• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    脂肪組織工程支架材料的研究進(jìn)展

    2012-04-29 12:47:40王剛劉毅
    中國美容醫(yī)學(xué) 2012年17期
    關(guān)鍵詞:絲素脂肪組織膠原蛋白

    王剛 劉毅

    組織工程的核心是建立由種子細(xì)胞和生物材料支架構(gòu)成的三維空間結(jié)構(gòu)復(fù)合體,生物材料是組織工程發(fā)展的關(guān)鍵,隨著材料科學(xué)、化學(xué)和生物學(xué)的發(fā)展,各種適合細(xì)胞生長、繁殖和分化的天然和合成的可降解材料被用來制作組織工程支架。要成功構(gòu)建工程化的脂肪組織,選擇適當(dāng)?shù)闹Ъ懿牧鲜潜夭豢缮俚?。支架材料為種子細(xì)胞提供貼服場所,而且決定最終構(gòu)建的脂肪組織形狀,因此,支架材料的理化特性是需要考慮的非常重要的因素。本文就脂肪組織工程支架材料的研究進(jìn)展做一綜述。

    1 概述

    脂肪組織工程旨在把獲得的種子細(xì)胞種植在三維結(jié)構(gòu)支架材料上,在合適的微環(huán)境及細(xì)胞因子的作用下,發(fā)育為成熟的脂肪組織。支架材料作為人工細(xì)胞外基質(zhì),為種子細(xì)胞提供了適合其遷移、粘附、生長、繁殖的生物學(xué)空間,促進(jìn)合成新的細(xì)胞外基質(zhì)成分,支持新陳代謝 [1]。前脂肪細(xì)胞只有貼附于合適的支架上,才能進(jìn)行分化、增殖。支架材料和人體組織直接接觸,所以對其生物學(xué)特性和理化性質(zhì)有較高的要求。理想的用于脂肪組織工程的支架材料應(yīng)具備的條件為:①足夠的機(jī)械強(qiáng)度和柔韌性;②良好的生物相容性;③生物活性和生物降解性;④具有適合的三維空間多孔結(jié)構(gòu);⑤能提供明確的生物學(xué)上的刺激因素,促進(jìn)血管形成;⑥具有可加工性、可消毒性及抗凝血性;⑦來源充足,易于重復(fù)制作、加工成型。

    2 支架材料來源

    目前,用于構(gòu)建脂肪組織工程的支架材料包括天然和人工合成材料。常用的天然高分子生物材料主要分為多糖類和蛋白質(zhì)類兩大類,包括殼聚糖、藻朊酸鹽、膠原蛋白、絲素蛋白、透明質(zhì)酸及其衍生物等,這類材料自身包含的生物信息能夠刺激細(xì)胞產(chǎn)生或維持各種功能,所含的一些天然結(jié)構(gòu)有利于細(xì)胞的附著或保持分化,而且它們具有良好的生物相容性和化學(xué)多樣性,可以促進(jìn)細(xì)胞間的相互作用,降解過程受細(xì)胞控制[2]。但這類材料在大規(guī)模生產(chǎn)過程中,會出現(xiàn)質(zhì)量難以控制、性能變化與結(jié)構(gòu)變化不成比例等,而且來源有限,價格較為昂貴,使其應(yīng)用受到一定程度限制[3]。在臨床應(yīng)用中,為了盡可能降低機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)的可能性,確保支架長期穩(wěn)定,天然材料通常要在應(yīng)用前進(jìn)行一些預(yù)處理。人工合成材料包括PGA,PLA,PLGA,PEGDA(聚乙二醇二丙烯酸酯)等,機(jī)械性能良好,設(shè)計制造過程中能對材料的許多性能進(jìn)行控制,易加工成不同的形狀,可以被制作成凝膠、海綿、纖維網(wǎng)織物和納米纖維[4],被廣泛用作生物材料。

    3構(gòu)建組織工程脂肪支架材料

    3.1 膠原蛋白:膠原蛋白是一種由三條肽鏈組成的纖維狀蛋白質(zhì),廣泛存在于細(xì)胞外基質(zhì)和結(jié)締組織中,是目前組織工程研究中最常用的天然生物材料。膠原蛋白有著良好的機(jī)械性能及生物相容性,可被膠原蛋白酶和基質(zhì)金屬酶生物降解[5],免疫原性較低,細(xì)胞對其適應(yīng)性強(qiáng),可承載多種細(xì)胞,具有三維多孔結(jié)構(gòu),能釋放生物活性因子,可促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化,促進(jìn)脂肪組織形成,可塑性良好,制備方便,是一種較理想的脂肪組織工程支架材料。膠原蛋白以I、Ⅱ、Ⅲ型最為多見,其中I型膠原由于性能優(yōu)良且含量豐富,已被廣泛用于構(gòu)建組織工程人工皮膚。I型膠原凝膠支架具有半固體、半液態(tài)的特點(diǎn),能夠相對容易地實現(xiàn)細(xì)胞的均勻分布,而且能夠通過物理性捕獲效應(yīng)將大量細(xì)胞限制于其中,同時解決了細(xì)胞與材料的復(fù)合問題及接種過程中細(xì)胞的丟失問題 [6]。Ⅰ型膠原海綿孔隙率較高,具有較大的空間和比表面積,可以為脂肪干細(xì)胞的生長和增殖提供更為廣闊的空間,孔徑較適合細(xì)胞粘附生長,對脂肪干細(xì)胞的吸附率較高。將人成纖維細(xì)胞接種在天然膠原蛋白材料上,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞可以在膠原海綿支架周圍粘附、生長、增殖分化,隨著培養(yǎng)時間的延長細(xì)胞長入孔隙內(nèi),分泌細(xì)胞外基質(zhì),細(xì)胞連接成片,表明這種材料對細(xì)胞有粘附作用[7]。大量研究表明膠原海綿可以支持多種細(xì)胞來源的脂肪組織生成[8],將人及兔脂肪干細(xì)胞在Ⅰ型膠原蛋白支架上進(jìn)行體外培養(yǎng),結(jié)果顯示脂肪干細(xì)胞在支架上粘附、生長和增殖良好,表明I型膠原蛋白支架材料具有良好的細(xì)胞相容性和親和力,有促進(jìn)細(xì)胞粘附和誘導(dǎo)生長分化的作用。細(xì)胞-膠原蛋白復(fù)合物能形成有效的微環(huán)境網(wǎng),提供豐富的血供,有利于新的脂肪組織的持續(xù)生成[9]。在體內(nèi),膠原蛋白能促進(jìn)多數(shù)細(xì)胞生長、分化、增殖和代謝,支持粘附種植更多的細(xì)胞,積聚更大量的脂質(zhì)。在膠原凝膠中添加短膠原纖維可以增強(qiáng)體內(nèi)細(xì)胞的生存力和脂肪積聚。含有封裝了成纖維細(xì)胞生長因子-2(FGF-2)明膠微球的膠原凝膠被證明在體內(nèi)可以促進(jìn)血管化的脂肪組織發(fā)育[10]。

    在應(yīng)用中,膠原蛋白降解產(chǎn)物可被細(xì)胞利用合成新的基質(zhì),不影響內(nèi)環(huán)境pH 值,而且可參與組織修復(fù)。另一方面,膠原蛋白降解速度過快——在體內(nèi)4周后已完全降解,目前,解決這一問題的主要方法是通過干熱、戊二醛或紫外輻照等方法交聯(lián),可以在調(diào)節(jié)降解速度的同時,提高其綜合使用性能。此外,膠原蛋白價格較高。膠原材料由于獨(dú)特的生物學(xué)特性,在燒傷、創(chuàng)傷、美容等領(lǐng)域研究中已取得了可喜成果,但作為組織工程載體材料的研究還處于起步階段。

    3.2 絲素蛋白:絲素蛋白來源于天然蠶絲或蛛絲,是一種無生理活性的天然結(jié)構(gòu)蛋白。結(jié)構(gòu)上含有疏水區(qū)和親水區(qū),疏水區(qū)為高度保守的重復(fù)序列,親水區(qū)由更復(fù)雜的序列構(gòu)成[11]。絲素蛋白具有無可比擬的機(jī)械強(qiáng)度和柔韌性,力學(xué)性能較其他天然纖維更為優(yōu)良;可被蛋白酶水解,降解速度緩慢,降解產(chǎn)物對周圍組織有營養(yǎng)和修復(fù)作用;生物相容性優(yōu)于傳統(tǒng)的人工合成材料,可以支持細(xì)胞粘附、分化和組織形成[12];免疫原性低,具有良好的透氣性和透濕性,還能耐受較大范圍的濕度和溫度變化??蓮V泛應(yīng)用于臨床。在組織工程中,絲素蛋白已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于組織構(gòu)建的支架材料。絲素蛋白三維多孔性支架材料能夠支持干細(xì)胞的粘附、增殖以及在體內(nèi)的分化。體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)接種于絲素蛋白支架上的前脂肪細(xì)胞貼壁良好,生長增殖活躍,兩周左右支架網(wǎng)眼充滿前脂肪細(xì)胞,掃描電鏡可見基質(zhì)分泌。實驗表明絲素蛋白對前脂肪細(xì)胞具有良好的吸附作用,并能維持前脂肪細(xì)胞的正常形態(tài)和功能。絲素蛋白用做支架材料時,無需再加工。此外,蠶絲來源豐富,價格便宜,處理簡單,可以加工成多種形式的支架,并可通過遺傳工程對其進(jìn)行針對性改造以調(diào)節(jié)降解周期。對于組織工程應(yīng)用,絲素蛋白已經(jīng)被證明是一種多用途的生物材料,在構(gòu)建工程化的脂肪組織中,可以成為前脂肪細(xì)胞體外培養(yǎng)的良好天然支架。

    3.3 透明質(zhì)酸:透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid,HA)為大分子多糖,是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分,并在多種生理活動中起重要作用,例如組織水化作用,營養(yǎng)物擴(kuò)散和細(xì)胞分化等[13]。HA可以特異性地結(jié)合內(nèi)源性受體,如CD44,RHAMM,ICAM-1,調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移,生長和粘附,從而參與組織生長和改造。研究表明,人類前脂肪細(xì)胞可以成功地在HA基礎(chǔ)支架上接種和培養(yǎng)。此外,接種于這種支架上的人脂肪母細(xì)胞在體內(nèi)能充分分化成熟為脂肪細(xì)胞。由于結(jié)構(gòu)疏松,含水及多孔性因而特別適于細(xì)胞的遷移及增殖,防止細(xì)胞在遷移到位及增殖夠數(shù)之前過早地進(jìn)行分化 [3]。然而,高度親水性導(dǎo)致了力學(xué)特性不佳,加之加工處理特性較差,嚴(yán)重制約了HA應(yīng)用于組織工程學(xué)。為了規(guī)避這些缺陷,在保留HA生物活性的前提下,可以通過交聯(lián)或偶聯(lián)反應(yīng),對HA進(jìn)行化學(xué)修飾,主要是針對部分葡醣醛酸的羧基的酯化修飾,從而可以獲得一系列的衍生物(HYAFF)。不同的酯化程度可能引起不同的疏水度,孔隙尺寸的不同可能導(dǎo)致細(xì)胞粘附的差異性。其中,HA苯甲基酯(HYAFF R 11)是一種近年來發(fā)展的半合成的可吸收材料,通過酯化修飾,增強(qiáng)了疏水性,延長了在機(jī)體內(nèi)的存在時間,可以更好地抵抗透明質(zhì)酸酶的作用。通過裸鼠模型業(yè)已證實,HYAFF R11海綿-人前脂肪細(xì)胞復(fù)合體在脂肪組織再生中非常有效,把人前脂肪細(xì)胞-HYAFF R 11復(fù)合體移植于裸鼠體內(nèi)3周后,細(xì)胞密度高于膠原復(fù)合體[14]。HYAFF有良好的生物降解速度,作為一種聚多糖,抗原性非常弱。體內(nèi)外實驗已經(jīng)證實其對脂肪母細(xì)胞的增殖、分化有支持作用,且孔徑為400μm的HYAFF支架最合適脂肪母細(xì)胞增殖分化。由于它良好的可加工性和生物相容性,已經(jīng)被廣泛用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。HA衍生材料三維多孔支架在脂肪組織工程研究中具有廣闊的前景。

    3.4 脂肪族聚酯材料:聚乳酸(PLA)、聚羥基乙酸(PGA)、聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)為人工合成的脂肪族聚酯材料,具有良好的組織相容性、生物降解性及組織可吸收性,表面活性良好,是常用的細(xì)胞支架材料,被廣泛應(yīng)用于組織工程領(lǐng)域。PLA、PGA主要用于脂肪組織工程的三維網(wǎng)織物、支架和(或)移植物 [15]。細(xì)胞種植于PGA支架上,可以容易地積聚脂質(zhì)。PLA在體內(nèi)首先降解為乳酸,最終生成二氧化碳和水。PGA分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與PLA類似,但降解較快,降解產(chǎn)物-羥基乙酸可以通過三羧酸循環(huán)或以尿液等形式排出體外。PGA通過熔融紡絲可以獲得高強(qiáng)度的PGA纖維,編織后可以得到用于組織工程的多孔支架。PGA纖維具有較高的強(qiáng)度和模量,但是較脆,可以通過與其他分子共聚的方法降低其脆性。目前主要將PGA 與PLA 聚合,或者用羥基乙酸和乳酸的單體共聚形成聚合物PLGA。有時也用膠原溶脹液進(jìn)行包衣處理,以提高PLA 或PGA 作為支架時對細(xì)胞的粘附水平。LA和GA共聚后可以得到PLGA, LA和GA的比例不同,聚合物的降解速率不同。近年來發(fā)現(xiàn)PLGA多孔支架具有介導(dǎo)脂肪組織生成的能力。Patrick等[16]從SD或Lewis大鼠附睪脂肪墊中分離出前脂肪細(xì)胞,在PLGA支架上培養(yǎng)后,移植入大鼠背部,5周后可見分化的脂肪細(xì)胞。源于人和鼠的脂肪細(xì)胞,加入諸如bFGF等因子后種植在PLGA支架上,已經(jīng)被證明可誘導(dǎo)血管形成。李春明等[17]將兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞接種在PLGA支架上,移植于兔背部肩胛骨兩側(cè)皮下,可見細(xì)胞逐漸擴(kuò)展至支架孔隙中,隨著支架的降解,新的脂肪組織形成明顯,伴有少量的血管長入。前述體內(nèi)外的研究表明PLGA支架能促進(jìn)種子細(xì)胞的粘附、增殖和分化,可作為構(gòu)建工程化脂肪組織的支架材料。PLA體內(nèi)降解需要12周時間,PGA體內(nèi)降解需要4周時間??梢酝ㄟ^改變其分子量、結(jié)晶度、乳酸和羥基乙酸的比例來控制其降解性,降解速度可以從幾周到幾年不等。降解后的酸性產(chǎn)物降低了局部的pH值,會影響組織和細(xì)胞的粘附和生長,或?qū)е录?xì)胞中毒甚至死亡。而且此類材料太過脆硬,使得患者甚感不適,其來源主要靠進(jìn)口,價格昂貴。目前僅有PLGA等少數(shù)幾種此類材料被SFDA、FDA批準(zhǔn)上市。

    4其他支架材料

    近年來,可承載脂肪干細(xì)胞的注射凝膠在脂肪組織工程中的前景引起了人們的高度關(guān)注[13]。對于脂肪組織工程的實際應(yīng)用來說,挑戰(zhàn)在于輸送必需的脂肪形成因子,如:胰島素、胰島素樣生長因子、地塞米松等來誘導(dǎo)脂肪形成,藻朊酸鹽已被用作可注射的細(xì)胞載體[5],這類材料可以按期望的外形進(jìn)行填充,在相關(guān)生長因子的作用下可以增殖,移植時不需開放式外科手術(shù)[18]。纖維結(jié)合素是一種有膠原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白,生物相容性良好,通過與整合素相互作用在細(xì)胞識別與細(xì)胞吸附中發(fā)揮效應(yīng),并且通過影響內(nèi)皮細(xì)胞遷移增加血管形成,使脂肪生成增加。但還沒有被用來制作三維結(jié)構(gòu)支架。其他已經(jīng)被開發(fā)用于脂肪組織工程的人工合成材料,包括聚乙二醇(PEG)凝膠三維結(jié)構(gòu)支架[19]、聚對苯二甲酸乙二醇酯和聚丙烯組成的網(wǎng)織物[15]等也初顯應(yīng)用前景。明膠海綿材料可生物降解,植入皮下后可被充分吸收,在脂肪組織工程中也展現(xiàn)出光明的前景。

    5展望

    近年來,由于納米技術(shù)的發(fā)展,納米材料也日益廣泛應(yīng)用于組織工程。由于脂肪組織對缺血、缺氧極其敏感,而一些細(xì)胞因子,如:VEGF,HGF等對移植物血管形成和血管新生有重要的始動和促進(jìn)作用,把細(xì)胞因子包被在材料里,隨著材料的降解,漸進(jìn)式的釋放,可以促進(jìn)移植物的存活。因此,設(shè)想可以在三維支架上復(fù)合已包被了生長因子的納米生物材料微珠。還可以對生物材料的表面進(jìn)行化學(xué)修飾,支架材料亦可用細(xì)胞外基質(zhì)成分進(jìn)行包被,可以在多聚物支架表面摻入細(xì)胞粘附分子,使之更利于細(xì)胞粘附,增加其生物相容性??傊?,臨床上脂肪移植的需求與日俱增,加之材料科學(xué)的飛躍發(fā)展,會有更多、性能更卓越的生物材料用于脂肪組織工程。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1]Brehmer B,Rohrmann D,Becker C,et al. Different types of scaffolds for reconstruction of the urinary tract by tissue engineering[J].Urol Int,2007,78(1):23-29.

    [2]Lee KY,Mooney DJ.Hydrogels for tissue engineering [J].Chem Rev,2001,101(7):1869-1879.

    [3]竺亞斌,高長有,王登勇.聚合物組織工程材料[J]. 生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志,2003,20(2):356-360.

    [4]L'ubos D,Ivan V,Radoslav Z.The tissue engineering of articular cartilage: cells, scaffolds and stimulating factors [J].Exper Biol Med,2012,237(1):10-17.

    [5]Hazel T,Edward N,Joshua C.Adipose-Derived Stem Cells: Characterization and Current Application in Orthopaedic Tissue Repair [J].Exper BiolMed,2009,234(1):1-9.

    [6]郝偉,胡蘊(yùn)玉,姜明,等.基于脂肪干細(xì)胞I型膠原凝膠PLGA-B-TCP支架的新型仿生骨組織工程復(fù)合體的構(gòu)建及生物學(xué)性能[J].第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2008,29(7):584-587.

    [7]Middelkoop E,Vries HJ,Ruuls L,et al. Adherence, proliferation and collagen turnover by human fibroblasts seeded into different types of collagen sponges [J].Cell Tissue Res,1995,280(2):447-453.

    [8]Neuss S,Stainforth R,Salber J,et al.Long-term survival and bipotent terminal differentiation of human mesenchymal stem cells (hMSC) in combination with a commercially available three-dimensional collagen scaffold [J].Cell Transplant,2008,17(8):977-986.

    [9]Borges J,Mueller MC,Padron NT,et al. Engineered adipose tissue supplied by functional microvessels [J].Tissue Eng,2003,9(6):1263-1270.

    [10]Vashi A,Abberton K,Thomas G,et al.Adipose tissue engineering based on the controlled release of fibroblast growth factor-2 in a collagen matrix[J]. Tissue Engineering,2006,12(11):3035-3043.

    [11]Bini E,Knight D,Kaplan D.Mapping domain structures in silks from insects and spiders related to protein assembly [J].JMoleculBiol,2004,335(1):27-40.

    [12]Saitow C,Kaplan D,Castellot J.Heparin stimulates elastogenesis: Application to silk-based vascular grafts [J].Matrix Biology, 2011,30(5-6):346-355.

    [13]Tan H,Ramirez C,Miljkovic N,et al.Thermosensitive injectable hyaluronic acid hydrogel for adipose tissue engineering[J].Biomaterials,2009,30(36):6844-6853.

    [14]Heimburgh D,Zachariah S,Heschel I,et al. Human preadipocytes seeded on freeze-dried collagen scaffolds investigated in vitro and in vivo[J].Biomaterials,2001,22(5):429-438.

    [15]Lin S,Wang K,Kao A.Engineered adipose tissue of predefined shape and dimensions from human adipose-derived mesenchymal stem cells[J].Tissue Engineering Part A,2008,14(5):571-581.

    [16]Cho S,Song K,Rhie J,et al.Engineered adipose tissue formation enhanced by basic fibroblast growth factor and a mechanically stable environment [J].Cell Transplant,2007,16(4):421-434.

    [17]Beahm E,Walton R.Issues, considerations, and trends in bilateral breast reconstruction [J].Plastic and Reconstructive Surgery,2009,124(4):1064-1076.

    [18]Rubin J,Bennett J,Doctor J,et al.Collagenous microbeads as a scaffold for tissue engineering with adipose-derived stem cells[J].Plast Reconstr Surg,2007,120(2):414-424.

    [19]Vashi A,Keramidaris E,Abberton K,et al.Adipose differentiation of bone marrowderived mesenchymal stem cells using Pluronic F-127 hydrogel in vitro [J].Biomaterials,2008,29(5):573-579.

    [收稿日期]2012-05-15 [修回日期]2012-07-20

    編輯/李陽利

    猜你喜歡
    絲素脂肪組織膠原蛋白
    高脂肪飲食和生物鐘紊亂會影響體內(nèi)的健康脂肪組織
    中老年保健(2021年9期)2021-08-24 03:49:52
    雙源CT對心臟周圍脂肪組織與冠狀動脈粥樣硬化的相關(guān)性
    絲素蛋白改性羧基化棉織物的制備與表征
    想不到你是這樣的膠原蛋白
    Coco薇(2017年12期)2018-01-03 21:27:09
    美國肉參膠原蛋白肽對H2O2損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用
    膠原蛋白在食品中的應(yīng)用現(xiàn)狀及其發(fā)展前景分析
    梭魚骨膠原蛋白的提取及其性質(zhì)
    絲素蛋白對重金屬離子吸附性能的研究
    蠶桑通報(2015年1期)2015-12-23 10:14:30
    絲素蛋白微針溶脹給藥系統(tǒng)的研究
    絲綢(2015年7期)2015-02-28 14:56:30
    N-月桂酰肌氨酸鈉/絲素蛋白水凝膠的研究
    絲綢(2014年7期)2014-02-28 14:55:23
    成人国产麻豆网| av在线播放精品| 欧美人与善性xxx| 午夜精品国产一区二区电影| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 免费观看性生交大片5| 看十八女毛片水多多多| 久久婷婷青草| 日韩一区二区三区影片| 亚洲色图综合在线观看| 日本vs欧美在线观看视频| 天堂中文最新版在线下载| 欧美国产精品一级二级三级| freevideosex欧美| 色5月婷婷丁香| 18禁动态无遮挡网站| 免费观看a级毛片全部| 性高湖久久久久久久久免费观看| 91精品国产九色| 国产精品久久久久久av不卡| 国产精品免费大片| 性高湖久久久久久久久免费观看| 伊人久久国产一区二区| 亚洲av免费高清在线观看| 一区二区三区精品91| 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲美女搞黄在线观看| av电影中文网址| 一级a做视频免费观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 成年人免费黄色播放视频| av线在线观看网站| 国产精品久久久久成人av| 一边亲一边摸免费视频| 国产视频首页在线观看| 精品少妇内射三级| 欧美日韩av久久| 婷婷成人精品国产| 国产一区有黄有色的免费视频| 亚洲第一av免费看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 亚洲成人av在线免费| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 日韩中字成人| 欧美精品国产亚洲| 亚洲内射少妇av| 成人漫画全彩无遮挡| 午夜激情久久久久久久| 青春草亚洲视频在线观看| xxxhd国产人妻xxx| 一本大道久久a久久精品| 黄色怎么调成土黄色| 午夜久久久在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 99久久综合免费| 国内精品宾馆在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 美女国产高潮福利片在线看| 日韩免费高清中文字幕av| 午夜老司机福利剧场| 一区二区三区免费毛片| 久久综合国产亚洲精品| 精品国产一区二区久久| 日本免费在线观看一区| 精品一品国产午夜福利视频| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲成人手机| 久久久精品94久久精品| 少妇被粗大猛烈的视频| 天堂中文最新版在线下载| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 黄色视频在线播放观看不卡| 高清不卡的av网站| 在线观看三级黄色| 精品午夜福利在线看| 色吧在线观看| 18在线观看网站| 伦理电影大哥的女人| 欧美97在线视频| 久久久精品区二区三区| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产免费福利视频在线观看| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 十八禁高潮呻吟视频| 免费黄色在线免费观看| 久久韩国三级中文字幕| 精品久久久久久久久av| 欧美bdsm另类| 国产欧美日韩综合在线一区二区| 国产av码专区亚洲av| 国产又色又爽无遮挡免| 亚洲不卡免费看| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 精品久久久精品久久久| 免费大片18禁| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| av播播在线观看一区| 亚洲中文av在线| 赤兔流量卡办理| 青春草国产在线视频| 国精品久久久久久国模美| 国产精品免费大片| 日韩制服骚丝袜av| 一级,二级,三级黄色视频| 亚洲国产av新网站| 久久久亚洲精品成人影院| 成人免费观看视频高清| 91精品一卡2卡3卡4卡| 精品亚洲成a人片在线观看| 99热这里只有是精品在线观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 欧美另类一区| 国产一区二区在线观看av| 午夜日本视频在线| 女人久久www免费人成看片| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 一本一本综合久久| 中国国产av一级| 黑人高潮一二区| 国产亚洲最大av| 久久久久久伊人网av| 91国产中文字幕| 午夜福利网站1000一区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看| 亚洲国产精品999| 美女中出高潮动态图| 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲av综合色区一区| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 一区二区三区乱码不卡18| 亚洲,一卡二卡三卡| 国产亚洲最大av| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲美女黄色视频免费看| 男女啪啪激烈高潮av片| 少妇人妻久久综合中文| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 日本vs欧美在线观看视频| 国产精品无大码| 交换朋友夫妻互换小说| 99国产综合亚洲精品| 不卡视频在线观看欧美| 中文字幕久久专区| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| a级毛色黄片| a 毛片基地| 插阴视频在线观看视频| 91在线精品国自产拍蜜月| 精品一区在线观看国产| 日本vs欧美在线观看视频| 五月伊人婷婷丁香| 欧美日韩在线观看h| 男的添女的下面高潮视频| 免费观看av网站的网址| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 秋霞伦理黄片| 亚洲欧美色中文字幕在线| 高清在线视频一区二区三区| 伊人久久国产一区二区| 亚洲av在线观看美女高潮| 久久久久久久大尺度免费视频| 国产视频内射| 亚洲国产精品成人久久小说| av不卡在线播放| 一级毛片我不卡| 国模一区二区三区四区视频| 亚洲精品久久午夜乱码| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 黄色怎么调成土黄色| 国产精品一区二区在线不卡| 久久久国产一区二区| 五月伊人婷婷丁香| 欧美精品一区二区免费开放| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产永久视频网站| 成人毛片60女人毛片免费| 国产有黄有色有爽视频| 国产av码专区亚洲av| 欧美三级亚洲精品| 日本-黄色视频高清免费观看| 全区人妻精品视频| 男女免费视频国产| 国产永久视频网站| 最新的欧美精品一区二区| 国产视频首页在线观看| 在线观看国产h片| 在线观看国产h片| 国产成人av激情在线播放 | 最近最新中文字幕免费大全7| 美女国产视频在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 日韩中文字幕视频在线看片| 亚洲精品第二区| 国产精品一二三区在线看| 久久久精品区二区三区| 特大巨黑吊av在线直播| 丝瓜视频免费看黄片| 久久久国产欧美日韩av| 日本91视频免费播放| 亚洲av成人精品一区久久| 国产午夜精品一二区理论片| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲久久久国产精品| 国产欧美亚洲国产| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 免费大片黄手机在线观看| 国产在线视频一区二区| 成年女人在线观看亚洲视频| 99热国产这里只有精品6| 国产有黄有色有爽视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 亚洲av综合色区一区| 男人添女人高潮全过程视频| 国产欧美亚洲国产| 99国产综合亚洲精品| 免费高清在线观看日韩| 欧美精品亚洲一区二区| 国产综合精华液| 国产一区亚洲一区在线观看| 美女大奶头黄色视频| 两个人免费观看高清视频| 飞空精品影院首页| 国产精品久久久久久精品电影小说| 制服丝袜香蕉在线| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 亚洲av成人精品一区久久| 久热久热在线精品观看| 99久久精品国产国产毛片| 啦啦啦中文免费视频观看日本| 亚洲怡红院男人天堂| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 色网站视频免费| 亚洲国产日韩一区二区| 久久毛片免费看一区二区三区| 日韩 亚洲 欧美在线| 最近中文字幕高清免费大全6| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产免费视频播放在线视频| 我要看黄色一级片免费的| 老司机亚洲免费影院| 国产免费一区二区三区四区乱码| 精品久久蜜臀av无| 亚洲天堂av无毛| 久久久午夜欧美精品| 精品久久久久久电影网| 七月丁香在线播放| 一区二区av电影网| 日韩中字成人| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产精品一区二区在线观看99| 满18在线观看网站| 高清午夜精品一区二区三区| 看免费成人av毛片| 亚洲在久久综合| 久久久久久久久久人人人人人人| 国产成人一区二区在线| 成年女人在线观看亚洲视频| 91成人精品电影| 精品人妻在线不人妻| 精品一品国产午夜福利视频| 少妇高潮的动态图| videosex国产| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 午夜福利,免费看| 99久久精品一区二区三区| 在线观看一区二区三区激情| 日韩一区二区视频免费看| 亚洲国产日韩一区二区| 日本黄色日本黄色录像| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 十八禁高潮呻吟视频| 99久久人妻综合| 99久久人妻综合| h视频一区二区三区| 中文字幕久久专区| 日韩电影二区| 一个人免费看片子| 一级毛片aaaaaa免费看小| 欧美亚洲日本最大视频资源| 成年人午夜在线观看视频| 99久国产av精品国产电影| 狂野欧美激情性bbbbbb| 午夜精品国产一区二区电影| 乱人伦中国视频| 国产乱人偷精品视频| 精品人妻在线不人妻| 久久毛片免费看一区二区三区| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 蜜桃在线观看..| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 少妇被粗大的猛进出69影院 | av网站免费在线观看视频| 黄色一级大片看看| 性高湖久久久久久久久免费观看| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲人成77777在线视频| 免费高清在线观看日韩| 天堂中文最新版在线下载| 午夜福利网站1000一区二区三区| 人妻夜夜爽99麻豆av| 边亲边吃奶的免费视频| 久久免费观看电影| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 大码成人一级视频| 成人国产av品久久久| 午夜日本视频在线| 国产成人精品久久久久久| 成年美女黄网站色视频大全免费 | 精品久久久久久久久亚洲| 亚洲精品日韩av片在线观看| 99热国产这里只有精品6| 久久久久精品久久久久真实原创| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 七月丁香在线播放| 最近中文字幕高清免费大全6| 卡戴珊不雅视频在线播放| 日韩欧美精品免费久久| 在线 av 中文字幕| 韩国高清视频一区二区三区| 亚洲第一av免费看| 久久亚洲国产成人精品v| 国产熟女欧美一区二区| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 制服诱惑二区| 美女主播在线视频| 久久综合国产亚洲精品| 美女cb高潮喷水在线观看| 日日啪夜夜爽| 免费看不卡的av| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 亚洲av成人精品一二三区| 日本爱情动作片www.在线观看| 午夜福利影视在线免费观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 中文字幕制服av| 亚洲久久久国产精品| 99视频精品全部免费 在线| 在线看a的网站| 国产黄频视频在线观看| 国产精品三级大全| 天美传媒精品一区二区| 亚洲四区av| 在线观看一区二区三区激情| 亚洲,欧美,日韩| 久久久久久久久久人人人人人人| 边亲边吃奶的免费视频| 最黄视频免费看| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 青春草国产在线视频| 国产精品久久久久久久电影| 91aial.com中文字幕在线观看| 午夜免费观看性视频| 伦精品一区二区三区| 国产成人精品久久久久久| 日韩人妻高清精品专区| 一本色道久久久久久精品综合| 亚洲,一卡二卡三卡| 亚洲精品一区蜜桃| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 最新的欧美精品一区二区| 色94色欧美一区二区| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产成人精品无人区| 午夜福利欧美成人| 日韩精品免费视频一区二区三区| 丝袜在线中文字幕| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 99国产极品粉嫩在线观看| 欧美 日韩 精品 国产| 老汉色∧v一级毛片| 一区二区三区乱码不卡18| 性少妇av在线| 老司机福利观看| 伦理电影免费视频| 亚洲av片天天在线观看| 久久久久网色| 日韩欧美国产一区二区入口| 啦啦啦免费观看视频1| a级片在线免费高清观看视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 亚洲人成电影观看| 搡老乐熟女国产| 女同久久另类99精品国产91| 在线永久观看黄色视频| 18禁美女被吸乳视频| 亚洲成国产人片在线观看| 国产亚洲精品一区二区www | 丝袜人妻中文字幕| aaaaa片日本免费| 美女福利国产在线| 亚洲专区国产一区二区| 精品亚洲成a人片在线观看| 99精国产麻豆久久婷婷| 午夜福利在线观看吧| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 在线天堂中文资源库| 老鸭窝网址在线观看| 性少妇av在线| 91精品国产国语对白视频| 欧美成人午夜精品| 欧美精品高潮呻吟av久久| 亚洲av国产av综合av卡| 欧美大码av| 成人永久免费在线观看视频 | 多毛熟女@视频| 美女福利国产在线| 欧美亚洲日本最大视频资源| 国产真人三级小视频在线观看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 12—13女人毛片做爰片一| 久久精品国产亚洲av香蕉五月 | 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 波多野结衣一区麻豆| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲精品国产色婷婷电影| 水蜜桃什么品种好| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 在线观看免费视频网站a站| 国产又爽黄色视频| 黑丝袜美女国产一区| 亚洲免费av在线视频| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 久久久久久久国产电影| 纯流量卡能插随身wifi吗| 啦啦啦免费观看视频1| 免费观看人在逋| 91麻豆av在线| 亚洲色图av天堂| 久久狼人影院| www.999成人在线观看| 午夜福利乱码中文字幕| 国产一区二区三区在线臀色熟女 | 中文字幕人妻熟女乱码| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 美女视频免费永久观看网站| 考比视频在线观看| 亚洲av第一区精品v没综合| 99久久精品国产亚洲精品| 国产1区2区3区精品| 一本一本久久a久久精品综合妖精| 色老头精品视频在线观看| 亚洲成人免费av在线播放| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 18禁美女被吸乳视频| 国产区一区二久久| 大片免费播放器 马上看| 日本黄色视频三级网站网址 | 亚洲第一av免费看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产精品久久久久久人妻精品电影 | 国产成人系列免费观看| 国产精品.久久久| 99热国产这里只有精品6| 精品少妇久久久久久888优播| 久久久精品区二区三区| 免费在线观看完整版高清| 黄片大片在线免费观看| 黑人猛操日本美女一级片| 欧美日韩精品网址| av欧美777| 久久精品91无色码中文字幕| 久久久久国产一级毛片高清牌| 亚洲av片天天在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线| 国产欧美亚洲国产| 免费人妻精品一区二区三区视频| 伦理电影免费视频| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 99精品久久久久人妻精品| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 日韩成人在线观看一区二区三区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 最近最新免费中文字幕在线| 国产免费视频播放在线视频| 日本五十路高清| 国产伦人伦偷精品视频| 2018国产大陆天天弄谢| 久热爱精品视频在线9| 亚洲性夜色夜夜综合| 精品午夜福利视频在线观看一区 | 国产精品亚洲一级av第二区| 在线观看免费视频网站a站| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 亚洲情色 制服丝袜| 在线观看免费视频日本深夜| 精品乱码久久久久久99久播| 精品一区二区三区四区五区乱码| 日韩免费高清中文字幕av| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日韩人妻精品一区2区三区| 亚洲熟女毛片儿| 国产日韩欧美在线精品| 波多野结衣一区麻豆| 国产老妇伦熟女老妇高清| 91精品三级在线观看| 狂野欧美激情性xxxx| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲九九香蕉| 夫妻午夜视频| 丁香欧美五月| 三级毛片av免费| 久久精品国产综合久久久| 大型黄色视频在线免费观看| 久久久久国内视频| 老司机亚洲免费影院| 捣出白浆h1v1| 少妇的丰满在线观看| 国产精品久久久久久精品电影小说| 亚洲精品粉嫩美女一区| 在线av久久热| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 久久中文字幕一级| 在线观看舔阴道视频| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美精品一区二区免费开放| 99精品在免费线老司机午夜| 国产不卡一卡二| 日本av免费视频播放| 在线观看66精品国产| 精品免费久久久久久久清纯 | 女警被强在线播放| 精品国产国语对白av| 19禁男女啪啪无遮挡网站| av一本久久久久| 老熟女久久久| 精品熟女少妇八av免费久了| 亚洲欧美激情在线| 欧美激情高清一区二区三区| 热re99久久国产66热| 99re6热这里在线精品视频| svipshipincom国产片| 亚洲熟女毛片儿| 亚洲九九香蕉| 黄片播放在线免费| 在线观看免费视频网站a站| 精品熟女少妇八av免费久了| 美女国产高潮福利片在线看| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 久久九九热精品免费| 国产精品欧美亚洲77777| 国产亚洲一区二区精品| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 性色av乱码一区二区三区2| 色尼玛亚洲综合影院| 久久久精品区二区三区| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲免费av在线视频| 亚洲三区欧美一区| 交换朋友夫妻互换小说| 脱女人内裤的视频| 美女午夜性视频免费| 成人手机av| 757午夜福利合集在线观看| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 淫妇啪啪啪对白视频| 免费少妇av软件| 亚洲熟女精品中文字幕| 老司机深夜福利视频在线观看| 成在线人永久免费视频| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 日韩欧美一区视频在线观看| 日本一区二区免费在线视频| 少妇粗大呻吟视频| 久久精品亚洲av国产电影网| 国产视频一区二区在线看| 嫁个100分男人电影在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 亚洲七黄色美女视频| xxxhd国产人妻xxx| 高清视频免费观看一区二区| 国产精品久久电影中文字幕 | 久久久久国内视频| 国产精品免费视频内射| 国产精品自产拍在线观看55亚洲 | 电影成人av| 亚洲精品久久午夜乱码| 搡老岳熟女国产| 亚洲熟女精品中文字幕| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| av有码第一页| 精品第一国产精品| 在线观看免费视频网站a站| 亚洲免费av在线视频| 国产精品久久久久久精品古装| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲国产av影院在线观看| 激情视频va一区二区三区| 国产亚洲精品久久久久5区| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 国产1区2区3区精品| 高清视频免费观看一区二区| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲国产看品久久| 日本一区二区免费在线视频| 国产日韩欧美视频二区| 男女之事视频高清在线观看| 咕卡用的链子| 视频区欧美日本亚洲| 久久久久久久久免费视频了| 精品国产一区二区三区四区第35|