痛風(fēng)寧防治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究*

姜德友，張曉鑫，解 穎，韓潔茹，李 斗，陳 飛，常佳怡，李富震

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，哈爾濱 150040）

痛風(fēng)寧防治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究*

姜德友，張曉鑫，解 穎，韓潔茹，李 斗，陳 飛，常佳怡，李富震

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，哈爾濱 150040）

[目的]探討痛風(fēng)寧防治大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)制。[方法]將70只大鼠隨機(jī)分為7組，分別為空白組、模型組、中藥對照組、西藥對照組、痛風(fēng)寧高、中、低劑量組，每組10只，采用尿酸鈉和氧嗪酸鉀誘導(dǎo)大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型，測定大鼠關(guān)節(jié)腫脹度和大鼠血清尿酸水平。[結(jié)果]痛風(fēng)寧具有抑制大鼠足腫脹的作用，并能降低大鼠血清尿酸水平。[結(jié)論]痛風(fēng)寧對大鼠急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎有一定的防治作用，其中痛風(fēng)寧高、中劑量組作用明顯。

急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎；痛風(fēng)寧；尿酸；實(shí)驗(yàn)研究

痛風(fēng)是由于嘌呤代謝紊亂，導(dǎo)致血尿酸水平增高和尿酸排泄減少而導(dǎo)致尿酸鹽在組織沉積的疾病[1]。隨著生活水平的提高，痛風(fēng)的患病率不斷增加，急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎是痛風(fēng)最常見的表現(xiàn)形式，目前治療急性痛風(fēng)發(fā)作的藥物主要有非甾體消炎藥、秋水仙堿、糖皮質(zhì)激素等，但其不良反應(yīng)多[2]，因此中藥防治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎日益引起關(guān)注。姜德友教授總結(jié)諸位醫(yī)家及結(jié)合自身多年臨床成功經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)為腎虛是本病發(fā)生的始動因素，提出從腎論治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的學(xué)術(shù)觀點(diǎn)，自擬經(jīng)驗(yàn)方痛風(fēng)寧。本研究就痛風(fēng)寧防治急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，為該藥的臨床應(yīng)用提供依據(jù)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物 雄性Wistar大鼠70只，10周齡，體質(zhì)量（180±20）g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物研究中心提供。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑 痛風(fēng)寧是姜德友教授經(jīng)驗(yàn)方（熟地黃、澤瀉、山茱萸、懷牛膝、萆薢等），由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院制劑科提供，經(jīng)精加工成含生藥0.9g/mL的溶液。痛風(fēng)舒片由湖北綠金子藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，批號110601；秋水仙堿片由西雙版納藥業(yè)有限責(zé)任公司提供，批號20091007；氧嗪酸鉀鹽由美國Sigma公司生產(chǎn)提供，批號CAS2207-75-2；尿酸鈉結(jié)晶由美國Sigma公司生產(chǎn)提供，批號CAS1198-77-2；尿酸測定試劑盒由南京建成生物工程研究所提供，批號20101108；吐溫80由天津市富寧精細(xì)化工有限公司生產(chǎn)提供，批號101020。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 UV754紫外分光光度計(jì)由上海精密科學(xué)儀器有限公司提供；FA1104型電子天平由意大利梅特勒公司提供；恒溫水浴箱由上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司提供；高速臺式離心機(jī)由科大創(chuàng)新股份有限公司提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 溶液的制備 痛風(fēng)寧溶液的制備（煎液過濾濃縮成高、中、低各劑量組間比4∶2∶1，既實(shí)際含生藥量900、450、225mg/kg）；痛風(fēng)舒片溶液的制備（將10g痛風(fēng)舒片溶解于40mL生理鹽水中，配置成痛風(fēng)舒片溶液)；秋水仙堿溶液的制備（將5mg秋水仙堿溶解于50mL生理鹽水中，配置成秋水仙堿溶液）；氧嗪酸鉀溶液的制備（將3g氧嗪酸鉀晶體溶解于97mL生理鹽水，加熱攪拌，配置成3%氧嗪酸鉀溶液）；尿酸鈉溶液的制備（將1000mg尿酸鈉結(jié)晶加9mL生理鹽水，再加1mL吐溫80，加熱攪拌，配置成10mL尿酸鈉溶液）。

1.2.2 動物分組 將雄性大鼠70只喂養(yǎng)1周后按隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為7組：空白組、模型組、中藥對照組、西藥對照組、痛風(fēng)寧高、中、低劑量組，每組各10只。均以60 kg人為標(biāo)準(zhǔn)，按照人鼠體表面積-劑量換算法計(jì)算大鼠給藥劑量，以每100g大鼠體質(zhì)量灌胃1mL為標(biāo)準(zhǔn)?？瞻捉M和模型組分別灌胃生理鹽水，中藥對照組、西藥對照組、痛風(fēng)寧高劑量組（900mg/kg）、痛風(fēng)寧中劑量組（450mg/kg）、痛風(fēng)寧低劑量組（225mg/kg）分別給予痛風(fēng)舒片溶液、秋水仙堿溶液、痛風(fēng)寧溶液灌胃，每日1次，連續(xù)7d，末次給藥后造模。

1.2.3 造模方法[3]除空白組外均采用以下方法造模：用3%氧嗪酸鉀溶液進(jìn)行腹腔內(nèi)注射，30mL/kg，15min后用6號注射針在大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)后側(cè)插入至跟腱內(nèi)側(cè)，把0.2mL尿酸鈉溶液注入到關(guān)節(jié)腔內(nèi)。空白組只采用6號注射針在大鼠右側(cè)踝關(guān)節(jié)后側(cè)插入至跟腱內(nèi)側(cè)，把0.2mL生理鹽水注入到關(guān)節(jié)腔內(nèi)。

1.2.4 標(biāo)本采集方法 各組大鼠于造模前及造模后1、2、4、8、24h測定右踝關(guān)節(jié)容積，以造模后關(guān)節(jié)容積-造模前關(guān)節(jié)容積的差值作為關(guān)節(jié)腫脹度。各組大鼠24h后處死，心臟取血，4000 r/min，離心15min，取上清液，待測。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS18.0軟件包進(jìn)行處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，正態(tài)分布計(jì)量資料組間比較采用單因素方差分析，偏態(tài)分布計(jì)量資料組間比較采用秩和檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對尿酸鈉所致大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎血尿酸水平影響 與空白組比較，模型組大鼠血尿酸值明顯升高，說明造模成功。與模型組比較，中藥對照組大鼠血尿酸差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而西藥對照組大鼠血尿酸值均明顯偏低（P<0.01），痛風(fēng)寧高、中、低劑量組大鼠血尿酸值均明顯偏低（P<0.01），與西藥對照組比較，痛風(fēng)寧高、中、低劑量組大鼠血尿酸值均明顯偏低（P<0.01），說明痛風(fēng)寧高、中、低劑量組可降低實(shí)驗(yàn)大鼠血尿酸水平，同樣痛風(fēng)寧高、中、低劑量組之間雖差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但存在著一定的量效關(guān)系趨勢，其中痛風(fēng)寧高、中劑量組作用明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。

表1 對尿酸鈉導(dǎo)致大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎血尿酸水平的影響（±s）Tab.1 Effect on serum uric acid levels of rats with acute gouty arthritis induced by uric acid sodium（±s）

表1 對尿酸鈉導(dǎo)致大鼠痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎血尿酸水平的影響（±s）Tab.1 Effect on serum uric acid levels of rats with acute gouty arthritis induced by uric acid sodium（±s）

注：與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較，#P>0.01，##P<0.01；與西藥對照組比較，▲P<0.01。

組別空白組模型組中藥對照組西藥對照組痛風(fēng)寧高劑量組痛風(fēng)寧中劑量組痛風(fēng)寧低劑量組n 10101010101010劑量（mg/kg） 血清尿酸值（μmol/L）—105.50±4.32180.57±5.64* 190 174.28±6.79#0.1 165.20±4.96##900 152.58±4.20▲450 163.35±4.05▲225 170.20±4.05▲—

2.2 對大鼠關(guān)節(jié)腫脹度的影響 與空白組比較，模型組大鼠造模后1～2h關(guān)節(jié)明顯腫脹（P＜0．01），說明造模成功。與模型組比較，中藥對照組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度僅有降低趨勢，而西藥對照組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度均明顯降低（P＜0．01）、痛風(fēng)寧高、中、低劑量組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度均明顯降低（P＜0．01），與西藥對照組比較，痛風(fēng)寧高、中、低劑量組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度均明顯降低，說明痛風(fēng)寧高、中、低劑量組對大鼠足腫脹具有抑制作用，痛風(fēng)寧高、中、低劑量組之間雖差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但存在著一定的量效關(guān)系趨勢，其中痛風(fēng)寧高、中劑量組作用明顯。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

3 討論

在實(shí)驗(yàn)中這種模型可在一定程度上評價(jià)藥物對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的療效，能觀察藥物對血尿酸水平影響這一核心環(huán)節(jié)，能在大鼠關(guān)節(jié)腫脹度方面的指標(biāo)檢測結(jié)果中更為明顯，能用于藥物作用機(jī)制的研究，符合人體急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制與臨床表現(xiàn)。

表2 對大鼠關(guān)節(jié)腫脹度的影響（±s）Tab.2 Effect on joint swelling of rats（±s）

表2 對大鼠關(guān)節(jié)腫脹度的影響（±s）Tab.2 Effect on joint swelling of rats（±s）

注：與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較，#P<0.01。

腫脹度（mL）1h 2h 4h 8h 24h空白組 10 0.04±0.03 0.09±0.03 0.06±0.03 0.05±0.12 0.02±0.01模型組 10 — 0.55±0.05* 0.70±0.08 0.60±0.40 0.45±0.05 0.33±0.05中藥對照組 10 190 0.40±0.05 0.69±0.05 0.55±0.06 0.45±0.06 0.32±0.03西藥對照組 10 0.1 0.38±0.05# 0.45±0.05# 0.44±0.05# 0.38±0.05# 0.26±0.05#痛風(fēng)寧高劑量組 10 900 0.36±0.05# 0.44±0.05# 0.40±0.05# 0.35±0.05# 0.20±0.04#痛風(fēng)寧中劑量組 10 450 0.37±0.05# 0.43±0.05# 0.42±0.05# 0.37±0.05# 0.25±0.05#痛風(fēng)寧低劑量組 10 225 0.39±0.05# 0.50±0.05# 0.48±0.05# 0.41±0.05# 0.30±0.05#組別 n 劑量（mg/kg）—

筆者認(rèn)為急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的病因病機(jī)是以腎虛為本，水濕、痰濕、濕濁、濁毒閉阻經(jīng)脈，氣血運(yùn)行失暢痹阻關(guān)節(jié)，乃本虛標(biāo)實(shí)之證，自擬經(jīng)驗(yàn)方痛風(fēng)寧。本研究實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，痛風(fēng)寧能明顯抑制尿酸鈉所致大鼠足腫脹，并能顯著降低尿酸鈉所致急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠的血尿酸，因而對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎具有良好的防治作用，同時(shí)豐富中醫(yī)藥對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的防治理論。

[1]粟勝勇，黃錦軍，雷龍鳴，等.“通法”推拿對急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎大鼠外周疼痛介質(zhì)的影響[J].四川中醫(yī)，2010，28（9）：19-20.

[2]呂 婧，苗志敏，閻勝利，等.穿山龍治療急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的效果[J].青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，45（4）：389－391.

[3]韓潔茹，謝 穎.補(bǔ)腎利濕法防治痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎的實(shí)驗(yàn)研究[J].四川中醫(yī)，2011，29（4）：26－28．

Experiment study of Tongfengning in preventing and curing acute gouty arthritis

JIANG De-you,ZHANG Xiao-Xin,XIE Ying,HAN Jie-ru,LI Dou,CHEN Fei,CHANG Jia-yi,LI Fu-zhen
（Heilongjiang University of TCM,Heilongjiang Harbin 150040,China）

[Objective]To explore the mechanism of the preventing and curing effect of Tongfengning on acute gouty arthritis in rats.[Methods]The 70 rats were randomly divided into seven groups:the blank group,the model group,traditional Chinese medicine control group,Western medicine control group,Tongfengning high,medium and low doses groups,with 10 rats in each group.The uric acid sodium and oxygen polybenzoxazines potassium were used to induce acute gouty arthritis in rats.The joint swelling degree and serum uric acid levels in rats were determined.[Results]Tongfengning could inhibit foot swelling,reduce serum uric acid levels.[Conclusion]Tongfengning has certain preventive and therapeutic effect on acute gouty arthritis in rats.The effect of Tongfengning high dose and medium dose group is more obvious.

acute gouty arthritis;Tongfengning;uric acid;experimental study

R255.6

A

1672-1519（2012）04-0372-03

2012-05-04）

國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（81173170），黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)?；痦?xiàng)目（201107）。

姜德友（1960-），男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，博士后合作導(dǎo)師，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院院長，研究方向?yàn)榻?jīng)方治療內(nèi)科疑難雜病臨床與基礎(chǔ)研究。