紫外分光光度法測(cè)定維A酸軟膏的含量

吳 畏，陳 雅，楊 征，曾 橋

(中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院藥劑科，重慶 400042)

維A酸軟膏為醫(yī)院自制制劑，可減少皮脂腺分泌，溶解毛囊角質(zhì)栓，并具有抗炎和促進(jìn)抗真菌藥物吸收的作用，用于治療各種類型的扁平苔蘚、毛囊角化病、痤瘡以及其他角化異常類皮膚病，療效顯著，應(yīng)用廣泛[1]。目前，其含量測(cè)定大多采用較煩瑣的高效液相色譜法[2－3]，極少數(shù)采用薄層掃描法[4]。本試驗(yàn)建立紫外分光光度法測(cè)定維A酸軟膏的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

玻璃點(diǎn)樣毛細(xì)管(華西醫(yī)科大學(xué)儀器廠);硅膠板GF254(青島海洋化工廠，批號(hào)為20100317);ZF－I型三用紫外分析儀(上海顧材電光儀器廠);分度吸量管A級(jí)(三慶玻璃儀器廠);單標(biāo)線棕色容量瓶A級(jí)(北京玻璃儀器廠);Sartorius－BS 124 S型電子天平(德國(guó)賽多利斯);DU－800型分光光度儀(美國(guó)貝克曼)。維A酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為00307－200201);維A酸(東北制藥集團(tuán)股份有限公司，批號(hào)為20101107);液體石蠟藥用級(jí)(吉林市吉化江城油脂化工有限責(zé)任公司，批號(hào)為100904);凡士林藥用級(jí)(包頭昆侖石化有限責(zé)任公司，批號(hào)為090714);0.1%維A酸軟膏(醫(yī)院自制制劑，批號(hào)分別為110627，110722，110818);環(huán)己烷(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)為T20080521);乙醚(揚(yáng)州三和化工有限公司，批號(hào)為20080304);丙酮(重慶川東化工有限公司化學(xué)試劑廠，批號(hào)為20100901);冰醋酸(重慶茂業(yè)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)為 20100602);甲醇(成都科龍化工試劑廠，批號(hào)為20110108)。

2 方法與結(jié)果

2.1 制備

取維A酸1 g，加液體石蠟1 mL研磨成極細(xì)糊狀，再分次加入凡士林研勻，至1000 g，得淡黃色軟膏。

2.2 鑒別[5]

取本品適量(相當(dāng)于維A酸1.25 mg)，加25 mL甲醇，微溫，充分?jǐn)嚢枋咕SA酸溶解，放冷至室溫，傾出甲醇液，置水浴上蒸發(fā)至約剩5 mL，作為供試品溶液。另取維A酸對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含0.25 mg的溶液作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷－乙醚－丙酮－冰醋酸(54∶40∶4∶2)為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，置紫外燈(254 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。

2.3 含量測(cè)定

2.3.1 溶液制備

精密稱取維A酸對(duì)照品0.0010 g，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解后定容，再精密量取1 mL溶液用甲醇稀釋至25 mL得到質(zhì)量濃度為4μg/mL的溶液，作為對(duì)照品溶液，待用。另取維A酸軟膏樣品適量(相當(dāng)于維A酸1.25 mg)，加入25 mL甲醇，微溫，充分?jǐn)嚢枋咕SA酸溶解，放冷至室溫，傾出甲醇溶液，吸取1 mL，置25 mL棕色容量瓶中甲醇定容，作為供試品溶液待用。另照0.1%維A酸軟膏處方比例稱取凡士林1.4577 g，液體石蠟0.0262 g加入10 mL甲醇，微溫溶解后加入甲醇定容至50 mL，冷卻至室溫，過(guò)濾后作為空白基質(zhì)溶液待用。

2.3.2 檢測(cè)波長(zhǎng)確定

以甲醇作空白，分別將2.3.1項(xiàng)下3種溶液在200～500 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，光譜圖見(jiàn)圖1?？梢?jiàn)，對(duì)照品溶液和供試品溶液在338 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，空白基質(zhì)溶液在此波長(zhǎng)處幾乎無(wú)吸收，對(duì)樣品中維A酸的含量測(cè)定基本無(wú)干擾，因此將338 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

圖1 紫外吸收光譜圖

2.3.3 方法學(xué)考察

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:精密稱定維A酸對(duì)照品0.0010 g，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解定容，再用5 mL移液管準(zhǔn)確吸取5 mL溶液，置50 mL棕色容量瓶中用甲醇稀釋至刻度即得到質(zhì)量濃度為10μg/mL的對(duì)照品貯備液。將上述貯備液用同一吸量管(10 mL)分別吸取 1.5，2.5，3.5，4.5，5.5 mL，置 10 mL 棕色容量瓶中，甲醇定容，搖勻即得到質(zhì)量濃度分別為 1.5，2.5，3.5，4.5，5.5μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以甲醇作為空白，分別將上述標(biāo)準(zhǔn)溶液由低質(zhì)量濃度到高質(zhì)量濃度在338 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以338 nm處吸光度(A)與質(zhì)量濃度(C)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程 C=6.7033 A+0.0411，r=0.9999(n=5)。結(jié)果表明，維 A 酸質(zhì)量濃度在 1.5 ～5.5μg/mL范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密量取同一對(duì)照品貯備液(10μg/mL)2.0 mL，置10 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，在338 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。結(jié)果RSD 為 0.37%(n=5)。

穩(wěn)定性試驗(yàn):稱取0.1%維A酸軟膏約0.12 g，置25 mL燒杯中，加入10 mL甲醇，微溫溶解，濾紙過(guò)濾，重復(fù)溶解過(guò)濾過(guò)程2次，合并濾液于50 mL棕色容量瓶中，甲醇定容后室溫放置，在338 nm波長(zhǎng)處，分別于 0，1，2，3，4 h 時(shí)測(cè)定吸光度。結(jié)果的 RSD 為0.73%(n=5)，表明供試品溶液在4 h內(nèi)穩(wěn)定。

加樣回收試驗(yàn):按照0.1%維A酸軟膏處方比例，精密稱取維A酸原料0.9 mg和軟膏基質(zhì)(凡士林 0.4577 g、液體石蠟0.0262 g)，模擬處方于25 mL燒杯中配制成軟膏樣品。向樣品中加入10 mL甲醇，微溫溶解后用濾紙過(guò)濾，重復(fù)上述操作2次，濾液合并于50 mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至50 mL，搖勻即得到維A酸質(zhì)量濃度為18μg/mL的供試品溶液。精密量取1，2，3 mL供試品溶液各3份，置10 mL棕色容量瓶中，甲醇定容后在338 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，將吸光度代入回歸方程計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 維A酸軟膏加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.3.4 樣品含量測(cè)定

取 3 個(gè)批次的樣品，精密稱定樣品 0.1501，0.1504，0.1503 g，分成3組，分別置25 mL燒杯中，加入10 mL甲醇，微溫溶解，濾紙過(guò)濾，重復(fù)上述操作，合并濾液，置50 mL棕色容量瓶中，甲醇定容，在338 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，結(jié)果含量分別為標(biāo)示量的98.52%，99.02% ，98.12%。

3 討論

采用紫外分光光度法測(cè)定維A酸軟膏的含量，操作簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，所用儀器普及。與高效液相色譜法相比，雖不及其選擇性和準(zhǔn)確性高，但操作簡(jiǎn)便、快速，不需特殊試劑，具有省時(shí)、省力、經(jīng)濟(jì)實(shí)效等優(yōu)點(diǎn)，適用于醫(yī)院制劑的快速檢驗(yàn)。

維A酸結(jié)構(gòu)為全反式維A酸，有5個(gè)共軛雙鍵，易氧化或者光解，因此在整個(gè)操作過(guò)程取樣要快，且應(yīng)該嚴(yán)格避光。維A酸對(duì)光不穩(wěn)定，在不避光條件下，1 h含量下降13%，若置棕色瓶中則為3.5%，置棕色瓶中且外罩黑布時(shí)6 h內(nèi)穩(wěn)定[6－7]。本試驗(yàn)中經(jīng)考察也發(fā)現(xiàn)，維A酸軟膏的甲醇溶液置棕色瓶中室溫下放置，4 h內(nèi)吸光度值基本無(wú)變化，不影響其測(cè)定。

維A酸在甲醇、氯仿中微溶，在水中幾乎不溶，在異丙醇中溶解較好。因此在配制供試品溶液時(shí)，可以先用異丙醇溶解后再用甲醇稀釋至定量，或用甲醇溶解時(shí)加用超聲波加速溶解。

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