高效液相色譜法測定胃樂寧片中麥角甾醇的含量

吳迎輝

南京老山藥業(yè)股份有限公司，江蘇 南京 211800

胃樂寧片含猴頭菌絲，具有養(yǎng)陰和胃作用，用于胃脘疼痛，痞滿，腹脹及胃、十二指腸潰瘍，慢性萎縮性胃炎等癥。［1］。為了保證臨床用藥效果，控制胃樂寧片的質(zhì)量，本實驗建立了高效液相色譜法測定胃樂寧片中麥角甾醇含量的方法。經(jīng)方法學(xué)考察證實該方法靈敏度高，重現(xiàn)性好，結(jié)果滿意。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀系統(tǒng)包括高效液相色譜儀 (Waters 515);P200高壓泵;Waters 2487紫外檢測器;色譜柱Hanbang C18(200*4.6mm 5μm);數(shù)據(jù)采集及處理采用HS色譜數(shù)據(jù)工作站V4.0+(杭州英譜科技)。

1.2 試藥

麥角甾醇對照品，上海純優(yōu)生物科技有限公司 (批號:20100509);胃樂寧片，南京老山藥業(yè)股份有限公司提供(批號:20110318，20110524，20110621，20110727);其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗［2］

色譜柱:HangBang C18(200*4.6mm 5μm);流動相:甲醇－水 (98:2);使用前以0.45μM微孔濾膜減壓過濾，檢測波長為UV284nm;流速為1ml/min。此條件下分離度＞2.0，理論塔板數(shù)按麥角甾醇峰計算應(yīng)不低于3500。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取麥角甾醇對照品8.06mg，置100 mL量瓶中，加流動相超聲使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得0.0806mg/ml對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密吸取本品10 g(約20片量)置100 mL容量瓶中，加流動相40mL，密塞，搖勻，超聲處理 (功率300W，頻率100Hz)60分鐘，放冷，用流動相稀釋至刻度，搖勻，用0.45μM微孔濾膜減壓過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.4 線性關(guān)系

取對照品溶液，分別進樣5、10、15、20、25μL，即相當于麥角甾醇0.403，0.806，1.209，1.612，2.015μg的對照品溶液，測定峰面積，以麥角甾醇質(zhì)量為橫坐標、峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得回歸方程以及線性范圍，分別為:Y=163986.2673X+453.6364，r=0.9999，麥角甾醇進樣量在0.403～2.015μg范圍內(nèi)峰面積與進樣量呈良好線性。

2.5 加樣回收率

精密吸取已知含量的樣品溶液5份，分別置50mL量瓶中，每份精密加入一定量對照品溶液，然后用流動相稀釋到刻度，照含量測定方法操作，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 胃樂寧片加樣回收率試驗結(jié)果

2.6 進樣精密度試驗

在上述色譜條件下，取麥角甾醇對照品溶液重復(fù)進樣8次10μL，記錄峰面積，RSD為1.94%。

2.7 重復(fù)性試驗

精密稱取同一批號的樣品 (批號:20110318)按照樣品測定的方法重復(fù)操作8次，測得麥角甾醇平均含量和RSD，結(jié)果表明，重復(fù)性試驗RSD為1.54% ，表明本法重現(xiàn)性很好。

2.8 穩(wěn)定性試驗

取樣品 (批號:20110318)新配的供試品溶液分別在0、2、4、8、16h進樣10μL，測定其中麥角甾醇的峰面積，結(jié)果RSD為1.25% ，表明供試品溶液在16 h穩(wěn)定。

2.9 樣品測定

取4批樣品，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，依上述色譜條件測定含量，分別進樣10μL，記錄色譜圖，按外標法計算樣品中麥角甾醇的含量。結(jié)果見表2。

表2 HPLC測定胃樂寧片中麥角甾醇的含量結(jié)果

3 討論

根據(jù)所測四批樣品的含量結(jié)果，胃樂寧片中麥角甾醇的平均含量為0.00885%，因此可規(guī)定胃樂寧片中麥角甾醇不得少于0.008%。本實驗曾用幾種方法處理樣品，結(jié)果以本文擬訂的方法結(jié)果最好，且操作簡便，故選用超聲處理(功率300W，頻率100Hz)60分鐘。麥角甾醇的分子光譜僅在284nm處有一中等強度的吸收峰，故選擇284nm為檢測波長。

［1］張聲生，王垂杰，孫志廣，等.胃樂寧片治療胃痛445例臨床觀察總結(jié)［J］.中華中醫(yī)藥雜志，2005，20(3):166－168.

［2］李迎雪，戴肖東，詹亞光.HPLC法測定猴頭菌菌絲體中麥角甾醇含量［J］.食用菌，2010(6):63－64.