陜西衛(wèi)矛組織培養(yǎng)的影響因素探析

袁云香

摘要：為探討影響陜西衛(wèi)矛（Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ Ｍａｘｉｍ．）愈傷組織誘導(dǎo)的因素，找到陜西衛(wèi)矛愈傷組織培養(yǎng)方法，以陜西衛(wèi)矛莖段和葉片為外植體，研究不同外植體、不同培養(yǎng)基及不同植物生長調(diào)節(jié)劑種類及配比對陜西衛(wèi)矛愈傷組織誘導(dǎo)和生長的影響。結(jié)果表明，不同外植體中，莖段愈傷組織誘導(dǎo)率最高，達(dá)８８．２％，且發(fā)生最早，愈傷組織化程度高，故莖段是誘導(dǎo)愈傷組織的最佳外植體；ＭＳ培養(yǎng)基有利于愈傷組織的誘導(dǎo)；ＭＳ＋３．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋３０ ｇ／Ｌ蔗糖最有利于陜西衛(wèi)矛愈傷組織的誘導(dǎo)。

關(guān)鍵詞：陜西衛(wèi)矛（Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ Ｍａｘｉｍ．）；組織培養(yǎng)；影響因素

中圖分類號：Ｑ９４９．７５４．７；Ｑ８１３．１＋２ 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）06－1265-03

Study on Tissue Culture of Different Organs of Euonymus schensianus

ＹＵＡＮ Ｙｕｎ－ｘｉａｎｇ

（Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｗｅｉｎａｎ Ｔｅａｃｈｅｒｓ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｗｅｉｎａｎ ７１４０００， Ｓｈａａｎｘｉ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｉｎｆｌｕｅｎｔｉａｌ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ Ｍａｘｉｍ. ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｔｈｏｄ． Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｅｍｓ ａｎｄ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ Ｅ． ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ， ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｅｘｐｌａｎｔｓ， ｂａｓｉｃ ｍｅｄｉｕｍ， ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｃａｌｌｕｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｓｔｅｍ ｈａｄ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ as ｉｔｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｗａｓ ８８．２％ ａｎｄ ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｓｐｒｏｕｔｅｄ ｔｈｅ ｅａｒｌｉｅｓｔ． ＭＳ＋６－ＢＡ ３．０ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．２ ｍｇ／Ｌ＋ ３０ ｇ／Ｌ ｗａｓ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒｍｕｌａ ｆｏｒ ｃａｌｌｕｓ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｅ． ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ Ｍａｘｉｍ．； ｅｘｐｌａｎｔｓ； ｃａｌｌｕｓ； ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ

陜西衛(wèi)矛（Ｅｕｏｎｙｍｕｓ ｓｃｈｅｎｓｉａｎｕｓ Ｍａｘｉｍ．）為衛(wèi)矛科落葉灌木，又叫金線吊蝴蝶、金絲吊燕。其果序下垂，果色鮮紅艷麗，果翅形狀奇特酷似蝴蝶，是有趣而奇特的觀果佳品。陜西衛(wèi)矛適應(yīng)性強(qiáng)，喜光、較耐陰、耐干旱、耐修剪，但其繁殖比較麻煩，目前廣泛栽培于陜西、甘肅、湖北、四川等省份［１－３］。常規(guī)栽培方法由于受到生長條件及時間的限制，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足市場對其苗木的需求。而組織培養(yǎng)技術(shù)因其不受時間條件的限制可以快速獲得大量的種苗而倍受青睞。

試驗采用不同外植體研究不同培養(yǎng)基及不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑對陜西衛(wèi)矛愈傷組織誘導(dǎo)的影響，為進(jìn)一步研究陜西衛(wèi)矛愈傷組織再分化打下基礎(chǔ)。

１材料與方法

１．１材料

以渭南師范學(xué)院校園栽培當(dāng)年生陜西衛(wèi)矛嫩枝條為試驗材料。

１．２方法

１．２．１外植體的滅菌剪取一年生陜西衛(wèi)矛莖段和葉片，放入燒杯中加入適量洗衣粉，在自來水下沖洗２ ｈ左右，再用去離子水沖洗５ ｍｉｎ，于超凈工作臺內(nèi)，先用體積分?jǐn)?shù)為７５％的乙醇處理２０ ｓ，再用１ ｇ／Ｌ ＨｇＣｌ２處理４ ｍｉｎ，然后用無菌水沖洗５～６次，將莖段切成１．０～１．５ ｃｍ長、葉片剪成１．５ ｃｍ × １．５ ｃｍ大小作為外植體，每瓶接種４個外植體于不同的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。

１．２．２愈傷組織的誘導(dǎo)

１）不同外植體與不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選。誘導(dǎo)培養(yǎng)基基本成分為Ｎ６、ＭＳ、ＮＭＢ、１／２ＭＳ。其中，１／２ＭＳ為１／２的ＭＳ大量元素＋微量元素＋有機(jī)元素，ＮＭＢ為Ｎ６大量元素＋ＭＳ微量元素＋Ｂ５有機(jī)元素；４種基本培養(yǎng)基均添加５００ ｍｇ／Ｌ脯氨酸＋３００ ｍｇ／Ｌ水解酪蛋白＋３ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋３０ ｇ／Ｌ 蔗糖＋７ ｇ／Ｌ瓊脂，ｐＨ ５．８。在（２２±１）℃、光照度１ ５００～２ ０００ ｌｘ、光照時間１３ ｈ／ｄ條件下誘導(dǎo)愈傷組織形成，４周后統(tǒng)計誘導(dǎo)率并密切觀察愈傷組織生長情況。愈傷組織誘導(dǎo)率=（愈傷組織塊數(shù)/接種的外植體數(shù)）×100%。每個試驗重復(fù)３次。

２）不同濃度植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的篩選。在已篩選出的最適愈傷組織誘導(dǎo)基本培養(yǎng)基中，添加濃度范圍為１．０、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、５．０ ｍｇ／Ｌ的６－ＢＡ和濃度范圍為０．１、０．２、０．５ ｍｇ／Ｌ的ＮＡＡ，配制成２１種培養(yǎng)基組合。在（２２±１）℃、光照度為１ ５００～２ ０００ ｌｘ、光照時間為１３ ｈ／ｄ的條件下誘導(dǎo)愈傷組織形成，４周后統(tǒng)計誘導(dǎo)率并密切觀察愈傷組織生長情況。每個試驗重復(fù)３次。

２結(jié)果與分析

２．１不同外植體與不同培養(yǎng)基對陜西衛(wèi)矛愈傷組織誘導(dǎo)的影響

將陜西衛(wèi)矛的莖段和葉片分別接種于不同的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，表１結(jié)果顯示：①莖段誘導(dǎo)率最高，在愈傷組織誘導(dǎo)過程中的反應(yīng)最早，接種第３天開始膨大，莖段上端切口處變白，７ ｄ左右就能在莖的上端長出愈傷組織，且愈傷組織化程度最高。而葉片整體卷曲膨大，愈傷組織發(fā)生較遲，接種２周左右在葉片主葉脈處產(chǎn)生愈傷組織，且愈傷組織化程度低；②不同外植體產(chǎn)生的愈傷組織狀態(tài)不同，莖段產(chǎn)生致密、淡綠色的胚性愈傷組織；葉片產(chǎn)生黃綠色偏白的顆粒狀愈傷組織；③幾種基本培養(yǎng)基以ＭＳ的誘導(dǎo)率最高，莖段達(dá)８８．２％，葉片達(dá)６６．５％；ＮＭＢ和１／２ＭＳ次之；Ｎ６誘導(dǎo)率最低，莖段為６６．４％，而葉片只有５１．２％。莖段和葉片對不同基本培養(yǎng)基的反應(yīng)較一致。

２．２不同濃度６－ＢＡ和ＮＡＡ對陜西衛(wèi)矛愈傷組織誘導(dǎo)的影響

激素是影響植物組織培養(yǎng)的關(guān)鍵因素，細(xì)胞分裂素和生長素的種類和相對濃度不但決定器官脫分化和再分化的方向，而且影響產(chǎn)生的愈傷組織狀態(tài)和再分化能力。試驗結(jié)果（表２）顯示，６－ＢＡ與ＮＡＡ配合使用誘導(dǎo)產(chǎn)生的愈傷組織致密、為胚性愈傷組織； ３．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ的植物生長調(diào)節(jié)劑組合愈傷組織誘導(dǎo)率較高。說明６－ＢＡ和ＮＡＡ在陜西衛(wèi)矛莖段和葉片愈傷組織誘導(dǎo)中都起促進(jìn)作用。

３討論

關(guān)于衛(wèi)矛科植物的組織培養(yǎng)研究較多［４，５］，而陜西衛(wèi)矛愈傷組織再分化研究報道不多。胡麗娟等［３］研究了陜西衛(wèi)矛的組織培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)腋芽容易獲得更多芽苗。本研究發(fā)現(xiàn)陜西衛(wèi)矛不同外植體在愈傷組織誘導(dǎo)過程中生長情況不同，同一外植體不同的濃度激素處理其生長情況也存在不同程度的差異。在不同外植體誘導(dǎo)愈傷組織時，作外植體時莖段與葉片相比縮短了愈傷組織誘導(dǎo)期，誘導(dǎo)率較高，表明莖段為最佳外植體，其次是葉片。外植體在愈傷組織誘導(dǎo)的過程中，對激素種類和濃度的反應(yīng)差別較大。６－ＢＡ和NAA能促進(jìn)陜西衛(wèi)矛莖段和葉片愈傷組織誘導(dǎo)率。最適合外植體愈傷組織誘導(dǎo)的基本培養(yǎng)基為ＭＳ培養(yǎng)基，ＭＳ＋３．０ ｍｇ／Ｌ ６－ＢＡ＋０．２ ｍｇ／Ｌ ＮＡＡ＋３０ ｇ／Ｌ蔗糖培養(yǎng)條件下形成的愈傷組織多，愈傷組織質(zhì)量高，正在進(jìn)一步研究陜西衛(wèi)矛愈傷組織增殖及再分化，以期獲得大量愈傷組織再生苗。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 王軍濤，郭建喜，查振道． 陜西衛(wèi)矛夏季嫁接試驗［Ｊ］． 陜西林業(yè)科技，２００８（３）：３５－３６．

［２］ 劉亞芬，郭甲科．“蝴蝶樹”陜西衛(wèi)矛［Ｊ］．中國花卉園藝，２０１０（４）：３７．

［３］ 胡麗娟，郭軍戰(zhàn)，王文君，等． 陜西衛(wèi)矛的組織培養(yǎng)及植株再生［Ｊ］． 植物生理學(xué)通訊，２０１０，４６（２）：１５３－１５４．

［４］ 張麗杰，賈斌英，崔建國，等． 桃葉衛(wèi)矛的組織培養(yǎng)及植株再生［Ｊ］． 植物生理學(xué)通訊，２００７，４３（６）：１１２６．

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