HPLC法測定硫酸奈替米星的含量

顧 曄，杜 淵，金 新

1.江蘇無錫市產品質量監(jiān)督檢驗中心，江蘇無錫 214101

2.江蘇無錫市第三人民醫(yī)院，江蘇無錫 214041

3.江蘇無錫福祈制藥有限公司，江蘇無錫 214041

硫酸奈替米星為一半合成的氨基糖苷類廣譜抗生素。其作用機理是通過抑制敏感微生物的正常蛋白合成而起作用。

本品適用于敏感細菌所引起的包括新生兒，嬰兒，兒童等各年齡患者在內的嚴重或危及生命的細菌感染性疾病的短期治療。這些感染性疾病包括：1）復雜性泌尿道感染；2）敗血癥；3）皮膚軟組織感染；4）腹腔內感染；5）下呼吸道感染等。

因目前國內藥典2010版規(guī)定其原料含量測定的方法采用微生物檢定法[1]，但此方法操作繁瑣，影響因素多且測得結果穩(wěn)定性差，故本文采用美國藥典方法[2]，改用反相高效液相色譜測定方法，用于本品的含量測定，并進行方法驗證[3-4]，為控制該原料藥的質量提供了可靠依據。結果表明本法靈敏、準確且操作簡便。

1 儀器與試藥

美國Dionex公司UltiMate 3000型液相色譜儀。庚烷磺酸鈉批號31.03.12；磷酸批號31.12.14；乙腈批號為31.01.14，三種試劑均為色譜級供應商為默克。硫酸奈替米星樣品（自制，批號20120101，20120102，20120103）。

2 色譜條件

色譜柱：Dionex C18（250×4.6mm 5μ） ；流動相為0.5%稀磷酸（每毫升含有20.22g庚烷磺酸鈉）：乙腈（62：38）；流速：1.0ml/min；檢測波長為205nm，柱溫為35℃；進樣量為20μl。

3 溶液配制

1）系統(tǒng)適用性溶液：精密稱取硫酸奈替米星標準品和硫酸西索米星標準品各25mg，用流動相稀釋至25mLL；2）對照品儲備液：精密稱取硫酸奈替米星標準品100mg，用流動相稀釋至10mL；3）對照品溶液：精密稱取硫酸奈替米星標準品50mg，用流動相稀釋至50mL；4）供試品溶液：精密稱取硫酸奈替米星供試品50mg，用流動相稀釋至50mL。

4 專屬性試驗

取系統(tǒng)適用性溶液，注入液相色譜儀，記錄保留時間作為定性指標。硫酸奈替米星對照品的色譜圖見圖1，硫酸奈替米星色譜峰的保留時間為7.320min，硫酸西索米星色譜峰的保留時間為7.967 min，硫酸奈替米星與雜質硫酸西索米星完全分離，分離度為1.8（要求為應不小于1），理論塔板數(shù)按硫酸奈替米星峰計算為7471（要求為應大于3000）。

圖1

5 精密度試驗

精密稱取硫酸奈替米星標準品50mg，用流動相稀釋至50mL，連續(xù)進樣6次，記錄色譜圖，結果硫酸奈替米星的保留時間、峰面積的平均值分別為7.972、3993.338，RSD分別為0.08%、0.05%，精密度良好。見圖2。

圖2

6 線性試驗

分別精密量取對照品儲備溶液（a）0.2、0.5、1.0、1.5、2.0mL加入10mL容量瓶中并用流動相定容（分別相當于測試濃度的20%、50%、100%、150%、200%）。取上述溶液分別連續(xù)進樣2次，記錄稱樣量、峰面積，并計算平均值、回歸方程和相關系數(shù)，作出線性圖。結果表明在濃度 0.20052mg/mL～2.0052mg/ mL范圍內線性關系良好，得線性回歸方程Y=3783.8X+132.93，相關系數(shù)為0.9998。

7 準確度試驗

精密稱取25mg硫酸奈替米星對照品，用流動相溶解并稀釋至50mL，濃度約為0.5mg/mL，相當于測試濃度的50%，制備3份。

精密稱取50mg硫酸奈替米星對照品，用流動相溶解并稀釋至50mL，濃度約為1.0mg/mL，相當于測試濃度的100%，制備3份。

精密稱取75mg硫酸奈替米星對照品，用流動相溶解并稀釋至50mL，濃度約為1.5mg/mL，相當于測試濃度的150%，制備3份。

取上述溶液共9份，分別連續(xù)進樣，記錄稱樣量，峰面積，按外標法計算回收率及平均值，RSD。計算得到平均回收率為99.87%，RSD1.54%，方法準確可靠。

8 檢測限、定量限的測定

準確稱取硫酸奈替米星適量，稀釋至一定濃度并進樣20μl，計算信噪比，其信噪比（S/N）在10左右的目標溶劑濃度即為定量限濃度，信噪比（S/N）在3左右的目標溶劑濃度即為檢測限濃度。試驗測得硫酸奈替米星的定量限為2.5055μg/mL，相當于0.05ng。檢測限為0.25055μg/mL，相當于0.005ng。

9 樣品測定結果

取連續(xù)生產的樣品三批，按3.4項下配制，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。

根據USP32版方法，用外標法計算硫酸奈替米星的含量，計算公式如下：

注：對照品標示量為653μg，對照品干燥失重為7.5%。

3批自制樣品20120101、20120102、20120103的含量分別為648.7μg 、 651.1μg 、652.2μg均符合USP藥典規(guī)定（藥典規(guī)定應不低于595μg）。

10 討論

此美國藥典方法經過方法學的專屬性、精密度、線性、準確性、定量限、檢測限試驗驗證，結果均符合要求。此方法不但簡便，而且準確可靠，所以可以采用此反相高效液相色譜法對硫酸奈替米星的含量進行測定，以便于對此產品的生產提供可靠依據，對其質量進行更好的控制，也為該產品在美國市場銷售創(chuàng)造條件。

[1]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版二部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：987.

[2]USP32_NF27[S].USA.2009:3071-3072.

[3]中華人民共和國藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版二部[S].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄194-195.

[4]王其勇，宋勤.HPLC法測定茵梔黃膠囊中梔子苷的含量[J].藥物分析雜志，2009，29(3):470-471.