組織工程軟骨種子細(xì)胞研究進(jìn)展

王師平　郭樹忠

組織工程是應(yīng)用生命科學(xué)和工程學(xué)原理，研究開發(fā)能夠修復(fù)、維持或改善組織損傷能力的生物替代物的一門學(xué)科[1]。利用組織工程方法再造軟骨，為臨床上軟骨缺損的修復(fù)帶來了新的途徑，種子細(xì)胞作為軟骨組織工程學(xué)研究的首要方面，它的來源途徑也就尤為重要。目前的組織工程軟骨種子細(xì)胞的來源主要為自體軟骨細(xì)胞、同種異體軟骨細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、干細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞等，成熟軟骨細(xì)胞是最常被關(guān)注的種子細(xì)胞，人們已經(jīng)深入研究了其產(chǎn)生、維持和改造軟骨細(xì)胞外基質(zhì)的作用；成纖維細(xì)胞來源廣泛，并能誘導(dǎo)其直接向軟骨轉(zhuǎn)化[2]；干細(xì)胞的研究則成為近期的熱點(diǎn)，它不但有多向分化潛能并可來源于多種組織，這類細(xì)胞可在維持其分化潛能的前提下通過多種途徑擴(kuò)增，此外干細(xì)胞還能通過基因?qū)W上的改變來誘導(dǎo)或增強(qiáng)軟骨化過程。目前的研究目標(biāo)就是找到一種能被簡單分離出來，具有擴(kuò)增能力并能在培養(yǎng)過程中表達(dá)和合成軟骨特異成分（如Ⅱ型膠原和糖胺多糖）的理想種子細(xì)胞[3]。

1各種成熟軟骨細(xì)胞

自體軟骨細(xì)胞是當(dāng)前組織工程研究中最常用的種子細(xì)胞來源。目前，許多研究傾向于使用關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞作為軟骨修復(fù)的可行性細(xì)胞來源，但是獲取關(guān)節(jié)軟骨是有創(chuàng)的并且潛在供區(qū)并發(fā)癥和功能損傷。此外，細(xì)胞收獲率低、分裂速度慢和生物活性低等缺陷都進(jìn)一步限制了關(guān)節(jié)軟骨的臨床應(yīng)用。由于以上限制，研究者已著手尋找其他自體軟骨細(xì)胞來源，這包括耳軟骨、鼻軟骨和肋軟骨等。由于這些自體軟骨在部位、功能和組成上的不同而造成它們在細(xì)胞外基質(zhì)的生成、生化、物理性質(zhì)和生物力學(xué)方面的差異，因此，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況具體選擇使用[3]。

彈性軟骨包括形成耳的耳廓軟骨和會厭軟骨，Van Osch等[4]提出人類耳廓軟骨有應(yīng)用于軟骨修復(fù)的潛力。與關(guān)節(jié)軟骨相比，耳廓軟骨的細(xì)胞獲取量可提高20%并且其細(xì)胞增殖速度較前者快4倍；體內(nèi)培養(yǎng)時，通過特殊染色觀察到它可形成富含蛋白多糖的基質(zhì)；此外，在體內(nèi)培養(yǎng)時耳廓軟骨與關(guān)節(jié)軟骨相比，前者在生物化學(xué)和組織學(xué)上與未成熟軟骨有更高的相似性[5-7]。鼻軟骨是一種透明軟骨，它在顱頜面外科與整形外科得到了廣泛的應(yīng)用。成體鼻軟骨能生成較多的Ⅰ/Ⅱ型膠原并能蓄積GAG[8]。此外，鼻軟骨在單層培養(yǎng)時細(xì)胞增殖速度較關(guān)節(jié)軟骨快4倍[8]，并能低密度種植培養(yǎng)且不會發(fā)生去分化作用[9]。同時，在不同的載體和支架上，鼻軟骨細(xì)胞已被成功地培養(yǎng)成多細(xì)胞大顆粒聚集體[10-11]。其他研究還表明在去血清培養(yǎng)時，鼻軟骨細(xì)胞能對TGF-β1、FGF-2、BMP-2和IGF-1[12]等生長因子應(yīng)答，同時其增殖速度和基質(zhì)沉積量也有所提高。

在一項軟骨細(xì)胞來源的對照研究中，研究者把牛鼻軟骨、肋軟骨和耳軟骨細(xì)胞置于多聚合物支架上生長4周[13]，不同軟骨細(xì)胞的增殖率和基因表達(dá)情況各不相同，其中Ⅱ型膠原和蛋白聚糖表達(dá)量最高的是肋軟骨細(xì)胞，然后是鼻軟骨、關(guān)節(jié)軟骨和耳軟骨細(xì)胞；同時不同細(xì)胞增殖后構(gòu)成的形狀也有差別，關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖后直徑最大而肋軟骨細(xì)胞形成結(jié)構(gòu)則最厚。另一項研究關(guān)注生長因子對以上各軟骨細(xì)胞的作用，其具體作用表現(xiàn)為可加快細(xì)胞增殖速度、提高GAG/DNA含量和增量調(diào)節(jié)Ⅱ型膠原的表達(dá)；然而再分化現(xiàn)象僅發(fā)生于耳廓軟骨和鼻軟骨細(xì)胞增殖過程中[14]。此外，Johnson等[15]指出在活體內(nèi)，關(guān)節(jié)、耳和肋軟骨細(xì)胞在纖維蛋白膠軟骨合成物上培養(yǎng)時，可形成新的軟骨基質(zhì)。

2成纖維細(xì)胞

成纖維細(xì)胞容易培養(yǎng)，且擴(kuò)增性極好，對組織工程學(xué)來說，成纖維細(xì)胞不但來源充足，并且從皮膚取材其創(chuàng)傷較小。雖然將成纖維細(xì)胞直接植入軟骨缺損區(qū)會導(dǎo)致纖維組織生成[16]，可是在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)條件下，成纖維細(xì)胞可重新向軟骨組織分化。經(jīng)IGF-1預(yù)先處理的人皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)于蛋白多糖樣聚合物上，其GAGs和Ⅱ型膠原染色呈陽性[17]；此外，當(dāng)培養(yǎng)于去礦物質(zhì)骨[18]或生長于乳酸[4]環(huán)境中，皮膚成纖維細(xì)胞可表達(dá)軟骨特異性的基質(zhì)蛋白，如蛋白聚糖和Ⅱ型膠原。同時，成纖維細(xì)胞可表達(dá)TGF-β，將其注射入軟骨缺損處，在6周后可觀察到有新生透明軟骨生成[19]。最近，Deng等[20]分離出一種皮膚來源的細(xì)胞亞群，這種細(xì)胞命名為“真皮來源蛋白多糖敏感細(xì)胞（DIAS）”。此外，DIAS細(xì)胞的立體自我分化增殖可形成豐富的軟骨特異性細(xì)胞外基質(zhì)。

3干細(xì)胞

近來，干細(xì)胞作為自身軟骨種子細(xì)胞來源的又一選擇，引起了組織工程界的廣泛關(guān)注。1998年，研究者發(fā)現(xiàn)骨髓干細(xì)胞在有TGF-β1存在下以細(xì)胞團(tuán)塊的方式培養(yǎng)時可有軟骨形成[21]。之后，脂肪組織被發(fā)現(xiàn)也可作為一種干細(xì)胞來源，并且它可通過簡單的局麻手術(shù)即可分離獲得[22]，此外，研究用于軟骨修復(fù)的干細(xì)胞還可來源于肌肉[23]、滑膜[24]和骨膜[25]等。

3.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）：骨髓中只含有少量間充質(zhì)干細(xì)胞，僅占骨髓細(xì)胞的0.01/萬～1.00/萬，并隨年齡的增加而減少。體外單層培養(yǎng)的間充質(zhì)干細(xì)胞外形類似成纖維細(xì)胞，呈長梭形且體積較大。原代細(xì)胞接種貼壁后可形成2～4個細(xì)胞組成的細(xì)胞團(tuán)，經(jīng)過2～4天的潛伏期后開始迅速地克隆性擴(kuò)增，類似漩渦狀盤旋排布，經(jīng)傳代的細(xì)胞形態(tài)更趨一致，對數(shù)增長期細(xì)胞倍增時間為33～38h。具有強(qiáng)大的增殖擴(kuò)增能力是BMSCs一個重要的生物學(xué)特征，其可穩(wěn)定傳至20～25代而不改變細(xì)胞性狀，Conget等[26]檢測人BMSCs中約有20%的細(xì)胞處于靜止期（G0期），此比例足以維持增殖分化所需的細(xì)胞供給。Colter等[27]報道極低密度培養(yǎng)能保持BMSCs的增殖力，20ml的骨髓樣本經(jīng)3代6周的培養(yǎng)可擴(kuò)增2×109倍，達(dá)1013個細(xì)胞，相當(dāng)于成年人體細(xì)胞總數(shù)。具有多向分化的潛能是BMSCs最重要的生物學(xué)特征，近年來已被大量研究所證實(shí)。在適宜的體內(nèi)或體外環(huán)境下BMSCs不僅可以分化為間充質(zhì)組織，還保持有內(nèi)外胚層的組織發(fā)育分化潛能，可以分化為神經(jīng)系統(tǒng)、肝臟、肺臟、上皮組織等。Friedenstein首先證實(shí)了BMSCs具有分化為骨、軟骨、纖維組織的能力。有學(xué)者在單層培養(yǎng)條件下大量擴(kuò)增BMSCs，也有學(xué)者在單層培養(yǎng)下對BMSCs 進(jìn)行定向分化誘導(dǎo)。Worster等[28]對來源于馬的BMSCs定向誘導(dǎo)成軟骨細(xì)胞，檢測到軟骨細(xì)胞特征標(biāo)識物及觀察到具有軟骨細(xì)胞形態(tài)的細(xì)胞，但未觀測到軟骨樣組織形成。Yoo等[29]對體外單層或聚集立體培養(yǎng)下的成人BMSCs進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)在其他條件相同時，立體培養(yǎng)的BMSCs發(fā)生了定向軟骨分化，而單層培養(yǎng)則無軟骨形成。Liechty等[30]將人BMSCs移植入早期妊娠的胎羊，異種的細(xì)胞入住多種組織存活達(dá)13 個月，并按接種部位特異性地分化為軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、肌細(xì)胞、心肌細(xì)胞，說明BMSCs不僅保持了多分化潛能且具有獨(dú)特的免疫學(xué)特性。

3.2 脂肪干細(xì)胞：脂肪組織中可分離出外形類似成纖維細(xì)胞樣的脂肪干細(xì)胞，其在體外培養(yǎng)時有穩(wěn)定的增殖速度且不易老化。經(jīng)免疫熒光法和流式細(xì)胞計數(shù)分析確定，這些細(xì)胞起源于間充質(zhì)細(xì)胞，它們在TGF-β、維生素C和地塞米松存在并通過立體培養(yǎng)可向軟骨細(xì)胞分化 [31]。高濃度微塊培養(yǎng)[32]或?qū)⑵浣臃N在藻酸鹽[33-34]、瓊脂糖[33]和膠原支架[33，35]時分化可以實(shí)現(xiàn)。體外培養(yǎng)時，成軟骨誘導(dǎo)的脂肪衍生干細(xì)胞（ADSCs）可產(chǎn)生軟骨特異性細(xì)胞外基質(zhì)，并且存在均一的張力和剪切模量以及硫酸化的GAGs沉積[33]。Masuoka等證實(shí)，將ADSCs接種于Ⅰ型膠原構(gòu)成的蜂窩狀支架，在兔身上構(gòu)建的透明軟骨可修復(fù)全層軟骨缺損[35]。此外，一種新的彈力膠原樣多肽已被證明能在無培養(yǎng)基的情況下促進(jìn)ADSCs向軟骨分化[36]，培養(yǎng)兩周后其聚集的硫酸化GAGs和Ⅱ型膠原量與在標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基培養(yǎng)的情況類似。

3.3 胚胎干細(xì)胞：胚胎干細(xì)胞來源于植入子宮前的胚胎，可來自早期胚胎的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)或尿生殖嵴， 是一種可在體外長期培養(yǎng)并保持高度分化潛能的細(xì)胞。目前，人胚胎干細(xì)胞的細(xì)胞系己成功建立。胚胎干細(xì)胞是全能干細(xì)胞， 可分化為三個胚層所有類型的細(xì)胞， 種植于體內(nèi)可形成包含三胚層細(xì)胞的畸胎瘤。改變體外培養(yǎng)條件， 可使胚胎干細(xì)胞向不同的細(xì)胞系分化。己有文獻(xiàn)報道胚胎干細(xì)胞在BMP-2和BMP-4的作用下分化為軟骨細(xì)胞[37]。但使用胚胎干細(xì)胞作為組織工程的種子細(xì)胞主要是存在倫理學(xué)問題， 此外， 如何控制干細(xì)胞向特定類型細(xì)胞分化，分化后的種子細(xì)胞在宿主體內(nèi)是否具有致瘤性等問題仍值得深入研究。在軟骨組織工程的潛在種子細(xì)胞中， 干細(xì)胞與已分化的成熟軟骨細(xì)胞相比， 除具有更強(qiáng)的增殖能力外， 還具有再生潛能， 可維持整個生命過程中細(xì)胞的更新和正常功能， 因而干細(xì)胞作為種子細(xì)胞可能更具優(yōu)勢。

4轉(zhuǎn)基因細(xì)胞

細(xì)胞的生長、定向分化和活性維持均需生長因子的調(diào)控。利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將生長因子基因轉(zhuǎn)入種子細(xì)胞， 轉(zhuǎn)基因細(xì)胞可在缺損局部持續(xù)表達(dá)高生物活性的內(nèi)源性生長因子， 調(diào)控其自身增殖分化， 延緩體外培養(yǎng)種子細(xì)胞的老化及去分化， 同時促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖、分化， 提高修復(fù)質(zhì)量。Mason等[38]首先報道用基因治療和組織工程法結(jié)合修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨。以逆轉(zhuǎn)錄病毒為載體把BMP27脫氧核糖核酸導(dǎo)入兔骨髓干細(xì)胞，種植至PGA支架培養(yǎng)后，移植至兔關(guān)節(jié)軟骨損傷模型，8～12 周軟骨基本修復(fù)。Davidson等[39]用FGF218通過其受體3促進(jìn)了軟骨細(xì)胞生長。基因轉(zhuǎn)染可以用來調(diào)控軟骨種子細(xì)胞增殖和維持其表型， 軟骨細(xì)胞、間充質(zhì)干細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞均可作基因治療的受體細(xì)胞。通過體外軟骨細(xì)胞轉(zhuǎn)染基因， 既可對軟骨基質(zhì)的結(jié)構(gòu)蛋白的突變起到補(bǔ)償，還可以釋放細(xì)胞因子增加基質(zhì)的合成， 促進(jìn)軟骨的修復(fù)， 又可對抗局部炎癥的發(fā)生。將具有免疫抑制作用的基因轉(zhuǎn)入種子細(xì)胞可克服同種異體甚至異種細(xì)胞的免疫原性， 大大地拓展了軟骨組織工程種子細(xì)胞的范圍。

5展望

目前， 雖然對何種來源的細(xì)胞作為軟骨組織工程的首選種子細(xì)胞仍有爭議， 軟骨組織工程種子細(xì)胞的許多問題尚待解決，如：種子細(xì)胞的改造、種子細(xì)胞培養(yǎng)擴(kuò)增技術(shù)的完善，如何延長細(xì)胞的壽命、降低細(xì)胞抗原性及增強(qiáng)宿主免疫耐受等。但目前一般認(rèn)為， 隨著體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的成熟， 大家公認(rèn)的體外培養(yǎng)的自體細(xì)胞已經(jīng)運(yùn)用于臨床， 且發(fā)揮了一定的作用。人胚胎干細(xì)胞和轉(zhuǎn)基因細(xì)胞具有巨大的應(yīng)用前景， 已開始逐漸成為軟骨組織工程學(xué)研究的熱點(diǎn)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Jadlowiec JA，Celil AB，Hollinger JO.Bone tissue engineering：recent advances and promising therapeutic agents [J].Expert Opin Biol Ther，2003，3（3）：409-423.

[2]Nicoll SB，WedrychowskaA，SmithNR，et al.Modulation of proteoglycan and collagen profiles in human dermal fibroblasts by high density micromass culture and treatment with lactic acid suggests change to a chondrogenic phenotype [J].Connect Tissue Res，2001，42（1）：59-69.

[3]Chung C，Burdick JA.Engineering cartilage tissue [J].Adv Drug Deliv Rev，2008，60（2）：243-262.

[4]Van Osch GJ，Mandl EW，Jahr H，et al.Considerations on the use of ear chondrocytes as donor chondrocytes for cartilage tissue engineering [J].Biorheology，2004，41（3-4）：411-421.

[5]Panossian A，AshikuS，KirchhoffCH，et al.Effects of cell concentration and growth period on articular and ear chondrocyte transplants for tissue engineering [J].Plast Reconstr Surg，2001，108（2）：392-402.

[6]Yuan T，Luo H，Tan J，et al.The effect of stress and tissue fluid microenvironment on allogeneic chondrocytes in vivo and the immunological properties of engineered cartilage [J].Biomaterials，2011，32（26）：6017-6024.

[7]Gong YY，Xue JX，Zhang WJ，et al.A sandwich model for engineering cartilage with acellular cartilage sheets and chondrocytes [J].Biomaterials，2011，32（9）：2265-2273.

[8]Kafienah W，Jakob M，Demarteau O，et al.Three-dimensional tissue engineering of hyaline cartilage： comparison of adult nasal and articular chondrocytes [J].Tissue Eng，2002，8（5）：817-826.

[9]Hicks DL，Sage AB，Schumacher BL，et al.Growth and phenotype of low-density nasal septal chondrocyte monolayers [J].Otolaryngol Head Neck Surg，2005，133（3）：417-422.

[10]Miot S，Woodfield T，Daniels AU，et al.Effects of scaffold composition and architecture on human nasal chondrocyte redifferentiation and cartilaginous matrix deposition [J].Biomaterials，2005，26（15）：2479-2489.

[11]Vinatier C，Magne D，Moreau A，et al.Engineering cartilage with human nasal chondrocytes and a silanized hydroxypropyl methylcellulose hydrogel [J].J Biomed Mater Res A，2007，80（1）：66-74.

[12]Richmon JD，Sage AB，Shelton E，et al.Effect of growth factors on cell proliferation， matrix deposition， and morphology of human nasal septal chondrocytes cultured in monolayer [J].Laryngoscope，2005，115（9）：1553-1560.

[13]Isogai N，Kusuhara H，Ikada Y，et al.Comparison of different chondrocytes for use in tissue engineering of cartilage model structures [J].Tissue Eng，2006，12（4）：691-703.

[14]Tay AG，F(xiàn)arhadi J，Suetterlin R，et al.Cell yield proliferation， and postexpansion differentiation capacity of human ear， nasal， and rib chondrocytes [J].Tissue Eng，2004，10（5-6）：762-770.

[15]Johnson TS，Xu JW，Zaporojan VV，et al.Integrative repair of cartilage with articular and nonarticular chondrocytes [J].Tissue Eng，2004，10（9-10）：1308-1315.

[16]Yan H，Yu C.Repair of full-thickness cartilage defects with cells of different origin in a rabbit model [J].Arthroscopy，2007，23（2）：178-187.

[17]French MM，Rose S，Canseco J，et al.Chondrogenic differentiation of adult dermal fibroblasts [J].Ann Biomed Eng，2004，32（1）：50-56.

[18]Yates KE，F(xiàn)orbes RL，Glowacki J.New chondrocyte genes discovered by representational difference analysis of chondroinduced human fibroblasts [J].Cells Tissues Organs，2004，176（1-3）：41-53.

[19]Lee KH，Song SU，Hwang TS，et al. Regeneration of hyaline cartilage by cell-mediated gene therapy using transforming growth factor beta 1-producing fibroblasts [J]. Hum Gene Ther，2001，12 （14）：1805-1813.

[20]Deng Y，Hu JC，Athanasiou KA.Isolation and chondroinduction of a dermis-isolated， aggrecan sensitive subpopulation with high chondrogenic potential [J]. Arthritis Rheum，2007，56（1）：168-176.

[21]Johnstone B，Hering TM，Caplan AI，et al.In vitro chondrogenesis of bone marrow-derived mesenchymal progenitor cells [J]. Exp Cell Res，1998，238（1）：265-272.

[22]Zuk PA，Zhu M，Mizuno H，et al.Multilineage cells from human adipose tissue：implications for cell-based therapies [J].Tissue Eng，2001，7（2）：211-228.

[23]Nawata M，Wakitani S，Nakaya H，et al.Use of bone morphogenetic protein 2 and diffusion chambers to engineer cartilage tissue for the repair of defects in articular cartilage [J].Arthritis Rheum，2005，52（1）：155-163.

[24]Sakaguchi Y，Sekiya I，Yagishita K，et al.Comparison of human stem cells derived from various mesenchymal tissues： superiority of synovium as a cell source [J].Arthritis Rheum，2005，52（8）：2521-2529.

[25]Fukumoto T，Sperling JW，Sanyal A，et al.Combined effects of insulin-like growth factor-1 and transforming growth factor-beta1 on periosteal mesenchymal cells during chondrogenesis in vitro [J].Osteoarthritis Cartilage，2003，11（1）：55-64.

[26]Conget PA，Minguell JJ.Phenotypicaland functional properties of human bonemarrow mesenchymal progenitor cells [J].J Cell Physiol，1999，181（1）：67-73.

[27]Colter DC，Class R，DiGirolamo CM，et al.Rapid expansion of re2 cycling stemcells in cultures of plastic-adherent cell s f rom human bone marrow [J].Proc Nat Acad Sci USA，2000，97（7）：3213-3218.

[28]Worster AA，Nixon AJ，Brower To land BD，et al.Effect of transforming growth facto rbeta1 on chondrogenic differentiation of cultured equine mesenchymal stem cells [J].Am J VetRes，2000，61（9）：1003- 1011.

[29]Yoo JU，Bart hel TS，Nish imura K，et al.The chondrogenicpotential of human bone-marrow derived mesenchymal progenitorcells [J]. J Bone Joint Surg（Am），1998，8（12）：17-25.

[30]Liechty KW，MacKenzie TC，ShaabanAF，et al.Human mesenchymal stemcells engraft and demonst rate sitespecific differentiation after in utero transplantation in sheep [J].Nat Med，2000，6（11）：1282-1286.

[31]Zuk PA，Zhu M，Ashjian P，et al.Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells [J].Mol Biol Cell，2002，13（12）：4279-4295.

[32]Chiou M，Xu Y，Longaker MT.et al.Mitogenic and chondrogenic effects of fibroblast growth factor-2 in adipose-derived mesenchymal cells [J].Biochem Biophys Res Commun，2006，343（2）：644-652.

[33]Awad HA，Wickham MQ，Leddy HA，et al.Chondrogenic differentiation of adipose-derived adult stem cells in agarose， alginate， and gelatin scaffolds [J].Biomaterials，2004，25（16）：3211-3222.

[34]Lin Y，Luo E，Chen X，et al.Molecular and cellular characterization during chondrogenic differentiation of adipose tissue-derived stromal cells in vitro and cartilage formation in vivo [J].J Cell Mol Med，2005，9（4）：929-939.

[35]Masuoka K，Asazuma T，Hattori H，et al.Tissue engineering of articular cartilage with autologous cultured adipose tissue-derived stromal cells using atelocollagen honeycomb-shaped scaffold with a membrane sealing in rabbits [J].J Biomed Mater Res B Appl Biomater，2006，79（1）：25-34.

[36]Betre H，Ong SR，Guilak F，et al.Chondrocytic differentiation of human adipose-derived adult stem cells in elastin-like polypeptide [J].Biomaterials，2006，27（1）：91-99.

[37]Kramer J，Hegert C，Guan K，et al.Embryonic stem cell - derivedchon drogenic differentiation in vitro ： activation by BMP-2 and BMP-4 [J].Mech Dev，2000，92（2）：193-205.

[38]Mason JM，Breitbart AS，Barcia M，et al.Cartilage and bone regeneration using gene enhanced tissue engineering [J].Clin Orthop Relat Res，2000，（379 Suppl）：S171-178.

[39]Davidson D，Blanc A，F(xiàn)ilion D，et al.Fibroblast growth factor （FGF） 18 signals through FGF receptor 3 to promote chondrogenesis [J]. J Biol Chem，2005，280（21）：20509-20515.

[收稿日期]2012-05-28[修回日期]2012-07-13

編輯/李陽利