合歡花揮發(fā)油化學(xué)成分及提取液抑菌作用研究

王一卓 羅慧 趙士賢

摘要：采用水蒸氣蒸餾法提取合歡（Ａｌｂｉｚｚｉａ ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ Ｄｕｒａｚｚ.）花揮發(fā)油，并用氣相色譜－質(zhì)譜（ＧＣ－ＭＳ）法進(jìn)行分析，利用濾紙片法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)。結(jié)果表明，合歡花揮發(fā)油中共鑒定出１６種成分，包括二十一烷（２４．７６２％）、植酮（２２．９６８％）、二十八烷（１６．１１８％）、二十四烷（８．４３８％）和棕櫚酸甲酯（６．６８９％）。合歡花提取液對鰻弧菌、哈維氏弧菌、燦爛弧菌、高盧弧菌、巨大芽孢桿菌均有抑制作用，其作用隨濃度升高而增強(qiáng)。

關(guān)鍵詞：合歡（Ａｌｂｉｚｚｉａ ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ Ｄｕｒａｚｚ.）；揮發(fā)油；氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用；提取液；抑菌作用

中圖分類號：ＴＳ２２４．４文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Ａ文章編號：0439－８114（２０12）06－1245-03

Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ in Ｖｏｌａｔｉｌｅ Ｏｉｌ ａｎｄ ｔｈｅ Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ Ｅｘｔｒａｃｔｓ ｆｒｏｍ Ｆｌｏｗｅｒ ｏｆ Ａｌｂｉｚｚｉａ ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ

ＷＡＮＧ Ｙｉ－ｚｈｕｏ，ＬＵＯ Ｈｕｉ，ＺＨＡＯ Ｓｈｉ－ｘｉａｎ

（Ｍａｒｉｎｅ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｔ Ｗｅｉｈａｉ， Ｗｅｉｈａｉ ２６４２０９， Ｓｈａｎｇｄｏｎｇ， Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈｅ ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ ｆｒｏｍ ｆｌｏｗｅｒ ｏｆ Ａｌｂｉｚｚｉａ ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ Ｄｕｒａｚｚ. ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｂｙ ｓｔｅａｍ ｄｉｓｔｉｌｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅｄ ｂｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ． Ｔｈｅ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔ ｗａｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｆｉｌｔｅｒ ｐａｐｅｒ ｍｅｔｈｏｄ． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ １６ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｈｅｎｅｉｃｏｓａｎｅ（２４．７６２％）， ２－ｐｅｎｔａｄｅｃａｎｏｎｅ， ６，１０，１４－ｔｒｉｍｅｔｈｙｌ （２２．９６８％）， ｏｃｔａｃｏｓａｎｅ （１６．１１８％）， ｔｅｔｒａｃｏｓａｎｅ （８．４３８％） ａｎｄ ｈｅｘａｄｅｃａｎｏｉｃ ａｃｉｄ， ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ （６．６８９％）； ａｎｄ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ａｇａｉｎｓｔ Ｖｉｂｒｉｏ ａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍ， Ｖ. ｈａｒｖｅｙｉ， Ｖ. ｓｐｌｅｎｄｉｄｕｓ， Ｖ. ｇａｌｌｉｃｕｓ ａｎｄ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ． Ｔｈｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔｓ ｗｅｒｅ ｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｔｒａｃｔ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ａｌｂｉｚｚｉａ ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ Ｄｕｒａｚｚ.； ｖｏｌａｔｉｌｅ ｏｉｌ； ＧＣ－ＭＳ； ｅｘｔｒａｃｔｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ； ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ

合歡花為豆科合歡屬植物合歡（Ａｌｂｉｚｚｉａ ｊｕｌｉｂｒｉｓｓｉｎ Ｄｕｒａｚｚ.）的干燥花序，是一種較為常見的中藥，具有寧神作用，主要用于治療心神不安、憂郁失眠［１］、郁結(jié)胸悶、活血消腫。藥理研究證明，合歡花水提液具有明顯的鎮(zhèn)靜、催眠［２］和抗抑郁［３］作用。本試驗(yàn)通過ＧＣ－ＭＳ法分析了水蒸氣蒸餾法獲得的合歡花揮發(fā)油揮發(fā)成分，并采用濾紙片法分析了提取液的體外抑菌效果，以期為合歡花在化工、食品添加劑以及抗菌藥物等方面的開發(fā)應(yīng)用提供參考。

１材料與方法

１．１主要試劑與材料

合歡花，產(chǎn)自江蘇某地，鮮樣自然陰干后，粉碎待用；牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（牛肉膏３ ｇ，蛋白胨１０ ｇ，氯化鈉５ ｇ，瓊脂１８ ｇ，水１ ０００ ｍＬ，ｐＨ ７．０～７．２），２２１６Ｅ培養(yǎng)基（蛋白胨５ ｇ，酵母膏１ ｇ，硫酸亞鐵０．０１ ｇ，瓊脂１８ ｇ，陳海水１ ０００ ｍＬ，ｐＨ ７．６～７．８）；９５％（體積分?jǐn)?shù)，下同）分析純乙醇。

１．２儀器

安捷倫７８９０－５９７５氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國安捷倫科技公司）；揮發(fā)油提取器；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；恒溫培養(yǎng)箱等。

１．３菌種

巨大芽孢桿菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅｒｉｕｍ）、鰻弧菌（Ｖｉｂｒｉｏ ａｎｇｕｉｌｌａｒｕｍ）、哈維氏弧菌（Ｖ. ｈａｒｖｅｙｉ）、燦爛弧菌（Ｖ. ｓｐｌｅｎｄｉｄｕｓ）、高盧弧菌（Ｖ. ｇａｌｌｉｃｕｓ），由山東大學(xué)威海分校海洋學(xué)院微生物實(shí)驗(yàn)室提供。

１．４方法

１．４．１揮發(fā)油的提?。郏?，５］稱取合歡花１００．０ ｇ于揮發(fā)油提取器中，加入９００ ｍＬ水，５０ ℃下回流５ ｈ，所得揮發(fā)油于低溫下保存，待測。

１．４．２ 氣相色譜條件色譜柱為ＨＰ－５ＭＳ ５％ Ｐｈｅｎｙｌ Ｍｅｔｈｙｌ Ｓｉｌｏｘａｎｅ（３０ ｍ×０．２５ ｍｍ×０．２５ μｍ） 彈性石英毛細(xì)管柱，升溫程序?yàn)椋撼鯗兀福?℃，保持１ ｍｉｎ，以２０ ℃／ｍｉｎ升至１８０℃，保持５ ｍｉｎ，再以５℃／ｍｉｎ升至２６０ ℃，保持５ ｍｉｎ，進(jìn)樣口溫度為２５０ ℃，載氣為氦氣，柱前壓為７２ ｋＰａ， 進(jìn)樣量為１ μＬ ，流速為１．２ ｍＬ／ｍｉｎ。

１．４．３質(zhì)譜條件離子源為ＥＩ源，離子源溫度為２３０ ℃，電子能量７０ ｅＶ，接口溫度２７０ ℃，溶劑延遲時(shí)間５ ｍｉｎ，掃描質(zhì)量范圍為６０～５５０ ａｍｕ。

１．４．４提取液的制備稱?。玻?ｇ合歡花，置于圓底燒瓶中，加入２００ ｍＬ ９５％乙醇，５０ ℃回流３ ｈ，過濾，收集濾液；濾渣加入１５０ ｍＬ ９５％乙醇同條件提?。?ｈ，過濾，合并提取液，減壓蒸發(fā)，獲得提取液［６］。

１．４．５抑菌試驗(yàn)活化菌種后，用滅菌棉棒蘸取少量菌落在固體培養(yǎng)基上密集劃線。用打孔器將濾紙打成直徑為５ ｍｍ的濾紙片，濕熱滅菌后備用。然后用體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇將合歡花提取液原液配成系列濃度，用鑷子夾取濾紙片放入溶液中，浸泡２ ｈ后置于固體培養(yǎng)基上。每個(gè)培養(yǎng)皿中等距離擺放３個(gè)濾紙片，每個(gè)供試菌種作３組平行，用９５％乙醇作空白對照，放入培養(yǎng)箱中。巨大芽孢桿菌于３７ ℃下倒置培養(yǎng)２４ ｈ，鰻弧菌、哈維氏弧菌、燦爛弧菌和高盧弧菌于２８ ℃下倒置培養(yǎng)２４ ｈ，測量抑菌圈直徑，取平均值。

２結(jié)果與分析

２．１揮發(fā)油成分

對合歡花揮發(fā)油進(jìn)行ＧＣ－ＭＳ分析，其總離子流見圖１，共檢測出１８個(gè)峰，所得質(zhì)譜經(jīng)ＮＩＳＴ標(biāo)準(zhǔn)譜庫數(shù)據(jù)系統(tǒng)分析處理，確定１６種組分，按照面積歸一法確定各組分的相對百分含量，結(jié)果見表１。

２．２抑菌試驗(yàn)

抑菌試驗(yàn)結(jié)果如圖２所示，由圖可知，合歡花乙醇提取液對５種供試菌均有抑制作用，且隨著提取液濃度增加抑菌圈直徑增大。當(dāng)提取液濃度小于０．１ ｍｇ／ｍＬ時(shí)，對燦爛弧菌和高盧弧菌的抑制作用較巨大芽孢桿菌、鰻弧菌和哈維氏弧菌明顯；當(dāng)提取液濃度大于０．１0 ｍｇ／ｍＬ時(shí)，對鰻弧菌和哈維氏弧菌的作用有所提高；當(dāng)提取液濃度大于０．２５ ｍｇ／ｍＬ時(shí)，對幾種供試菌的抑制作用均明顯增強(qiáng)。合歡花乙醇提取液對５種菌的抑制作用有所不同，對４種海洋弧菌的抑制作用明顯強(qiáng)于巨大芽孢桿菌。

３討論

從合歡花揮發(fā)油中共鑒定出１６種成分，其中含量較高的是二十一烷（２４．７26％）、植酮（２２．９６８％）、二十八烷（１６．１１８％）、二十四烷（８．４３８％）和棕櫚酸甲酯（６．６８９％）。在這１６種組分中，２，６－二叔丁基對甲苯酚具有抗氧化性，可作為食品中的抗氧化劑［７］，鄰苯二甲酸二異丁酯是常用增塑劑［８］，２，２′－亞甲基－雙（４－甲基－６－叔丁基苯酚）簡稱２２４６，是合成橡膠和石油產(chǎn)品中的常見抗氧添加劑［９，１０］。

抑菌試驗(yàn)選取的菌株包括鰻弧菌、哈維氏弧菌、燦爛弧菌、高盧弧菌和巨大芽孢桿菌，既有革蘭氏陰性菌又有革蘭氏陽性菌，因此通過抑菌試驗(yàn)，可較為全面地評價(jià)合歡花提取物的抑菌作用。此外，鰻弧菌、哈維氏弧菌和燦爛弧菌是3種常見的海洋致病菌。鰻弧菌是一種對魚類危害較大的病原菌，其流行范圍廣，在水產(chǎn)養(yǎng)殖中引起的危害也最大［１１］。哈維氏弧菌和燦爛弧菌會導(dǎo)致魚、蝦、貝、刺參等染病，給水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)造成損失［１２－１４］。長期以來，國內(nèi)外均以化學(xué)農(nóng)藥或者獸藥作為漁藥藥源，而多數(shù)藥物不僅難以降解，還會在水產(chǎn)動物體內(nèi)富集，因此對生態(tài)環(huán)境具有較大的負(fù)面影響。中草藥的天然成分副作用小，且多數(shù)有較好的殺菌效果，可以作為新魚藥的藥源進(jìn)行開發(fā)。本結(jié)果表明，合歡花提取液對常見海洋致病菌均有較好的抑菌作用，將為合理開發(fā)和利用合歡花資源提供了科學(xué)依據(jù)和參考。

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