注射用硫酸鏈霉素細(xì)菌內(nèi)毒素檢查限值的研究

劉雪莉，袁坤，張敏（.河北省藥品檢驗所，石家莊0500；.石家莊市中醫(yī)院，石家莊05005）

注射用硫酸鏈霉素是一種對結(jié)核分支桿菌有強大抗菌作用的氨基糖苷類抗生素，《國家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥說明書內(nèi)容匯編》[1]對本品明確要求：“成人治療細(xì)菌性心內(nèi)膜炎，每12小時1 g，與青霉素合用；小兒治療結(jié)核病，按體重20 mg·kg－1，一日1次，與其他抗結(jié)核藥合用”，其細(xì)菌內(nèi)毒素理論限值計算按成人計：L＝K/M＝5 EU·kg－1·h－1/（1 000 mg·h－1/60 kg）＝0.3 EU·mg－1，按小兒計：L＝K/M＝5 EU·kg－1·h－1/20 mg·kg－1·h－1＝0.25 EU·mg－1。但考慮到無論是成人還是小兒用法中都提及該藥與其他藥品的聯(lián)合使用，故本品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查限值應(yīng)遠(yuǎn)小于理論限值?！盎瘜W(xué)藥品注射劑安全性檢查法應(yīng)用指導(dǎo)原則”[2]要求細(xì)菌內(nèi)毒素檢查設(shè)定限值“可適當(dāng)嚴(yán)格，至計算值的1/3至1/2，以保證安全用藥”。2010年版《中國藥典》規(guī)定每1 mg鏈霉素中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.25 EU[2]，選取了理論限值，筆者認(rèn)為該規(guī)定未考慮臨床使用中的聯(lián)合用藥，限值設(shè)定未“適當(dāng)嚴(yán)格”，不能保證用藥安全。2000年版《日本抗生物質(zhì)醫(yī)藥品基準(zhǔn)解說》規(guī)定每1 mg鏈霉素中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.10 EU[3]，介于計算值的1/3至1/2，可保證用藥安全。本試驗參考有關(guān)文獻(xiàn)[4]，對注射用硫酸鏈霉素進(jìn)行了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查限值提高至0.10 EU的可行性研究。

1 材料

注射用硫酸鏈霉素（編號①：華北制藥股份有限公司，批號：1001101；編號②：瑞陽制藥有限公司，批號：10022101；編號③：山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司，批號：091107；編號④：深圳華藥南方制藥有限公司，批號：N080407；編號⑤：大連美羅大藥廠，批號：65081016；編號⑥：遼寧倍奇藥業(yè)有限公司，批號：090214；“驗證檢查”所抽檢的另外37批：華北制藥股份有限公司（批號：080102、081001、0901101、0905102、0910103、0911107、1002103、1004101），瑞陽制藥有限公司（批號：08110601、08122601、08122701、09080201、09090301、09090601、10020801、10030401），山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司（批號：080116、080602、081205、090903、091207、100104、100301、100313），深圳華藥南方制藥有限公司（批號：N080719、N081012、N090803、N090806、N091114、N091203、N100101、N100103），大連美羅大藥廠（批號：6509308、65080723、65090704、65090801、65091101），所有藥品規(guī)格均為每支1 g）；鱟試劑（TAL1，湛江博康海洋生物有限公司，批號：1007080，規(guī)格：每支0.1 mL，靈敏度（λ）＝0.25 EU·mL－1；TAL2，湛江安度斯生物有限公司，批號：1008231，規(guī)格：每支0.1 mL，λ＝0.25 EU·mL－1）；細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（CSE，中國食品藥品檢定研究院，批號：150601-201069，規(guī)格：每支120 EU）；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET水，湛江博康海洋生物有限公司，批號：1005040，規(guī)格：每瓶50 mL）。

2 方法與結(jié)果

2.1 TAL靈敏度復(fù)核試驗

按2010年版《中國藥典》（二部）附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法[2]進(jìn)行試驗，所用TAL靈敏度均在0.5λ～2.0λ范圍內(nèi)，符合規(guī)定，結(jié)果見表1（注：以下各表中“+”表示TAL安瓿從恒溫箱中輕輕取出，緩緩倒轉(zhuǎn)180°，所形成凝膠不變形，不滑脫；“-”表示未形成凝膠或凝膠不堅實，變形并滑脫）

表1 TAL靈敏度復(fù)核試驗結(jié)果Tab 1 Test for confirmation of TALsensitivity

2.2 供試品有效稀釋濃度計算

參考2000年版《日本抗生物質(zhì)醫(yī)藥品基準(zhǔn)解說》[3]，注射用硫酸鏈霉素細(xì)菌內(nèi)毒素檢查限值為0.10 EU·mg－1，則最低有效濃度為λ/L＝0.25 EU·mL－1/0.10 EU·mg－1＝2.5 mg·mL－1。

2.3 供試品干擾預(yù)試驗

將3個廠家3批注射用硫酸鏈霉素（編號①、②、③）按下表濃度稀釋成供試品管（NPC：只含相應(yīng)濃度的供試品），供試品陽性對照管（PPC：含有相應(yīng)濃度的供試品與2λ濃度的CSE）。取TAL1、TAL2，分別與上述NPC和PPC進(jìn)行反應(yīng)，每個濃度平行做2支，另分別做陰性對照管（NC：只加入BET水）與陽性對照管（PC：加入2λ濃度的CSE）各2支，于（37±1）℃保溫（60±2）min。結(jié)果表明，注射用硫酸鏈霉素20 mg·mL－1濃度對TAL1、TAL2均有干擾作用，10 mg·mL－1及其以下濃度對2個廠家TAL均無干擾作用，詳見表2。

2.4 供試品干擾確證試驗

根據(jù)預(yù)試驗，將編號①、②、③3批供試品稀釋為20、5 mg·mL－12個濃度進(jìn)行干擾確證試驗，結(jié)果見表3。

表3 干擾確證試驗結(jié)果Tab 3 Results of interference test

表3結(jié)果表明，3批供試品濃度為20 mg·mL－1時，對TAL2均表現(xiàn)為干擾作用；3批供試品濃度為5 mg·mL－1時，Et均在0.5Es～2Es之間，對TAL無干擾作用。

2.5 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

分別取6個廠家不同批號樣品6批（供試品編號①至⑥），將其稀釋至2.5 mg·mL－1（即最低有效稀釋濃度），以靈敏度0.25 EU·mL－1的TAL1，按2010年版《中國藥典》（二部）附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，以檢查限值為0.10 EU·mg－1進(jìn)行檢測，結(jié)果6批樣品均符合規(guī)定，詳見表4。

表4 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果Tab 4 Results of bacterial endotoxins test for samples

2.6 驗證檢查

由于不同原料及生產(chǎn)工藝對產(chǎn)品細(xì)菌內(nèi)毒素質(zhì)量控制存在影響，為進(jìn)一步確認(rèn)提高后的標(biāo)準(zhǔn)是否使得各廠家生產(chǎn)的大部分產(chǎn)品都符合規(guī)定，筆者抽查檢驗了全國的5個廠家生產(chǎn)的其他37批樣品，按提高后的標(biāo)準(zhǔn)“每1 mg鏈霉素中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.10 EU”進(jìn)行檢查，結(jié)果樣品均合格。

3 討論

以上試驗表明，注射用硫酸鏈霉素細(xì)菌內(nèi)毒素檢查標(biāo)準(zhǔn)提高至2000年版《日本抗生物質(zhì)醫(yī)藥品基準(zhǔn)解說》規(guī)定的“每1 mg鏈霉素中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.10 EU”[3]是可行的。

沿用《中國藥典》的表述習(xí)慣，注射用硫酸鏈霉素細(xì)菌內(nèi)毒素檢查限值可提高為：取本品，依法檢查（《中國藥典》2010年版二部附錄ⅪE），每1 mg鏈霉素中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.10 EU。

提高后的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查限值與國際標(biāo)準(zhǔn)接軌，能夠更好地控制藥品質(zhì)量，為2015年版《中國藥典》對本品細(xì)菌內(nèi)毒素的規(guī)定提供了有力的研究資料。

[1]統(tǒng)一藥品說明書及批準(zhǔn)文號專項工作小組.國家藥品標(biāo)準(zhǔn)化學(xué)藥說明書內(nèi)容匯編[S].第6冊.2002：6-161.

[2]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：999、附錄99、附錄213.

[3]日本抗生物質(zhì)學(xué)術(shù)協(xié)議會.日本抗生物質(zhì)醫(yī)藥品基準(zhǔn)解說[S].2000年版.東京：時報株式會社，2000：Ⅱ-17.

[4]中國藥品生物制品檢定所，中國藥品檢驗總所.中國藥品檢驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：310.