(白術(shù)、陳皮)揮發(fā)油，得淡黃棕色半固體物質(zhì)，加入醋酸乙酯，得復(fù)方待測液。

1.2.2 揮發(fā)油的分析條件

色譜條件：HP-5 MS石英毛細(xì)管柱 (0.25mm×30m×0.25μm)；柱前壓 30 kPa；分流比 50:1；進(jìn)樣口溫度270℃；程序升溫：70℃(保持2 min)，以12℃/min的速度升溫至150℃(保持5 min)，再以7℃/min的速度升溫至230℃(保持5 min)；進(jìn)樣體積1 μL；流速1.0 mL/min；檢測器溫度:270℃。

圖1 白術(shù)揮發(fā)油的總離子流

圖2 陳皮揮發(fā)油的總離子流

圖3 復(fù)方(白術(shù)、陳皮)揮發(fā)油的總離子流

圖4 反-6-乙烯基-4，5，6，7-四氫-3，6-二甲基-5-異丙烯基苯并呋喃的質(zhì)譜圖

質(zhì)譜條件：電離源EI，離子源溫度173℃，檢測器溫度280℃，掃描范圍20～400 amu，掃描間隔0.25 s，電子能量:70 eV。

2 結(jié)果

2.1 白術(shù)揮發(fā)油

白術(shù)揮發(fā)油GC-MS檢測得總離子流圖(圖1)。用直觀推導(dǎo)式演進(jìn)特征投影 (HELP)法對獲得的GC-MS數(shù)據(jù)進(jìn)行解析[6]，得到各組分的純色譜圖和質(zhì)譜圖。根據(jù)解析所得的純質(zhì)譜圖，在質(zhì)譜庫中進(jìn)行相似性檢索，對各組分進(jìn)行定性分析，再利用總體積積分法計(jì)算得各組分的定量結(jié)果，主要組分的分析結(jié)果見表1。

值得指出的是，在色譜圖中，有些組分由于信噪比很低或質(zhì)譜庫中沒有收錄相應(yīng)的物質(zhì)而未被檢索到或相似度太低，無法進(jìn)行定性。由于已獲得純物質(zhì)質(zhì)譜，對于信噪比較高又感興趣的組分，可通過質(zhì)譜理論推斷其結(jié)構(gòu)并結(jié)合文獻(xiàn)資料找到所對應(yīng)的特征組分，做出大概的判斷。在圖1中保留時(shí)間為18.997 min、16.623 min和17.137 min都有一個(gè)色譜峰，經(jīng)HELP法解析，得到這三個(gè)組分的純質(zhì)譜圖，參見圖4、圖5、圖6。三個(gè)組分分別為反-6-乙烯基-4，5，6，7-四氫-3，6-二甲基-5-異丙烯基苯并呋喃(trans-6-ethenyl-4,5,6,7-tetra hydro-3,6-dimethyl-5-isopropenyl-Benzofuran)，巴倫亞烯(Valencene)，γ-欖香烯(γ-Elemene)。

圖5 巴倫亞烯的質(zhì)譜圖

2.2 陳皮揮發(fā)油

陳皮揮發(fā)油GC-MS檢測得總離子流圖(圖2)。同1.2.1法處理，鑒定得兩個(gè)化合物，分別為右旋檸檬烯(D-Limonene)、γ-松油烯(γ-terpinene)。 化合物的質(zhì)譜圖分別見圖7和圖8。

圖7 右旋檸檬烯的質(zhì)譜圖

圖8 γ-松油烯的質(zhì)譜圖

2.3 復(fù)方揮發(fā)油(白術(shù)和陳皮混合后提取所得揮發(fā)油)

復(fù)方揮發(fā)油GC-MS檢測得總離子流圖 (圖3)。同1.2.1法處理,鑒定出五個(gè)化合物，分別為反-6-乙烯基-4，5，6，7-四氫-3，6-二甲基-5-異丙烯基苯并呋喃 (trans-6-ethenyl-4,5,6,7-tetra hydro-3,6-dimethyl-5-isopropenyl-Benzofuran)，用A表示，巴倫亞烯(Valencene)用B表示，γ-欖香烯 (γ-Elemene),用C表示，右旋檸檬烯 (DLimonene),用 D 表示，γ-松油烯(γ-terpinene),用E表示。對各組分進(jìn)行定性分析，再利用總體積積分法計(jì)算得各組分的定量結(jié)果，部分主要組分的分析結(jié)果見表1。

表1 三種揮發(fā)油的化學(xué)成分及百分含量

3 討論

藥對白術(shù)-陳皮揮發(fā)油的主要成分與單味提取所得揮發(fā)油的總離子流比較，藥對揮發(fā)油化合物是單味藥材揮發(fā)油的加和，且以白術(shù)揮發(fā)油為主要成份，藥對主要成分中未發(fā)現(xiàn)新的結(jié)構(gòu)類型化合物，由此判斷藥對化學(xué)成分變化屬于物理的配伍變化。因此采用共水回流冷凝法提取白術(shù)、陳皮揮發(fā)油的工藝科學(xué)可行。

多次實(shí)驗(yàn)表明：當(dāng)白術(shù)和陳皮的重量、粉碎篩網(wǎng)大小、提取過程以及提取溫度等都相同時(shí)，由于混合過程兩種藥材在水溶液中的分散度不同，所以提取揮發(fā)油的量每次稍有不同，且藥對比單味藥材提取率低。同時(shí)藥材的干燥度不同，對揮發(fā)油的提取量影響較大。所以揮發(fā)油分析圖譜在定量比較上意義不大。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[7,8]，白術(shù)揮發(fā)油主要成分為蒼術(shù)酮。本次實(shí)驗(yàn)質(zhì)譜檢測結(jié)果主要成分為分子量和蒼術(shù)酮相同的反-6-乙烯基-4,5,6,7-四氫-3,6-二甲基-5-異丙烯基苯并呋喃?？赡茉蛴写谶M(jìn)一步研究。

共水回流冷凝法屬直接蒸餾方法，揮發(fā)油的收率較高，但成分也可能發(fā)生變化，尤其是復(fù)方藥物有可能發(fā)生化學(xué)反應(yīng)并有新化合物生成,通過GCMS方法測定揮發(fā)油成分,利用化學(xué)計(jì)量學(xué)解析法分辨色譜重疊峰,通過質(zhì)譜庫進(jìn)行定性,用總體積積分法進(jìn)行定量，本文研究方法可為中藥物質(zhì)基礎(chǔ)的研究提供借鑒和參考。

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