分離部位對羊肚菌組織成活及菌絲生長的影響*

石建森，張鎖峰，武 旭，李 青

（山西省農(nóng)業(yè)科學院試驗研究中心，山西 太原 030006）

羊肚菌是一種野生名貴食、藥用真菌，具有較高的營養(yǎng)和藥用價值[1-4]。由于其具有較高的經(jīng)濟價值及較強的實用性,市場價格一直居高不下，導致野生資源被過度的采摘[5-7]。近20多年來,我國許多科技工作者在羊肚菌的栽培方面做了大量研究工作，雖然已有栽培成功的報道,但出菇不穩(wěn)定，產(chǎn)量低，無法達到大批量生產(chǎn)的目的[8-10,12]。由于大規(guī)模人工栽培羊肚菌未實現(xiàn)，上世紀60年代起，人們轉(zhuǎn)而大規(guī)模生產(chǎn)羊肚菌菌絲體。菌絲體的化學成分、功效與子實體幾乎等同[11]，生產(chǎn)要相對容易，因此引起了世界研究者的關注。近年來，有不少科技工作者就碳氮源、溫度、pH值、微量元素等因素對羊肚菌菌絲生長的影響做了大量相關報道[12-16]。菌絲體主要來源于野生或人工栽培羊肚菌的組織分離培養(yǎng)[17-19]，但關于羊肚菌不同分離部位菌絲生長情況的研究報道較少。本文旨在研究羊肚菌不同分離部位的組織成活率和菌絲生長的情況。

1 材料和方法

1.1 供試材料

1.1.1 羊肚菌菌株來源

本研究中的羊肚菌為尖頂羊肚菌，采集于山西省呂梁地區(qū)方山縣麻地會鄉(xiāng)陽圪臺村緊鄰的山丘上的闊葉林中。此地區(qū)四季分明、雨量充沛、溫差很大。

1.1.2 試驗培養(yǎng)基

母種培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，即土豆300 g、葡萄糖15 g、瓊脂粉 30 g、KH2PO43 g、Mg2SO41.5 g，水 1 500 mL，pH 6.5。

制作方法：將土豆煮沸20 min左右過濾取汁，加入上述配方，裝入18 mm×180 mm玻璃試管的1/4處，塞入棉塞，在120℃下高壓滅菌60 min，做成斜面培養(yǎng)基備用。

1.2 試驗方法

將新采集的羊肚菌子實體及子實體與樹根共生體放在操凈臺上，首先用酒精棉擦拭消毒,然后紫外線滅菌10 min。分別對菌蓋、菌柄菌蓋結(jié)合部位、樹根與菌絲共生部位 (以下用根部表示)3個位置進行分離，接種于PDA培養(yǎng)基斜面中部，在25℃下恒溫培養(yǎng)，定期觀察菌絲生長狀況，記錄菌絲萌發(fā)時間、長勢及成活率，每處理重復10次。

將上述獲得的羊肚菌一級試管菌種分別接種于PDA培養(yǎng)基斜面中部，在25℃下恒溫培養(yǎng)，定期觀察菌絲生長狀況，記錄菌絲密度、色澤、邊緣整齊度、長勢及生長速度，每處理重復10次。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同分離部位對組織成活的影響

羊肚菌不同分離部位對組織成活的影響見表1。

表1 羊肚菌不同分離部位對組織成活的影響

由表1可看出，組織成活率與菌絲生長勢均表現(xiàn)為蓋柄結(jié)合部位最好，其次為根菌共生部位，菌蓋處較差；根菌共生部位分離的組織菌絲萌發(fā)最快，菌蓋與蓋柄結(jié)合部位萌發(fā)時間相差不大。

2.2 不同分離部位對菌絲生長的影響

羊肚菌不同分離部位對菌絲生長的影響見表2。

表2 羊肚菌不同分離部位對菌絲生長的影響

由表2可看出，不同分離部位的菌絲萌發(fā)時間相同，菌絲形態(tài)均為短絨毛狀，菌絲均呈黃白色，但菌絲生長勢、菌絲密度、菌絲均勻度均表現(xiàn)為蓋柄結(jié)合部位最好，其次為根部，菌蓋處最差，且不同分離部位間菌絲密度差異較大。

2.3 不同分離部位對菌絲平均生長速度的影響

不同分離部位對菌絲平均生長速度的影響見圖1。

圖1 不同分離部位對二次轉(zhuǎn)管菌絲生長速度的影響

由圖1可看出，不同分離部位組織菌絲平均生長速度差異較大。表現(xiàn)為菌蓋處平均生長速度最快，滿管時間最短，蓋柄結(jié)合部位最慢，滿管時間最長。但菌絲滿管后，都有一個回菌過程，隨時間的延長，培養(yǎng)基上菌絲密度會進一步增加。

3 討論與結(jié)論

目前子實體組織分離法是羊肚菌菌種分離主要采用的方法之一，由于子實體中空且組織結(jié)構(gòu)較薄，操作要求極其精細，一般技術(shù)條件下分離的結(jié)果往往污染率較高[18,19]。本研究采用子實體組織分離法，結(jié)果表明對羊肚菌的菌蓋及蓋柄結(jié)合部位進行組織分離，組織成活率分別為20%、60%，污染率較高?，F(xiàn)階段，關于羊肚菌的地下菌絲，特別是連接羊肚菌子實體的土壤菌絲與來源于子實體組織分離的菌絲間是否存在差異的研究鮮有報道。黃保敬[19]研究表明采用帶羊肚菌菌絲團的土壤進行羊肚菌菌種分離是可行的，且此方法相對于采用子實體進行組織分離和孢子分離具有明顯的優(yōu)點。本研究通過對樹根與菌絲共生部位 (根部)菌索進行菌種分離，組織成活率達到40%，符合黃保敬的研究結(jié)果。本研究還表明，從樹根與菌絲共生部位分離的菌種菌絲萌發(fā)最早，但菌絲長勢不如蓋柄結(jié)合部位，其原因有待進一步研究。本研究中組成成活率最低的為菌蓋分離部位，與王廣耀[20]等的研究結(jié)果一致。

侯志江[21]等在關于不同濃度草木灰對尖頂羊肚菌菌絲生長影響的試驗研究中，羊肚菌的菌絲呈白色、黃色和黃褐色，菌絲形態(tài)為絲狀或絨絮狀。本研究中，羊肚菌菌絲的色澤與形態(tài)同前人研究結(jié)果一致。本研究結(jié)果還表明，菌絲生長勢、密度及均勻度均表現(xiàn)為蓋柄結(jié)合部位最優(yōu)，其次為根部，菌蓋部位最差；菌絲平均生長速度表現(xiàn)為菌蓋部位＞根部＞蓋柄結(jié)合部位，菌絲滿管時間表現(xiàn)為菌蓋部位＜根部＜蓋柄結(jié)合部位，這可能與菌絲的均勻度和菌絲的密度有關。

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