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    脂肪組織工程支架材料的研究進(jìn)展

    2012-04-29 12:47:40王剛劉毅
    中國美容醫(yī)學(xué) 2012年17期
    關(guān)鍵詞:絲素脂肪組織膠原蛋白

    王剛 劉毅

    組織工程的核心是建立由種子細(xì)胞和生物材料支架構(gòu)成的三維空間結(jié)構(gòu)復(fù)合體,生物材料是組織工程發(fā)展的關(guān)鍵,隨著材料科學(xué)、化學(xué)和生物學(xué)的發(fā)展,各種適合細(xì)胞生長、繁殖和分化的天然和合成的可降解材料被用來制作組織工程支架。要成功構(gòu)建工程化的脂肪組織,選擇適當(dāng)?shù)闹Ъ懿牧鲜潜夭豢缮俚?。支架材料為種子細(xì)胞提供貼服場所,而且決定最終構(gòu)建的脂肪組織形狀,因此,支架材料的理化特性是需要考慮的非常重要的因素。本文就脂肪組織工程支架材料的研究進(jìn)展做一綜述。

    1 概述

    脂肪組織工程旨在把獲得的種子細(xì)胞種植在三維結(jié)構(gòu)支架材料上,在合適的微環(huán)境及細(xì)胞因子的作用下,發(fā)育為成熟的脂肪組織。支架材料作為人工細(xì)胞外基質(zhì),為種子細(xì)胞提供了適合其遷移、粘附、生長、繁殖的生物學(xué)空間,促進(jìn)合成新的細(xì)胞外基質(zhì)成分,支持新陳代謝 [1]。前脂肪細(xì)胞只有貼附于合適的支架上,才能進(jìn)行分化、增殖。支架材料和人體組織直接接觸,所以對其生物學(xué)特性和理化性質(zhì)有較高的要求。理想的用于脂肪組織工程的支架材料應(yīng)具備的條件為:①足夠的機(jī)械強(qiáng)度和柔韌性;②良好的生物相容性;③生物活性和生物降解性;④具有適合的三維空間多孔結(jié)構(gòu);⑤能提供明確的生物學(xué)上的刺激因素,促進(jìn)血管形成;⑥具有可加工性、可消毒性及抗凝血性;⑦來源充足,易于重復(fù)制作、加工成型。

    2 支架材料來源

    目前,用于構(gòu)建脂肪組織工程的支架材料包括天然和人工合成材料。常用的天然高分子生物材料主要分為多糖類和蛋白質(zhì)類兩大類,包括殼聚糖、藻朊酸鹽、膠原蛋白、絲素蛋白、透明質(zhì)酸及其衍生物等,這類材料自身包含的生物信息能夠刺激細(xì)胞產(chǎn)生或維持各種功能,所含的一些天然結(jié)構(gòu)有利于細(xì)胞的附著或保持分化,而且它們具有良好的生物相容性和化學(xué)多樣性,可以促進(jìn)細(xì)胞間的相互作用,降解過程受細(xì)胞控制[2]。但這類材料在大規(guī)模生產(chǎn)過程中,會出現(xiàn)質(zhì)量難以控制、性能變化與結(jié)構(gòu)變化不成比例等,而且來源有限,價格較為昂貴,使其應(yīng)用受到一定程度限制[3]。在臨床應(yīng)用中,為了盡可能降低機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)的可能性,確保支架長期穩(wěn)定,天然材料通常要在應(yīng)用前進(jìn)行一些預(yù)處理。人工合成材料包括PGA,PLA,PLGA,PEGDA(聚乙二醇二丙烯酸酯)等,機(jī)械性能良好,設(shè)計制造過程中能對材料的許多性能進(jìn)行控制,易加工成不同的形狀,可以被制作成凝膠、海綿、纖維網(wǎng)織物和納米纖維[4],被廣泛用作生物材料。

    3構(gòu)建組織工程脂肪支架材料

    3.1 膠原蛋白:膠原蛋白是一種由三條肽鏈組成的纖維狀蛋白質(zhì),廣泛存在于細(xì)胞外基質(zhì)和結(jié)締組織中,是目前組織工程研究中最常用的天然生物材料。膠原蛋白有著良好的機(jī)械性能及生物相容性,可被膠原蛋白酶和基質(zhì)金屬酶生物降解[5],免疫原性較低,細(xì)胞對其適應(yīng)性強(qiáng),可承載多種細(xì)胞,具有三維多孔結(jié)構(gòu),能釋放生物活性因子,可促進(jìn)細(xì)胞增殖和分化,促進(jìn)脂肪組織形成,可塑性良好,制備方便,是一種較理想的脂肪組織工程支架材料。膠原蛋白以I、Ⅱ、Ⅲ型最為多見,其中I型膠原由于性能優(yōu)良且含量豐富,已被廣泛用于構(gòu)建組織工程人工皮膚。I型膠原凝膠支架具有半固體、半液態(tài)的特點(diǎn),能夠相對容易地實現(xiàn)細(xì)胞的均勻分布,而且能夠通過物理性捕獲效應(yīng)將大量細(xì)胞限制于其中,同時解決了細(xì)胞與材料的復(fù)合問題及接種過程中細(xì)胞的丟失問題 [6]。Ⅰ型膠原海綿孔隙率較高,具有較大的空間和比表面積,可以為脂肪干細(xì)胞的生長和增殖提供更為廣闊的空間,孔徑較適合細(xì)胞粘附生長,對脂肪干細(xì)胞的吸附率較高。將人成纖維細(xì)胞接種在天然膠原蛋白材料上,發(fā)現(xiàn)細(xì)胞可以在膠原海綿支架周圍粘附、生長、增殖分化,隨著培養(yǎng)時間的延長細(xì)胞長入孔隙內(nèi),分泌細(xì)胞外基質(zhì),細(xì)胞連接成片,表明這種材料對細(xì)胞有粘附作用[7]。大量研究表明膠原海綿可以支持多種細(xì)胞來源的脂肪組織生成[8],將人及兔脂肪干細(xì)胞在Ⅰ型膠原蛋白支架上進(jìn)行體外培養(yǎng),結(jié)果顯示脂肪干細(xì)胞在支架上粘附、生長和增殖良好,表明I型膠原蛋白支架材料具有良好的細(xì)胞相容性和親和力,有促進(jìn)細(xì)胞粘附和誘導(dǎo)生長分化的作用。細(xì)胞-膠原蛋白復(fù)合物能形成有效的微環(huán)境網(wǎng),提供豐富的血供,有利于新的脂肪組織的持續(xù)生成[9]。在體內(nèi),膠原蛋白能促進(jìn)多數(shù)細(xì)胞生長、分化、增殖和代謝,支持粘附種植更多的細(xì)胞,積聚更大量的脂質(zhì)。在膠原凝膠中添加短膠原纖維可以增強(qiáng)體內(nèi)細(xì)胞的生存力和脂肪積聚。含有封裝了成纖維細(xì)胞生長因子-2(FGF-2)明膠微球的膠原凝膠被證明在體內(nèi)可以促進(jìn)血管化的脂肪組織發(fā)育[10]。

    在應(yīng)用中,膠原蛋白降解產(chǎn)物可被細(xì)胞利用合成新的基質(zhì),不影響內(nèi)環(huán)境pH 值,而且可參與組織修復(fù)。另一方面,膠原蛋白降解速度過快——在體內(nèi)4周后已完全降解,目前,解決這一問題的主要方法是通過干熱、戊二醛或紫外輻照等方法交聯(lián),可以在調(diào)節(jié)降解速度的同時,提高其綜合使用性能。此外,膠原蛋白價格較高。膠原材料由于獨(dú)特的生物學(xué)特性,在燒傷、創(chuàng)傷、美容等領(lǐng)域研究中已取得了可喜成果,但作為組織工程載體材料的研究還處于起步階段。

    3.2 絲素蛋白:絲素蛋白來源于天然蠶絲或蛛絲,是一種無生理活性的天然結(jié)構(gòu)蛋白。結(jié)構(gòu)上含有疏水區(qū)和親水區(qū),疏水區(qū)為高度保守的重復(fù)序列,親水區(qū)由更復(fù)雜的序列構(gòu)成[11]。絲素蛋白具有無可比擬的機(jī)械強(qiáng)度和柔韌性,力學(xué)性能較其他天然纖維更為優(yōu)良;可被蛋白酶水解,降解速度緩慢,降解產(chǎn)物對周圍組織有營養(yǎng)和修復(fù)作用;生物相容性優(yōu)于傳統(tǒng)的人工合成材料,可以支持細(xì)胞粘附、分化和組織形成[12];免疫原性低,具有良好的透氣性和透濕性,還能耐受較大范圍的濕度和溫度變化??蓮V泛應(yīng)用于臨床。在組織工程中,絲素蛋白已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于組織構(gòu)建的支架材料。絲素蛋白三維多孔性支架材料能夠支持干細(xì)胞的粘附、增殖以及在體內(nèi)的分化。體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)接種于絲素蛋白支架上的前脂肪細(xì)胞貼壁良好,生長增殖活躍,兩周左右支架網(wǎng)眼充滿前脂肪細(xì)胞,掃描電鏡可見基質(zhì)分泌。實驗表明絲素蛋白對前脂肪細(xì)胞具有良好的吸附作用,并能維持前脂肪細(xì)胞的正常形態(tài)和功能。絲素蛋白用做支架材料時,無需再加工。此外,蠶絲來源豐富,價格便宜,處理簡單,可以加工成多種形式的支架,并可通過遺傳工程對其進(jìn)行針對性改造以調(diào)節(jié)降解周期。對于組織工程應(yīng)用,絲素蛋白已經(jīng)被證明是一種多用途的生物材料,在構(gòu)建工程化的脂肪組織中,可以成為前脂肪細(xì)胞體外培養(yǎng)的良好天然支架。

    3.3 透明質(zhì)酸:透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid,HA)為大分子多糖,是細(xì)胞外基質(zhì)的主要成分,并在多種生理活動中起重要作用,例如組織水化作用,營養(yǎng)物擴(kuò)散和細(xì)胞分化等[13]。HA可以特異性地結(jié)合內(nèi)源性受體,如CD44,RHAMM,ICAM-1,調(diào)節(jié)細(xì)胞遷移,生長和粘附,從而參與組織生長和改造。研究表明,人類前脂肪細(xì)胞可以成功地在HA基礎(chǔ)支架上接種和培養(yǎng)。此外,接種于這種支架上的人脂肪母細(xì)胞在體內(nèi)能充分分化成熟為脂肪細(xì)胞。由于結(jié)構(gòu)疏松,含水及多孔性因而特別適于細(xì)胞的遷移及增殖,防止細(xì)胞在遷移到位及增殖夠數(shù)之前過早地進(jìn)行分化 [3]。然而,高度親水性導(dǎo)致了力學(xué)特性不佳,加之加工處理特性較差,嚴(yán)重制約了HA應(yīng)用于組織工程學(xué)。為了規(guī)避這些缺陷,在保留HA生物活性的前提下,可以通過交聯(lián)或偶聯(lián)反應(yīng),對HA進(jìn)行化學(xué)修飾,主要是針對部分葡醣醛酸的羧基的酯化修飾,從而可以獲得一系列的衍生物(HYAFF)。不同的酯化程度可能引起不同的疏水度,孔隙尺寸的不同可能導(dǎo)致細(xì)胞粘附的差異性。其中,HA苯甲基酯(HYAFF R 11)是一種近年來發(fā)展的半合成的可吸收材料,通過酯化修飾,增強(qiáng)了疏水性,延長了在機(jī)體內(nèi)的存在時間,可以更好地抵抗透明質(zhì)酸酶的作用。通過裸鼠模型業(yè)已證實,HYAFF R11海綿-人前脂肪細(xì)胞復(fù)合體在脂肪組織再生中非常有效,把人前脂肪細(xì)胞-HYAFF R 11復(fù)合體移植于裸鼠體內(nèi)3周后,細(xì)胞密度高于膠原復(fù)合體[14]。HYAFF有良好的生物降解速度,作為一種聚多糖,抗原性非常弱。體內(nèi)外實驗已經(jīng)證實其對脂肪母細(xì)胞的增殖、分化有支持作用,且孔徑為400μm的HYAFF支架最合適脂肪母細(xì)胞增殖分化。由于它良好的可加工性和生物相容性,已經(jīng)被廣泛用于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。HA衍生材料三維多孔支架在脂肪組織工程研究中具有廣闊的前景。

    3.4 脂肪族聚酯材料:聚乳酸(PLA)、聚羥基乙酸(PGA)、聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)為人工合成的脂肪族聚酯材料,具有良好的組織相容性、生物降解性及組織可吸收性,表面活性良好,是常用的細(xì)胞支架材料,被廣泛應(yīng)用于組織工程領(lǐng)域。PLA、PGA主要用于脂肪組織工程的三維網(wǎng)織物、支架和(或)移植物 [15]。細(xì)胞種植于PGA支架上,可以容易地積聚脂質(zhì)。PLA在體內(nèi)首先降解為乳酸,最終生成二氧化碳和水。PGA分子的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與PLA類似,但降解較快,降解產(chǎn)物-羥基乙酸可以通過三羧酸循環(huán)或以尿液等形式排出體外。PGA通過熔融紡絲可以獲得高強(qiáng)度的PGA纖維,編織后可以得到用于組織工程的多孔支架。PGA纖維具有較高的強(qiáng)度和模量,但是較脆,可以通過與其他分子共聚的方法降低其脆性。目前主要將PGA 與PLA 聚合,或者用羥基乙酸和乳酸的單體共聚形成聚合物PLGA。有時也用膠原溶脹液進(jìn)行包衣處理,以提高PLA 或PGA 作為支架時對細(xì)胞的粘附水平。LA和GA共聚后可以得到PLGA, LA和GA的比例不同,聚合物的降解速率不同。近年來發(fā)現(xiàn)PLGA多孔支架具有介導(dǎo)脂肪組織生成的能力。Patrick等[16]從SD或Lewis大鼠附睪脂肪墊中分離出前脂肪細(xì)胞,在PLGA支架上培養(yǎng)后,移植入大鼠背部,5周后可見分化的脂肪細(xì)胞。源于人和鼠的脂肪細(xì)胞,加入諸如bFGF等因子后種植在PLGA支架上,已經(jīng)被證明可誘導(dǎo)血管形成。李春明等[17]將兔脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞接種在PLGA支架上,移植于兔背部肩胛骨兩側(cè)皮下,可見細(xì)胞逐漸擴(kuò)展至支架孔隙中,隨著支架的降解,新的脂肪組織形成明顯,伴有少量的血管長入。前述體內(nèi)外的研究表明PLGA支架能促進(jìn)種子細(xì)胞的粘附、增殖和分化,可作為構(gòu)建工程化脂肪組織的支架材料。PLA體內(nèi)降解需要12周時間,PGA體內(nèi)降解需要4周時間??梢酝ㄟ^改變其分子量、結(jié)晶度、乳酸和羥基乙酸的比例來控制其降解性,降解速度可以從幾周到幾年不等。降解后的酸性產(chǎn)物降低了局部的pH值,會影響組織和細(xì)胞的粘附和生長,或?qū)е录?xì)胞中毒甚至死亡。而且此類材料太過脆硬,使得患者甚感不適,其來源主要靠進(jìn)口,價格昂貴。目前僅有PLGA等少數(shù)幾種此類材料被SFDA、FDA批準(zhǔn)上市。

    4其他支架材料

    近年來,可承載脂肪干細(xì)胞的注射凝膠在脂肪組織工程中的前景引起了人們的高度關(guān)注[13]。對于脂肪組織工程的實際應(yīng)用來說,挑戰(zhàn)在于輸送必需的脂肪形成因子,如:胰島素、胰島素樣生長因子、地塞米松等來誘導(dǎo)脂肪形成,藻朊酸鹽已被用作可注射的細(xì)胞載體[5],這類材料可以按期望的外形進(jìn)行填充,在相關(guān)生長因子的作用下可以增殖,移植時不需開放式外科手術(shù)[18]。纖維結(jié)合素是一種有膠原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的細(xì)胞外基質(zhì)蛋白,生物相容性良好,通過與整合素相互作用在細(xì)胞識別與細(xì)胞吸附中發(fā)揮效應(yīng),并且通過影響內(nèi)皮細(xì)胞遷移增加血管形成,使脂肪生成增加。但還沒有被用來制作三維結(jié)構(gòu)支架。其他已經(jīng)被開發(fā)用于脂肪組織工程的人工合成材料,包括聚乙二醇(PEG)凝膠三維結(jié)構(gòu)支架[19]、聚對苯二甲酸乙二醇酯和聚丙烯組成的網(wǎng)織物[15]等也初顯應(yīng)用前景。明膠海綿材料可生物降解,植入皮下后可被充分吸收,在脂肪組織工程中也展現(xiàn)出光明的前景。

    5展望

    近年來,由于納米技術(shù)的發(fā)展,納米材料也日益廣泛應(yīng)用于組織工程。由于脂肪組織對缺血、缺氧極其敏感,而一些細(xì)胞因子,如:VEGF,HGF等對移植物血管形成和血管新生有重要的始動和促進(jìn)作用,把細(xì)胞因子包被在材料里,隨著材料的降解,漸進(jìn)式的釋放,可以促進(jìn)移植物的存活。因此,設(shè)想可以在三維支架上復(fù)合已包被了生長因子的納米生物材料微珠。還可以對生物材料的表面進(jìn)行化學(xué)修飾,支架材料亦可用細(xì)胞外基質(zhì)成分進(jìn)行包被,可以在多聚物支架表面摻入細(xì)胞粘附分子,使之更利于細(xì)胞粘附,增加其生物相容性??傊?,臨床上脂肪移植的需求與日俱增,加之材料科學(xué)的飛躍發(fā)展,會有更多、性能更卓越的生物材料用于脂肪組織工程。

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    [收稿日期]2012-05-15 [修回日期]2012-07-20

    編輯/李陽利

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