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    鎘脅迫下的桑樹幼苗葉片丙二醛含量動態(tài)分析

    2012-09-02 07:38:52覃勇榮馮濟梅梁文忠李秋明劉旭輝
    河池學院學報 2012年2期
    關鍵詞:桑苗金屬鎘丙二醛

    覃勇榮,馮濟梅,梁文忠,李秋明,劉旭輝

    (河池學院化學與生命科學系,廣西宜州546300)

    鎘脅迫下的桑樹幼苗葉片丙二醛含量動態(tài)分析

    覃勇榮,馮濟梅,梁文忠,李秋明,劉旭輝

    (河池學院化學與生命科學系,廣西宜州546300)

    采用水培試驗方法,分別研究了不同濃度重金屬鎘脅迫背景下,添加或不添加EDTA處理的桑苗葉片丙二醛含量45 d的動態(tài)變化。實驗結果表明:(1)桑苗葉片的丙二醛含量與鎘濃度有關,在21 d~27 d內,丙二醛含量呈波動上升趨勢,之后呈波動下降趨勢;(2)與不添加EDTA的對照組比較,加入EDTA處理的桑苗葉片丙二醛含量波動比較平緩,隨鎘脅迫時間的增加,其葉片中的丙二醛含量緩慢增加;(3)低濃度的鎘離子對桑苗生長有一定的促進作用,但濃度較高時會對其造成一定的傷害,使其生長受到抑制,葉片變黃,萎蔫,甚至死亡;(4) EDTA能適當緩解鎘離子對桑苗的傷害。

    桑樹幼苗;重金屬;鎘脅迫;丙二醛含量

    廣西礦產(chǎn)資源豐富,享有“有色金屬之鄉(xiāng)”的美譽。過去,由于資金缺乏或者技術落后,礦業(yè)開發(fā)不可避免地對周邊環(huán)境造成一定的影響。近年來,隨著東桑西移及農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結構的調整,廣西已成為我國重要的桑蠶種養(yǎng)基地。但是,礦區(qū)及其周邊環(huán)境重金屬污染的風險依然存在。殘留于土壤中的重金屬元素可參與到水體—土壤—生物的系統(tǒng)循環(huán),也可以通過植物的吸收或動物的取食進入食物鏈,從而影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)系統(tǒng)的安全[1-3]。所以,篩選抗性強、適應性廣的高產(chǎn)優(yōu)質桑樹品種,對廣西桑蠶產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展具有重要意義[4]。

    鎘是一種有毒的重金屬,也是自然界的一種主要污染源,鎘脅迫嚴重影響植物的生長發(fā)育,降低作物的產(chǎn)量和質量[5]。研究表明,高濃度的鎘能誘導過量活性氧的產(chǎn)生,破壞細胞的氧化還原狀態(tài)和細胞膜的穩(wěn)定性,干擾細胞的正常代謝[6],鎘在土壤中的高毒性更令人擔憂[7]。

    螯合劑對金屬離子有很強的螯合能力,能增大土壤中重金屬的溶解度,促進重金屬在植物地上部的積累。近年來,利用螯合劑輔助植物提取的技術(Chelate-assistedphyto-extraction)備受青睞。陳亞華等人研究發(fā)現(xiàn),游離態(tài)的Pb或EDTA對幼苗具有毒害作用,而螯合態(tài)的Pb-EDTA基本不具有生物毒性[8,9]??梢?,在適當濃度的EDTA作用下,重金屬對植物的生理脅迫可能會有一定程度的緩解。因為植物對重金屬脅迫有一定的耐性,同時也會產(chǎn)生一定的抗逆性。所以,了解植物對重金屬脅迫的抗逆機理、耐受重金屬的濃度范圍及產(chǎn)生適應性所需時間,可以在重金屬污染的土壤篩選合適的修復植物,或者種植耐性較強、經(jīng)濟價值較高的作物,充分利用有限的土地資源,發(fā)揮最大的生態(tài)經(jīng)濟效益。

    關于重金屬污染對植物影響的相關研究,大多集中在探討植物對重金屬的吸收、轉運、累積,以及重金屬對植物光合作用和呼吸作用的影響等方面。關于鎘對小麥、玉米等作物生長發(fā)育及其生理生化影響的研究相對較多[10-12],而關于重金屬對桑蠶的生長、產(chǎn)量及毒性機理等方面的研究報道甚少,關于鎘等重金屬對廣西桑蠶產(chǎn)業(yè)影響的研究亦鮮有報道[13]。以桑樹幼苗為實驗材料,采用水培方法,模擬不同濃度的重金屬鎘脅迫,采取添加或者不添加螯合劑EDTA兩種不同的處理方式,分析不同濃度重金屬鎘脅迫背景下,桑樹幼苗葉片MDA含量隨時間動態(tài)變化的特征,可以了解桑樹幼苗的受害過程及機理,為減輕鎘等重金屬對桑樹的危害,提高桑蠶及相關產(chǎn)業(yè)的經(jīng)濟效益提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實驗材料

    本研究的實驗材料——桑樹幼苗品種為特優(yōu)二號,苗齡45d,由廣西宜州市城南廣場桑苗批發(fā)部提供,均未受到有害物質的污染。

    1.2 儀器與試劑

    實驗儀器:AL204型電子分析天平(梅特勒—托科多儀器上海有限公司);80-2型臺式電動離心機(常州國華電器有限公司);CFA-160型微電腦光波電熱爐(茂名市恒聲電器有限公司);722N型可見分光光度計(上海精密科學儀器有限公司);101-2-BS型臺式恒溫干燥箱(上海躍進醫(yī)療器械廠);UV-1800型紫外-可見分光光度計(上海:島津國際貿易有限公司);艾柯DZG-303A型純水儀(臺灣艾柯成都康寧試驗專用純水設備廠);華燁HYP-1040型四十孔消化爐﹙上海纖檢儀器有限公司﹚;pHS-3C型pH計(上海精密科學儀器有限公司);FZ-102型微型植物樣品粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)。

    主要試劑:Cd(NO3)2、EDTA、Ca(NO3)2、ZnSO4、KNO3、(NH4)3PO4、MgSO4、Fe3+、微量元素。鎘標準液、二甲酚橙、六亞甲基四胺、無水乙醇、乳化劑OP、磷酸二氫鈉、硼砂、三氯乙酸(trichloroacetic acid,TCA)、2-硫代巴比妥酸(2-thiobarbituric acid,TBA)。

    以上試劑除2-硫代巴比妥酸(C4H4N2O2S)為生化試劑(BR)外,均為分析純(AR),實驗用水為去離子水。

    1.3 實驗方案

    1.3.1 材料處理

    選擇外觀大小、規(guī)格基本一致的健壯桑苗,先用清水把根部的泥沙洗滌干凈,然后用KMnO4溶液浸泡10min,再用去離子水清洗干凈,備用。

    1.3.2 水培試驗

    用盆栽模擬法[14],以4L/盆Hoagland營養(yǎng)液作為培養(yǎng)液,設不同Cd2+濃度處理,以不添加EDTA的桑樹幼苗水培試驗作對照。因為高濃度的重金屬離子脅迫很快會使桑苗死亡,所以,根據(jù)筆者前期進行的預備實驗結果并參考有關文獻,水培液中的Cd2+濃度分別設為0、2.5、5.0、10.0、25.0、50.0、100.0、150.0、200.0、250.0mg/L,EDTA的濃度均為0.55mmol/L。重金屬Cd2+用Cd(NO3)2配制,Cd2+濃度以純金屬離子計算[15,16]。加入重金屬Cd2+后,以3d為一個時間間隔,分別取樣測定桑樹幼苗基部葉片的丙二醛含量。培養(yǎng)幼苗時,每種不同的實驗處理均設三個重復,以保證樣品測試時材料的供應和數(shù)據(jù)的可靠性。

    1.3.3 丙二醛及鎘含量的測定

    (1)丙二醛含量的測定用硫代巴比妥酸法[17]。

    (2)鎘含量的測定用HNO4-HClO4消化,二甲酚橙分光光度法[18],實驗材料為培養(yǎng)45d的桑樹幼苗。

    1.3.4 數(shù)據(jù)處理

    數(shù)據(jù)處理用Microsoft Excel 2003和SPSS18.0軟件進行,每個樣品均做三個平行測定,結果取平均值。利用單因子方差分析(one-way ANOVA)和最小顯著差數(shù)法(LSD),對不同樣品的測定數(shù)據(jù)進行比較和差異顯著性檢驗。

    2 結果與分析

    2.1 不同濃度的Cd2+對桑樹幼苗葉片丙二醛含量的影響

    圖1為水培液中不添加EDTA時,桑樹幼苗在各種不同濃度Cd2+脅迫的情況下,其葉片丙二醛含量的測定結果。由圖1可看出,隨著Cd2+濃度的升高,丙二醛含量呈上升趨勢。加重金屬鎘6d后,丙二醛含量明顯低于3d后的含量,可能是桑樹幼苗對重金屬鎘脅迫產(chǎn)生生理抗逆性的結果。在加入Cd2+后的21~27d時間內,大部分桑樹幼苗葉片的丙二醛含量呈逐漸上升趨勢,之后變化較平緩,說明桑苗在經(jīng)歷重金屬鎘脅迫一段時間后,有了一定的有適應性。加入Cd2+濃度為250、200、150、100、50mg/L脅迫處理的桑苗,分別在第12d、30d、30d、30d、36d摘不到葉子,說明隨著重金屬離子濃度的增高,鎘對桑樹幼苗的生長產(chǎn)生了明顯的抑制作用。通過每天的觀察記錄得知:隨著Cd2+濃度提高和時間的推移,桑樹幼苗葉片褪綠、變黃、枯槁及萎蔫的現(xiàn)象越明顯,因此也越難長成葉子,甚至一些幼苗逐漸出現(xiàn)死亡癥狀。從桑樹幼苗丙二醛含量的分析結果來推斷,低濃度的Cd2+可能對桑樹幼苗的生長有一定的促進作用,但高濃度的Cd2+對桑樹幼苗生長卻能產(chǎn)生明顯的毒害作用。

    圖1 不同濃度的Cd2+對桑樹幼苗葉片丙二醛含量的影響

    2.2 EDTA對鎘脅迫下的桑樹幼苗葉片丙二醛含量的影響

    圖2為水培液中添加EDTA時,桑樹幼苗在各種不同濃度Cd2+脅迫下,其葉片丙二醛含量的測定結果。由圖2可看出,加入EDTA的桑樹幼苗在重金屬Cd2+的脅迫下,隨著時間的推移,其葉片中的丙二醛含量稍有上升。通過對圖1和圖2的比較可知,前者丙二醛含量大多為0.015μmol/g左右,而后者的丙二醛含量則大多在0.015μmol/g之下??瞻讓φ战M與單獨加EDTA的實驗處理組相比,加EDTA處理組的丙二醛含量明顯高于空白對照組。

    圖2 EDTA對鎘脅迫下的桑樹幼苗葉片丙二醛含量的影響

    2.3 桑樹幼苗葉片丙二醛含量與其體內Cd2+含量的關系分析

    圖3為不添加EDTA水培45d,桑苗葉片丙二醛含量與桑苗中鎘含量的比較??梢姡溆酌绲逆k含量隨著培養(yǎng)液中的Cd2+濃度增大而逐漸升高,丙二醛含量與桑樹幼苗吸收的鎘成正相關(r=0.83,p<0.01)。當培養(yǎng)液中Cd2+為250mg/L時,隨著桑樹幼苗對鎘離子吸收的增加,MDA含量卻明顯下降,其原因有待研究。

    圖3 桑苗葉片丙二醛含量與桑苗吸收Cd2+的情況比較

    2.4 EDTA處理對桑苗葉片丙二醛含量及其體內Cd2+含量的關系分析

    圖4為添加EDTA水培45d,桑苗葉片丙二醛含量與桑樹幼苗中鎘含量的比較。值得注意的是,在培養(yǎng)液中的Cd2+濃度為200mg/L時,桑苗對鎘離子吸收量最大(此時其桑苗葉片中的丙二醛的含量也達到一個峰值),說明桑樹幼苗對重金屬鎘的吸收是一個十分復雜的過程,許多問題尚有待進一步研究。

    圖4 添加EDTA處理對桑苗葉片丙二醛含量及其體內吸收Cd2+的影響

    3 討論

    植物生理生化研究結果表明,植物細胞損傷過程中,生物膜的破壞是由細胞產(chǎn)生的超氧自由基誘導脂質中的不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化作用造成的[19]。丙二醛的積累來自不飽和脂肪酸的降解,它的生成是植物體內自由基引發(fā)而產(chǎn)生的,丙二醛的積累能夠反映植物體內自由基的活動狀態(tài)[20]。因此,在植物逆境生理研究中,丙二醛被普遍地作為一種表示傷害的指標。在本試驗中,在重金屬鎘脅迫下,隨著水培液中的Cd2+濃度升高,桑樹幼苗葉片細胞損傷程度增加,丙二醛含量增多。高濃度的Cd2+脅迫,桑苗受害嚴重,甚至死亡。本實驗的結果與鄭世英、鄭愛珍等相關研究的結果相一致[21,22]。由本試驗結果可知,單獨加EDTA對植物細胞也有一定損害。在重金屬離子存在的情況下,加入EDTA能促進了桑苗對鎘的吸收,鎘與EDTA螯合,可降低其對桑樹幼苗的毒害作用,這與陳亞華等對螯合態(tài)的Pb-EDTA作用于油菜幼苗的結果相似[8,24]。一般情況下,植物吸收的重金屬主要積累在根部,然而這種現(xiàn)狀也會受到重金屬濃度的限制,隨著重金屬處理濃度的升高,重金屬離子在其體內積累量逐漸增加,從而對植物的毒害作用加劇,重金屬脅迫使植物細胞內產(chǎn)生活性氧自由基超過保護酶系統(tǒng)的清除能力時,就會導致自由基在葉細胞內的大量積累,從而誘導對植物細胞的過氧化傷害[23]。這也表明重金屬脅迫條件下,植物體內活性氧清除系統(tǒng)對植物細胞的保護作用是有限度的。本研究發(fā)現(xiàn),桑樹幼苗對重金屬Cd2+具有一定的耐性,在桑苗培養(yǎng)的過程中,在一定的濃度范圍內,桑樹幼苗能夠耐受脅迫,生長良好,很少死苗現(xiàn)象。至于桑樹幼苗對其他重金屬離子脅迫的抗逆機理,以及EDTA對其他重金屬毒害是否也有降解作用,目前還不甚明了,有待進一步研究。

    4 結論

    根據(jù)實驗研究結果及以上分析討論,可以初步得到以下結論:

    (1)桑樹幼苗對重金屬鎘具有一定的耐性。但是,在Cd2+的脅迫下,桑樹幼苗細胞膜受損,丙二醛含量升高。(2)低濃度的Cd2+對桑樹幼苗生長有一定的促進作用,但Cd2+濃度大于50mg/L時,對桑苗生長有毒害作用。(3)桑樹幼苗對Cd2+的吸收是一個復雜的過程,其葉片中的丙二醛含量及體內的Cd含量并非與水培液中的Cd2+濃度成正相關,但是,其葉片中的丙二醛含量與莖葉中的鎘含量成正相關。(4)EDTA促進了桑苗對Cd2+的吸收,對緩解重金屬鎘的毒害具有一定的作用。

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    [責任編輯劉景平]

    Dynam ic Analysis of Malondialdehyde Content inMorus AlbaSeed ling Leaves Under Cd2+Stress

    QIN Yong-rong,F(xiàn)ENG Ji-mei,LIANG W en-zhong,LIQiu-m ing,LIU Xu-h(huán)ui
    (Department of Chem istry and Life Science,Hechi University,Yizhou,Guangxi546300,China)

    By water-implantation experiment,different concentrations of Cd2+are added to the nutrient solution respectively.In each solution of one group,treatmentwith 0.55 mmol/L EDTA is compared to the other groups untreated with EDTA.The dynamic changes ofmalondialdehyde(MDA)content in theMorusalbaleaves for 45 days are investigated.The results show that:(1)there are some relationship between MDA contents inMorusalbaleaves and Cd2+concentration in the solution.During the period of21 to 27days,MDA contentof the leaves has a rising trend of fluctuation at first,and then declines in a fluctuating state;(2)Compared with the groups untreated with EDTA,MDA content in the leaves not only remains at a relative stable level,but also increases gradually with time prolonging;(3)When Cd2+concentration is ata lower level,itwill promote the growth ofMorus albaseedling,butwhen Cd2+concentration is at a higher level,such poisonous effects will happen,that is,the growth of the seeding will be inhibited,and the leaves of seedingswill turn yellow or wither;(4)EDTA can alleviate Cd2+poisonous effects onMorusalbaseedlings.

    Morusalbaseedling;heavymetal;Cd2+stress;malondialdehyde content

    book=0,ebook=51

    X53

    A

    1672-9021(2012)02-0017-06

    覃勇榮(1963-),男,廣西平南人,河池學院化學與生命科學系教授,主要研究方向:高校生物學教學,巖溶地區(qū)生態(tài)修復。

    廣西高校重點建設學科基金資助項目(桂教科研〔2007〕20號);廣西高校重點實驗室基金資助項目(桂教科研〔2010〕6號);廣西高等學校特色課程及專業(yè)一體化建設基金資助項目(桂教高教〔2011〕102號)。

    2012-03-11

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