凋亡抑制基因survivin與卵巢癌的研究新進(jìn)展

沈媛媛 武 璁 陶 可

北京大學(xué)深圳醫(yī)院婦產(chǎn)科，廣東 深圳 518036

卵巢癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，近年來其發(fā)病率一直呈不斷上升趨勢，且也是婦科死亡率最高的惡性腫瘤。據(jù)1995年的美國癌癥統(tǒng)計資料顯示，卵巢癌已成為婦女第5位常見的惡性腫瘤和第4位癌癥死亡原因[1]。而美國癌癥研究所（NCI）預(yù)測，2008年美國卵巢新發(fā)病例將達(dá)21650例，死亡15520例[2]。雖然卵巢癌早期確診患者的5年生存率可達(dá)80%-90%，但近70%的患者確診時已至晚期，且FIGO Ⅳ期侵襲性卵巢上皮癌患者5年生存率不足20%[3]。即使晚期患者經(jīng)過系統(tǒng)治療達(dá)完全緩解，仍有60%-70%會出現(xiàn)復(fù)發(fā)，而耐藥又是治療失敗的主要原因[4]。研究證實(shí)多種化療藥物通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抗癌作用，因而尋求一種能促使卵巢癌細(xì)胞凋亡或增加其對化療藥物敏感性的輔助治療手段，對提高患者的生存率直至徹底治愈有著重要意義。Survivin是近年發(fā)現(xiàn)的一種細(xì)胞凋亡抑制基因，具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的雙重功能，它與卵巢癌細(xì)胞的生長、侵襲轉(zhuǎn)移及耐藥密切相關(guān)[5]。如何靶向survivin治療卵巢癌成為研究的熱點(diǎn)。現(xiàn)就近幾年survivin在卵巢癌中的研究新進(jìn)展作一綜述。

1 Survivin結(jié)構(gòu)、分布與功能

Survivin是凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis proteins,IAP）家族中的新成員，由Ambrosini等[6]于1997年應(yīng)用效應(yīng)細(xì)胞蛋白酶受體-1（effector cell proteinase receptor-1, EPR-1）的cDNA 通過雜交方法在人類基因組文庫中篩選并鑒定出來，是目前發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制因子。Survivin蛋白能夠調(diào)節(jié)所有細(xì)胞分裂和存活。

1.1 Survivin結(jié)構(gòu)與分子生物學(xué)功能特征

在人類和小鼠，survivin基因定位于17q25染色體，全長14.7kb，包含4個相對分子質(zhì)量16.5kd。Survivin基因啟動子近端均含有細(xì)胞周期依賴元件（CDE）和細(xì)胞周期同源區(qū)域（CHR）。人的survivin基因有三個CDE，分別位于-6、-2、-171位點(diǎn)，一個CHR位于-42位點(diǎn)。由survivin 基因編碼的產(chǎn)物稱為生存蛋白或存活素，是一個包含143個氨基酸殘基相對分子質(zhì)量為16389的蛋白質(zhì)[7]。

與IAP 家族其他成員不同的是，survivin蛋白具有以下特點(diǎn)：①N端只有一個較為保守的桿狀病毒屬抗細(xì)胞凋亡重復(fù)序列（baculovirus IAP repeat, BIR）結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域是對凋亡程序執(zhí)行元件caspase-9、caspase-3或caspase-6與caspase-7發(fā)揮抑制作用的主要基團(tuán)；②BIR分子被Cys46-Pro47-Thr483個氨基酸構(gòu)成的插入序列分成兩半；③C端缺乏鋅指結(jié)構(gòu)，而含有1個由42個氨基酸構(gòu)成的α-螺旋結(jié)構(gòu)，其晶體結(jié)構(gòu)呈廣泛二聚體化排列，體外實(shí)驗(yàn)顯示這種結(jié)構(gòu)特征可顯著增強(qiáng)其凋亡抑制功能[8]。

目前，學(xué)者已發(fā)現(xiàn)7個不同抗凋亡特性的survivin剪接異變體[9,10]：①survivin-ΔEx3缺乏外顯子3，保留了抗凋亡活性；②survivin-2B是將內(nèi)含子作為隱形外顯子，幾乎無抑制細(xì)胞凋亡的活性；③survivin-3B與凋亡抑制有關(guān)；④survivin-2α能削弱survivin的抗凋亡活性，增加腫瘤細(xì)胞對化療的敏感性；⑤另3個異構(gòu)體survivin-140、survivin-121、survivin-40在人和鼠組織內(nèi)均有發(fā)現(xiàn)，且只表達(dá)于胚胎組織，前兩者有抑制凋亡作用。

1.2 Survivin的組織分布 在胚胎及胎兒期survivin表達(dá)非常豐富。而在成人正常細(xì)胞中，除了胎盤和胸腺微弱表達(dá)外，其它組織基本很難檢測到survivin的表達(dá)[6]。但在人類大多數(shù)惡性腫瘤組織中，survivin mRNA和蛋白呈廣泛高表達(dá)。Tamm等[11]采用NCI 抗腫瘤藥物篩選程序中的60種人類腫瘤細(xì)胞株，研究了survivin在體外培養(yǎng)細(xì)胞株的表達(dá)。結(jié)果顯示，60種腫瘤細(xì)胞株均有survivin表達(dá)，包括乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、前列腺癌、淋巴瘤等。Liguang等[12]對114例卵巢組織標(biāo)本進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，73%的卵巢癌、47%的交界性卵巢癌和19%的卵巢良性腫瘤survivin表達(dá)陽性，而所有正常卵巢標(biāo)本中均未見survivin的表達(dá)；且survivin的表達(dá)率與卵巢癌的臨床分期、分化分級和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，但與腹水和組織學(xué)類型無相關(guān)性。同樣地，Kleinberg等[13]對卵巢癌腫瘤積液、相對應(yīng)的原發(fā)腫瘤及實(shí)體轉(zhuǎn)移瘤中的survivin表達(dá)情況進(jìn)行免疫組化分析發(fā)現(xiàn)，實(shí)體轉(zhuǎn)移腫瘤中的細(xì)胞質(zhì)survivin異常高表達(dá)（99%），明顯高于相對應(yīng)的腫瘤積液（88%）和原發(fā)腫瘤（92%）；核survivin高表達(dá)在腫瘤積液、原發(fā)腫瘤和實(shí)體轉(zhuǎn)移瘤中分別為72%、90%和93%。隨后，Wang等[14]用SABC免疫組化法檢測55例原發(fā)性卵巢黏液性腫瘤中的survivin表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)survivin在良性、交界性和惡性組的陽性表達(dá)率分別為2/20、12/15和20/20，呈升高趨勢，其中良性與交界性、良性與惡性組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。良性、交界性和惡性組survivin的胞核陽性表達(dá)率分別為1/20、6/15和5/20，其中良性與交界性組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。這意味著suvivin的表達(dá)可能出現(xiàn)于腫瘤惡性轉(zhuǎn)化的早期，在腫瘤的惡性轉(zhuǎn)化過程中發(fā)揮抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)分裂、增殖的作用，且隨著卵巢黏液性腫瘤的惡性進(jìn)展，凋亡抑制蛋白survivin表達(dá)上調(diào)。

1.3 Survivin與細(xì)胞周期調(diào)控 正常的細(xì)胞周期分為分裂間期（G1、S、G2期）和分裂期（M期）。Survivin基因通過影響細(xì)胞周期對細(xì)胞的增殖分化起著重要作用。首先，Survivin基因的表達(dá)具有細(xì)胞周期依賴性，其啟動子近端CDE和CHR的存在是細(xì)胞周期中G2/M期基因表達(dá)的特征，CDE片段缺失，則survivin基因的周期依賴性表達(dá)特征也隨之喪失。在有絲分裂開始時，survivin與紡錘體的微管蛋白特異性結(jié)合，此時若抑制survivin的表達(dá)，則會干擾survivin與微管蛋白的結(jié)合，細(xì)胞有絲分裂不能正常進(jìn)行[6]。緊接著，有研究[15]證實(shí)，Survivin RNA在G1期的表達(dá)基本檢測不到，在S期表達(dá)增加6倍，而在G2/M期表達(dá)則增加了40倍。Suzuki等[16]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)，過表達(dá)survivin 會加速細(xì)胞向S期轉(zhuǎn)換，導(dǎo)致細(xì)胞對G1期阻滯的抵抗，促進(jìn)Cdk2/ cyclinE復(fù)合體的激活，進(jìn)而導(dǎo)致Rb蛋白磷酸化，促進(jìn)細(xì)胞的周期進(jìn)程及細(xì)胞有絲分裂，提示腫瘤組織中過度表達(dá)survivin的細(xì)胞可能以此實(shí)現(xiàn)逃避細(xì)胞凋亡檢查點(diǎn)的檢查，使有絲分裂異常，細(xì)胞異常增殖，并處于不穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化狀態(tài)。這些研究表明，survivin的過度表達(dá)可通過克服G2/M期的調(diào)控點(diǎn)促進(jìn)細(xì)胞的旺盛增殖和惡性轉(zhuǎn)化。

1.4 Survivin與細(xì)胞凋亡 細(xì)胞凋亡又稱程序性細(xì)胞死亡，是由凋亡基因嚴(yán)密調(diào)控的機(jī)體為了調(diào)整器官發(fā)育、免疫細(xì)胞分選、應(yīng)對細(xì)胞損傷、更好的適應(yīng)生存環(huán)境而主動爭取的死亡過程。體內(nèi)存在兩條凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，即外源性Fas-FasL介導(dǎo)的膜受體途徑和內(nèi)源性線粒體途徑。凋亡基因的表達(dá)非常保守，如Bcl-2家族、caspase家族、癌基因如cmyc、抑癌基因p53等[17,18]。

轉(zhuǎn)基因技術(shù)證實(shí)，survivin與Caspase特異性結(jié)合，抑制Caspase-3、Caspase-7的活性，從而阻斷各種刺激（如Fas、Caspase、Bax和某些化療藥物）誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程。Survivin也可通過p21間接抑制Caspase，survivin與細(xì)胞周期調(diào)控因子CDK4結(jié)合形成survivin-CDK4復(fù)合體，使p21從CDK4復(fù)合體中釋放出來，p21進(jìn)而與線粒體Cspase-3結(jié)合，抑制其活性，阻斷細(xì)胞的凋亡過程。而如果在有絲分裂開始時干擾survivin與微管蛋白的結(jié)合，則survivin抗凋亡活性喪失，Caspase-3的活性增強(qiáng)，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[15,19]。

1.5 Survivin與血管形成 有研究提示，沒有血管的腫瘤生長有限，并長期處于休眠期。血管新生為卵巢癌細(xì)胞的生長、增殖提供必需的營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子，因而在卵巢癌發(fā)生、進(jìn)展與轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。血管生成方式中微血管內(nèi)皮細(xì)胞源于宿主成熟的血管內(nèi)皮細(xì)胞，在促血管生成因子作用下，原始的間充質(zhì)細(xì)胞發(fā)生分裂增殖分化，并最終形成新生血管。最重要的促血管新生的細(xì)胞因子有：血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）、血小板衍生生長因子（PDGF）、血管生成素（angiopoietin, Ang）等。Survivin具有調(diào)控血管生成的潛在作用，通過保護(hù)促進(jìn)腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長增殖而為癌細(xì)胞的生長轉(zhuǎn)移創(chuàng)造條件，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性和行為以及臨床治療耐受[20]。Blanc-Brude等[21]報道，股動脈損傷小鼠平滑肌細(xì)胞survivin的功能喪失后可阻止血管新生內(nèi)膜的形成。Fu等[22]通過siRNA survivin特異性抑制VEGF表達(dá)減少腫瘤血管生成，可達(dá)到siRNA survivin干擾中流間質(zhì)和抑制腫瘤細(xì)胞的雙重作用。此外，有研究還發(fā)現(xiàn)，Ang22的作用依賴于survivin的表達(dá)上調(diào)，其通過survivin抑制Caspase-3來調(diào)節(jié)腫瘤血管生成[23]。

1.6 Survivin與卵巢癌化療敏感性 大量研究[24,25]證實(shí)，多種化療藥物通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡而發(fā)揮抗癌作用，而腫瘤細(xì)胞的化療敏感性是決定抑瘤效果的關(guān)鍵因素。Survivin是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制基因，其表達(dá)與卵巢癌的組織學(xué)分級相關(guān)、侵襲性間呈正相關(guān)，且其異常高表達(dá)使卵巢腫瘤細(xì)胞對多種化療藥物的耐受性增加，并介導(dǎo)卵巢癌多藥耐藥的形成[26]。

為了探討對鉑耐藥和鉑敏感卵巢上皮性卵巢癌患者ERCC1（excision repair cross complementation group 1）蛋白、survivin蛋白的表達(dá)及其與臨床病理特征及化療敏感性之間的關(guān)系，Xie等[27]采用免疫組化法檢測64例上皮性卵巢癌組織中ERCC1和survivin的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)鉑敏感與鉑耐藥患者之間、ERCC1陽性表達(dá)與陰性表達(dá)患者之間以及survivin陽性表達(dá)與陰性表達(dá)患者之間在發(fā)病年齡、FIGO分期、病理類型、組織學(xué)分級、有無淋巴結(jié)和/或脈管轉(zhuǎn)移等方面的組間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0. 05）。鉑耐藥患者ERCC1 陽性表達(dá)率（67.85%, 19/ 28）高于鉑敏感患者（25.00%,9/36）。鉑耐藥患者survivin陽性表達(dá)率（78.57%, 22/28）與鉑敏感患者（75.00%,27/36）差異無統(tǒng)計學(xué)意義。ERCC1表達(dá)與survivin表達(dá)間無相關(guān)關(guān)系（rs=0.12,P=0. 36）。ERCC1與survivin共表達(dá)的患者中發(fā)生鉑耐藥的比例（65.22%,15/23）與ERCC1單表達(dá)患者中發(fā)生鉑耐藥患者的比例（80.00%,4/5）間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。認(rèn)為測定上皮性卵巢癌組織中ERCC1的表達(dá)對預(yù)測鉑耐藥的發(fā)生有較大價值survivin蛋白對預(yù)測鉑耐藥暫無肯定價值。

Zaffaroni等[28]研究發(fā)現(xiàn)，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染表達(dá)survivin的cDNA可增加卵巢癌細(xì)胞對紫杉烷類藥物的抗藥性，使癌細(xì)胞失去對治療的敏感性，細(xì)胞質(zhì)survivin高表達(dá)的卵巢癌顯示出對紫杉烷類/鉑類藥物療法的臨床耐受和較低的臨床及病理完全緩解率，提示survivin可作為一個指示卵巢癌化療耐藥性的生物學(xué)指標(biāo)。

2 靶向survivin治療卵巢癌的可行性與安全性評估

卵巢癌是導(dǎo)致婦科惡性腫瘤患者死亡最高的一種惡性腫瘤，因缺乏特異性的早期癥狀和篩檢指標(biāo)，大多數(shù)EOC患者在疾病確診時往往已處于晚期階段，現(xiàn)有的根治手術(shù)、放化療并沒有帶來令人滿意的療效。因而迫切需要最佳的生物學(xué)標(biāo)志物來預(yù)測卵巢癌根治術(shù)病人的術(shù)后反應(yīng)，為制定進(jìn)一步治療方案的提供可靠依據(jù)。鑒于survivin在卵巢癌細(xì)胞周期調(diào)控、凋亡與血管形成中的發(fā)揮重要作用，越來越多的學(xué)者將目光投向靶向survivin表達(dá)治療卵巢癌的研究中。目前，抑制基因表達(dá)常采用RNA干擾、反義技術(shù)以及轉(zhuǎn)入沒有功能的突變體與該基因競爭技術(shù)等。

2.1 RNA干擾技術(shù) RNA干擾（RNAi）是一項(xiàng)能有效而特異地抑制基因表達(dá)的新技術(shù)，通過將雙鏈RNA 導(dǎo)入細(xì)胞，裂解為21-23個堿基長度的雙鏈小干擾RNA（short interfering RNA, siRNA）或設(shè)計針對性的短發(fā)卡RNA（short hairpin RNA, shRNA），特異性降解相應(yīng)序列的mRNA，導(dǎo)致相應(yīng)的基因轉(zhuǎn)錄后沉默。

Yan等[29]設(shè)計特異性的survivin shRNA，探討其對人卵巢癌耐藥細(xì)胞OVCAR3 survivin 基因表達(dá)、凋亡及其對泰素敏感性的影響。檢測結(jié)果顯示靶向survivin的序列特異性shRNA可有效抑制OVCAR3細(xì)胞中的survivin基因的表達(dá)，同時可增強(qiáng)OVCAR3對泰素的敏感性。隨后Huang等[30]應(yīng)用RNA干擾技術(shù)抑制survivin和程序性細(xì)胞死亡的基因6（PDCD6）表達(dá)的，可逆轉(zhuǎn)FSH對細(xì)胞凋亡和增殖影響。Tarapore等[31]的研究結(jié)果也證實(shí)，以包裝RNA（packaging RNA,pRNA）作為小干擾RNA（siRNA）是一種有效的沉默卵巢癌survivin表達(dá)的方法。最新的一項(xiàng)研究表明，使用shRNA技術(shù)靶向卵巢癌細(xì)胞系SKOV3的survivin能夠有效抑制癌細(xì)胞增殖、遷移。推測shRNA技術(shù)可能有望成為卵巢癌治療的新突破[32]。

因而，靶向耐藥基因的RNA 干擾技術(shù)與化療藥物聯(lián)合有望成為治療卵巢癌新的突破口，它為克服卵巢癌化療耐藥提供新途徑，為新型抗癌藥物開發(fā)提供新思路。

2.2 Survivin反義寡核苷酸技術(shù) 反義寡核苷酸技術(shù)是利用合成的寡核苷酸與靶RNA結(jié)合來抑制靶基因的表達(dá)的技術(shù)。Ambrosini等[33]用EPR-1基因作為survivin反義寡核苷酸，用其cDNA序列轉(zhuǎn)染卵巢癌HeLa細(xì)胞，在穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中抑制了內(nèi)源性survivin的表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)了對癌細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)和增殖抑制。Ruan等[34]研究survivin反義寡核苷酸對人卵巢癌細(xì)胞COC1/DDP生長、凋亡及細(xì)胞周期的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)survivin反義寡核苷酸能抑制COC1/DDP細(xì)胞的生長，降低survivin mRNA的表達(dá)，并誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡?？紤]到紫杉類耐藥的比紫杉類敏感的卵巢癌細(xì)胞表達(dá)更高的survivin，Vivas-Mejia等[35]用反義方法沉默紫杉類耐藥的卵巢癌細(xì)胞survivin 2B，結(jié)果發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞對紫杉類化療藥敏感性明顯提高，認(rèn)為卵巢癌細(xì)胞對紫杉類耐藥可能與survivin 2B直接相關(guān)。

2.3 針對survivin上、下游調(diào)控因子的方法 基因表達(dá)受上、下游啟動子、增強(qiáng)子、沉默子、轉(zhuǎn)錄因子等調(diào)控影響。Tu等[36]使用凋亡抑制基因survivin和卵巢特定的啟動子OSP-2進(jìn)行基因治療，結(jié)果發(fā)現(xiàn)OSP-2能具體促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞survivin表達(dá)而抑制細(xì)胞凋亡。Felisiak-Golabek等[37]發(fā)現(xiàn)，survivin轉(zhuǎn)錄抑制因子TP53蛋白能有效抑制紫杉類耐藥的卵巢癌細(xì)胞核中survivin的表達(dá)。

2.4 基因聯(lián)合治療 McKay等[38]提出了卵巢癌的基因聯(lián)合治療策略，構(gòu)建了腺病毒載體共轉(zhuǎn)survivin顯性負(fù)突變體（Ad-Survivin-T34A, 34位Thr被Ala替代而不能被Cdc2磷酸化，進(jìn)而使survivin失活）和Procaspase-3于卵巢癌細(xì)胞之中,發(fā)現(xiàn)由外源性地增加Procaspase-3（可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡）所誘導(dǎo)的內(nèi)源性survivin表達(dá)升高得以消除，提示共轉(zhuǎn)的survivin顯性負(fù)突變體在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的同時，還能與Procaspase-3產(chǎn)生協(xié)同作用，提高Procaspase-3的單獨(dú)治療效果。

2.5 激素治療研究 促黃體激素（luteinizing hormone, LH）和卵泡刺激素（follicle stimulating hormone, FSH）在生殖相關(guān)的生理過程中協(xié)同發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。研究[30,39]證實(shí)，LH和FSH在卵巢癌發(fā)生和進(jìn)展過程中起著重要作用，二者均能夠增加卵巢惡性腫瘤的風(fēng)險，抑制卵巢癌細(xì)胞凋亡。

Huang等[30]的研究結(jié)果表明，F(xiàn)SH通過survivin的表達(dá)而增加VEGF的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)卵巢腫瘤組織的血管化，為其生長、轉(zhuǎn)移提供必須條件。隨后，他們又發(fā)現(xiàn)FSH促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖和阻止其凋亡是通過SAPK/JNK和PI3K/Akt信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑激活survivin實(shí)現(xiàn)的。同時，F(xiàn)SH還能下調(diào)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡所需的兩個必要分子：程序性細(xì)胞死亡的基因6（PDCD6）和死亡受體5（DR5）的表達(dá)。在體外，Zhang等[39]向卵巢癌細(xì)胞培養(yǎng)體系中加入LH和順鉑，用免疫印跡檢測survivin的表達(dá)，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡。結(jié)果發(fā)現(xiàn)LH通過抑制細(xì)胞凋亡和上調(diào)survivin的表達(dá)來影響卵巢癌細(xì)胞對化療藥物的敏感性。

2.6 藥物研究方面 耐藥是目前卵巢癌治療急需解決的難題。最近研究顯示，卵巢癌組織及細(xì)胞中均有survivin的高表達(dá)，可能與其抑癌耐藥有關(guān)。因而，使用針對阻抑survivin表達(dá)的藥物，可能會對卵巢癌起到良好的療效。白藜蘆醇是從植物白藜蘆根提取的藥物成分，具有心臟保護(hù)作用，在心內(nèi)科已廣泛應(yīng)用。近來的研究發(fā)現(xiàn)，白藜蘆醇具有抗癌特性。Aggarwal等[40]通過上調(diào)p21Cip1/WAF1、p53和Bax以及下調(diào)survivin、BCL-2、Bcl-xL、細(xì)胞周期蛋白D1和E的表達(dá)，并且激活caspases蛋白而發(fā)揮腫瘤抑制作用。托芬那酸（tolfenamic acid, TA）是一種抗炎鎮(zhèn)痛藥。最近的一項(xiàng)研究[41]提示，TA通過抑制的survivin表達(dá)發(fā)揮抑制對小鼠體內(nèi)OC生長、減少OC細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期阻滯的作用。因而，可能成為下一個有效的OC化療藥物。

綜合以上研究，通過各種分子生物學(xué)技術(shù)、激素以及某些藥物來阻斷survivin表達(dá)，進(jìn)而拮抗其抑制細(xì)胞凋亡的能力、降低細(xì)胞凋亡的閾值、恢復(fù)腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性是可行的。然而，卵巢癌是惡性度很高的腫瘤，往往需要大劑量、長療程、高效化療放、化療，而基因治療尚處于起步階段。例如，使用survivin干擾裸鼠HepG2肝細(xì)胞，有可能誘發(fā)某些原癌基因的激活與淋巴瘤、肺癌等多種腫瘤[42]。因此，在靶向survivin治療卵巢癌之前，需對各項(xiàng)治療方法安全性進(jìn)行深入細(xì)致的研究與評估。

3 Survivin與卵巢癌的預(yù)后相關(guān)性

卵巢上皮癌是目前死亡率最高的婦科惡性腫瘤。目前，臨床應(yīng)用的腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)聯(lián)合化療后，患者的5年生存率仍徘徊在30%-40%。眾多研究[43]證實(shí)，在惡性腫瘤中survivin表達(dá)越高，提示預(yù)后越差。

為了探索survivin在評估卵巢癌預(yù)后的重要作用，Athanassiadou等[44]選取100例卵巢癌標(biāo)本涂片進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)染色檢測survivin的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)腫瘤惡性程度和細(xì)胞組織學(xué)分級越高，則survivin的表達(dá)越高（P<0.0001），且病人的存活率降低（P<0.00001）。

腫瘤中survivin的異常表達(dá)與腫瘤的化療耐藥和復(fù)發(fā)率密切相關(guān)，高表達(dá)survivin的腫瘤顯示出對化療的抵抗、復(fù)發(fā)可能性增加以及生存率降低[45]。Kleinberg等[46]提出以細(xì)胞核survivin的表達(dá)情況作為化療前預(yù)示患者治療效果的指標(biāo)，高水平的細(xì)胞核survivin表達(dá)預(yù)示較好的治療效果和較高的生存率。隨后Qian等[47]對10例卵巢囊腺瘤、17例交界性腫瘤、64例上皮性卵巢癌用多克隆抗survivin抗體進(jìn)行免疫組化染色，顯示85.94%（55/64）的卵巢上皮性卵巢癌病例抗survivin抗體免疫組化染色陽性，23.53%（4/17）的卵巢交界性腫瘤染色陽性，10例卵巢囊腺瘤染色結(jié)果均為陰性；且上皮性卵巢癌患者細(xì)胞核survivin陽性百分率與臨床分期，病理分級，增殖細(xì)胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen, PCNA）標(biāo)記指數(shù)強(qiáng)相關(guān)（P<0.01）。認(rèn)為核survivin表達(dá)是判斷卵巢上皮性卵巢癌預(yù)后的一個有效、獨(dú)立的指標(biāo)。No等[48]的研究結(jié)果也表明，血清survivin水平可較好地反映漿液性卵巢癌腹膜轉(zhuǎn)移情況，可作為判斷卵巢癌預(yù)后的有用標(biāo)志物。

與以上研究結(jié)果不同的是，為了研究survivin表達(dá)與婦科腫瘤科預(yù)后的相關(guān)性，F(xiàn)errandina等[49]對110名卵巢癌患者進(jìn)行了研究。免疫組化的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，84.5%的患者癌細(xì)胞漿呈survivin陽性表達(dá)，29.1%的細(xì)胞核陽性；卵巢癌惡性度越高，細(xì)胞核陽性率越低。凋亡相關(guān)其他因素Bcl-2和p53的表達(dá)分別見于27.3%和60.0%的病例，兩者表達(dá)均與survivin的表達(dá)無關(guān)。且無論是細(xì)胞漿還是細(xì)胞核中survivin表達(dá)均與卵巢癌預(yù)后無相關(guān)性。

4 展望

卵巢癌發(fā)病率高而存活率低，對女性的健康造成極大的威脅。盡管目前采用手術(shù)、化療、放療等治療手段使卵巢癌的存活率有了很大提高，但晚期患者即使經(jīng)過系統(tǒng)治療達(dá)完全緩解，仍有60%-70%會出現(xiàn)復(fù)發(fā)。而耐藥又是治療失敗的主要原因。Survivin是迄今發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的凋亡抑制基因，其高表達(dá)使腫瘤細(xì)胞對多種化療藥物的耐受性增加，并介導(dǎo)腫瘤多藥耐藥的形成。鑒于survivin在卵巢癌細(xì)胞周期調(diào)控、凋亡與血管形成中的發(fā)揮著重要作用，探索各種新的分子生物學(xué)技術(shù)和基因治療方法，阻斷survivin表達(dá)而拮抗其抑制細(xì)胞凋亡的能力，降低細(xì)胞凋亡的閾值，恢復(fù)腫瘤細(xì)胞對化療藥物的敏感性，進(jìn)而使卵巢癌獲得根治成為可能，從而避免卵巢癌細(xì)胞耐藥和轉(zhuǎn)移擴(kuò)散給病人帶來的痛苦，具有深刻的指導(dǎo)意義。

【參看文獻(xiàn)】

1.Pennington KP, Swisher EM. Hereditary ovarian cancer: beyond the usual suspects[J]. Gynecol Oncol,2012,124 (2):347-353.

2.Jemal A, Siegel R, Ward E, et al. Cancer statistics, 2008 [J]. CA Cancer J Clin,2008,58(2):71-96.

3.Survival rates for ovarian cancer. 2011, 21 Dec, http:/ /www.cancer.org/Cancer/OvarianCancer/OverviewGuide/ ovarian-cancer-overview-survival-rates.

4.Lo HW, Day CP, Hung MC. Cancer-specific gene therapy[J]. Adv Genet,2005,54:235-255.

5.Xing J, Jia CR, Wang Y, et al. Effect of shRNA targeting survivin on ovarian cancer[J]. J Cancer Res Clin Oncol, 2012,Mar 18,[Epub ahead of print].

6.Ambrosini G, Adida C, Altieri DC. A novel anti-apoptosis gene, survivin, expressed in cancer and lymphoma[J]. Nat Med,1997,3(8):917-921.

7.Zhang LQ, Wang J, Jiang F, et al. Prognostic value of survivin in patients with non-small cell lung carcinoma: a systematic review with meta-analysis[J]. PLoS One, 2012,7(3):e34100.

8.Fulda S, Vucic D. Targeting IAP proteins for therapeutic intervention in cancer[J]. Nat Rev Drug Discov,2012,11 (2):109-124.

9.Végran F, Boidot R, Bonnetain F, et al. Apoptosis gene signature of Survivin and its splice variant expression in breast carcinoma[J]. Endocr Relat Cancer,2011,18(6): 783-792.

10.Vandghanooni S, Eskandani M, Montazeri V, et al. SurvivindeltaEx3: a novel biomarker for diagnosis of papillary thyroid carcinoma[J]. J Cancer Res Ther,2011,7(3):325-330.

11.Tamm I, Wang Y, Sausville E, et al. IAP-family protein survivin inhibits caspase activity and apoptosis induced by Fas (CD95), Bax, caspases, and anticancer drugs[J]. Cancer Res,1998 Dec 1,58(23):5315-5320.

12.Liguang Z, Peishu L, Hongluan M, et al. Survivin expression in ovarian cancer[J]. Exp Oncol,2007,29(2):121-125.

13.Kleinberg L, Fl!renes VA, Silins I, et al. Nuclear expression of survivin is associated with improved survival in metastatic ovarian carcinoma[J]. Cancer,2007,109(2): 228-238.

14.Wang HX, Chen G, Li GL, et al. Expression and significance of Survivin and Smac in ovarian mucinous tumors[J]. Zhonghua Bing Li Xue Za Zhi,2010,39(6):387-390.

15.Fengzhi Li, Ambrosini G, Chu EY, et al. Control of apoptosis and mitotic spindle checkpoint by surviving [J]. Nature,1998,396(6711):580-584.

16.Suzuki A, Hayashida M, Ito T, et al. Survivin initiates cell cycle entry by the competitive interaction with Cdk4/p16 (INK4a) and Cdk2/cyclin E complex activation [J]. Oncogene,2000,19(29):3225-3234.

17.Mondal S, Bhattacharya K, Mallick A, et al. Bak Compensated for Bax in p53-null Cells to Release Cytochrome c for the Initiation of Mitochondrial Signaling during Withanolide D-Induced Apoptosis[J]. PLoS One,2012,7(3):e34277.

18.Zhou F, Yang Y, Xing D. Bcl-2 and Bcl-xL play important roles in the crosstalk between autophagy and apoptosis [J]. FEBS J,2011,278(3):403-413.

19.McKenzie JA, Grossman D. Role of the apoptotic and mitotic regulator survivin in melanoma[J]. Anticancer Res,2012,32(2):397-404.

20.Goteri G, Lucarini G, Pieramici T,et al. Endothelial cell survivin is involved in the growth of ovarian endometriotic cysts[J]. Anticancer Res,2005,25(6B):4313-4318.

21.Blanc-Brude OP, Yu J, Simosa H, et al. Inhibitor of apoptosis protein survivin regulates vascular injury [J]. Nat Med,2002,8(9):987-994.

22.Fu K, Yang J, Wang X, et al. Survivin siRNA suppresses angiogenesis of adenoid cystic carcinoma ACC-2 cells bearing nude mice[J]. Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2010,32(16):1750-1753.

23.Ohashi H, Takagi H, Oh H, et al. Phosphatidylinositol 3-kinase/Akt regulates angiotensin II-induced inhibition of apoptosis in microvascular endothelial cells by governing survivin expression and suppression of caspase-3 activity[J]. Circ Res,2004,94(6):785-793.

24.Hasby EA. Weapons ovarian epithelial tumors may use in immune escape: an immunohistochemical correlational study [J]. Pathol Oncol Res,2012,18(2):509-518.

25.Ning Y, Li Q, Xiang H, et al. Apoptosis induced by 7-difluoromethoxyl-5,4'-di-n-octyl genistein via the inactivation of FoxM1 in ovarian cancer cells[J]. Oncol Rep,2012,27(6):1857-1864.

26.Aune G, Stunes AK, Tingulstad S, et al. The proliferation markers Ki-67/MIB-1, phosphohistone H3, and survivin may contribute in the identification of aggressive ovarian carcinomas[J]. Int J Clin Exp Pathol,2011,4(5):444-453.

27.Xie C, Yin RT, Li YL, et al. The protein expression of ERCC1 and survivin in epithelial ovarian carcinoma and their clinical significance[J]. Sichuan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban,2011,42(1):86-89.

28.Zaffaroni N, Pennati M, Colella G, et al. Expression of the anti-apoptotic gene survivin correlates with taxol resistance in human ovarian cancer[J]. Cell Mol Life Sci,2002,59(8):1406-1412.

29.Yan X, Liang L, Zeng Z, et al. Effect of survivin shRNA on chemosensitivity of human ovarian cancer cell line OVCAR3 to paclitaxel[J]. Chinese Journal of Cancer, 2006,25(4):398-403.

30.Huang Y, Jin H, Liu Y, et al. FSH inhibits ovarian cancer cell apoptosis by up-regulating survivin and downregulating PDCD6 and DR5[J]. Endocr Relat Cancer,2011, 18(1):13-26.

31.Tarapore P, Shu Y, Guo P, et al. Application of phi29 motor pRNA for targeted therapeutic delivery of siRNA silencing metallothionein-IIA and survivin in ovarian cancers[J]. Mol Ther,2011,19(2):386-394.

32.Xing J, Jia CR, Wang Y, et al. Effect of shRNA targeting survivin on ovarian cancer[J]. J Cancer Res Clin Oncol, 2012 Mar 18,[Epub ahead of print].

33.Ambrosini G, Adida C, Sirugo G, et al. Induction of apoptosis and inhibition of cell proliferation by survivin gene targeting[J]. J Biol Chem,,1998,273(18):11177-11182.

34.Ruan F, Xie X, Liu S. Inhabitory effects of survivin antisense oligonucleotide on drug-sesietant human ovarian cancer cell COC1/DDP[J]. Chinese Journal of Cancer, 2004,23(8):896-899.

35.Vivas-Mejia PE, Rodriguez-Aguayo C, Han HD, et al. Silencing survivin splice variant 2B leads to antitumor activity in taxane--resistant ovarian cancer[J]. Clin Cancer Res,2011,17(11):3716-3726.

36.Tu CH, Liu WP, Dong M, et al. Protection of CHO cells by transfer of survivin driven by ovarian-specific promoter OSP-2[J]. Mol Biol Rep,2011,38(4):2323-2328.

37.Felisiak-Golabek A, Rembiszewska A, Rzepecka IK, et al. Nuclear survivin expression is a positive prognostic factor in taxane-platinum-treated ovarian cancer patients [J]. J Ovarian Res,2011,4(1):20.

38.McKay TR, Bell S, Tenev T, et al. Procaspase 3 expression in ovarian carcinoma cells increases survivin transcription which can be countered with a dominant-negative mutant, survivin T34A; a combinationgene therapystrategy[J]. Oncogene,2003,22(23):3539-3547.

39.Zhang Z, Liao H, Chen X, et al. Luteinizing hormone upregulates survivin and inhibits apoptosis in ovarian epithelial tumors[J]. Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol, 2011,155(1):69-74.

40.Aggarwal BB, Bhardwaj A, Aggarwal RS, et al. Role of resveratrol in prevention and therapy of cancer: preclinical and clinical studies[J]. Anticancer Res, 2004,24(5A):2783-2840.

41.Basha R, Ingersoll SB, Sankpal UT, et al. Tolfenamic acid inhibits ovarian cancer cell growth and decreases the expression of c-Met and survivin through suppressing specificity protein transcription factors[J]. Gynecol Oncol,2011,122(1):163-170.

42.Dai D, Liang Y, Xie Z, et al. Survivin deficiency inducesapoptosis and cell cycle arrest in HepG2 hepatocellular carcinoma cells[J]. Oncol Rep,2012,27 (3):621-627.

43.Takai N, Miyazaki T, Nishida M, et al. Expression of survivin is associated with malignant potential in epithelial ovarian carcinoma[J]. Int J Mol Med,2002,10 (2):211-216.

44.Athanassiadou P, Grapsa D, Athanassiades P, et al. The prognostic significance of COX-2 and survivin expression in ovarian cancer[J]. Pathol Res Pract,2008,204(4):241-249.

45.ZaffaroniN, PennatiM, ColellaG, et al. Expression of the anti- apoptotic gene survivin correlateswith taxol resistance in human ovarian cancer[J]. Cell Mol Life Sci,2002,59(8):1406-1412.

46.Kleinberg L, Fl!renes VA, Silins I, et al. Nuclear expression of survivin is associated with improved survival in metastatic ovarian carcinoma[J]. Cancer,,2007,109 (2):228-238.

47.Qian X, Xi X, Li L. Nuclear survivin is associated with malignant potential in epithelial ovarian carcinoma[J]. Appl Immunohistochem Mol Morphol,2011,19(2):126-132.

48.No JH, Jeon YT, Kim YB, et al. Quantitative detection of serum survivin and its relationship with prognostic factors in ovarian cancer[J]. Gynecol Obstet Invest, 2011,71(2):136-140.

49.Ferrandina G, Legge F, Martinelli E, et al. Survivin expression in ovarian cancer and its correlation with clinico-pathological,surgical and apoptosis-related parameters[J]. Br J Cancer,2005,92(2):271-277.

50.鐘玉敏，朱銘，陳樹寶，等.永存第五對主動脈弓[J].罕少疾病雜志,2000,7(1)：1-2.

51.王成林，林貴.罕見病少見病的診斷與治療[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,1999:215-216.