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    犬瘟熱病毒研究概況

    2012-03-30 01:45:15胡嘉欣溫永俊霍志云高維凡
    關(guān)鍵詞:犬瘟熱糖基化核苷酸

    胡嘉欣,溫永俊,霍志云,武 華*,高維凡

    (1.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué),遼寧沈陽(yáng)110866;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所,吉林長(zhǎng)春130122)

    犬瘟熱病毒研究概況

    胡嘉欣1,2,溫永俊2,霍志云1,2,武 華2*,高維凡1*

    (1.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué),遼寧沈陽(yáng)110866;2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所,吉林長(zhǎng)春130122)

    犬瘟熱(CD)是由犬瘟熱病毒(CDV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病,流行范圍廣,發(fā)病率、致死率高,臨床癥狀多樣。CDV感染宿主廣泛,所有日齡的犬都有可能感染。CDV屬于副黏病毒科麻疹病毒屬,有囊膜包裹的單股負(fù)鏈線性RNA病毒。CDV基因組編碼6種蛋白:核衣殼(N)蛋白、磷(P)蛋白、基質(zhì)膜(M)蛋白、融合(F)蛋白、血凝素(H)蛋白和大(L)蛋白。N、P和L蛋白與病毒復(fù)制有關(guān);M蛋白與病毒的裝配和出芽有關(guān);F、H蛋白在病毒的侵染過程中起到關(guān)鍵作用。近年來,隨著我國(guó)寵物業(yè)、毛皮經(jīng)濟(jì)養(yǎng)殖業(yè)的迅速發(fā)展,CD在我國(guó)的發(fā)病率有升高的趨勢(shì)。論文對(duì)CDV分子生物學(xué)研究進(jìn)展進(jìn)行歸納總結(jié)。

    犬瘟熱病毒;分子生物學(xué);致病機(jī)理

    犬瘟熱(Canine distemper,CD)是由犬瘟熱病毒(Canine distemper virus,CDV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病,流行范圍廣,發(fā)病率及致死率高。臨床癥狀多表現(xiàn)為“雙相熱”,眼鼻有黏液樣分泌物,伴有腹瀉,嚴(yán)重時(shí)出現(xiàn)血便,四趾肉墊增厚、角質(zhì)化明顯,神經(jīng)癥狀多表現(xiàn)為抽搐。CDV感染宿主廣泛,主要為食肉目動(dòng)物,如犬科、鼬科、浣熊科、貓科和靈貓科等,但主要宿主為犬科動(dòng)物,所有日齡的犬都有可能感染[1]。本文將近期CDV分子生物學(xué)研究進(jìn)行歸納總結(jié),為深入研究提供參考。

    CDV屬于副黏病毒科麻疹病毒屬,為有囊膜包裹的單股負(fù)鏈線性RNA病毒。呈圓形或橢圓形,有時(shí)呈長(zhǎng)絲狀。直徑約為150 nm,核衣殼呈螺旋對(duì)稱。CDV只有1種血清型,根據(jù)血凝素(H)基因的多樣性和病毒的毒力,分為6種基因型(Asia 1、A-sia 2、Europe、USA、Arctic和 Vaccine)。由于具有囊膜,CDV對(duì)有機(jī)溶劑敏感,對(duì)酸堿抵抗力弱,所以臨床上常用消毒方法即可殺滅;CDV對(duì)熱和干燥敏感,故該病多流行于冬春寒冷季節(jié)。CDV侵染不同類型的細(xì)胞,如上皮、間質(zhì)、神經(jīng)內(nèi)分泌和造血干細(xì)胞,在不同組織和器官內(nèi)造成持續(xù)感染,例如中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和淋巴組織[2]。感染犬通常表現(xiàn)為呼吸道、胃腸道以及其他組織和器官的多種臨床癥狀,其中急性感染導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘性腦脊髓炎(demyelinating leukoencephalomyelitis,DL),并引起嚴(yán)重的全身免疫抑制和淋巴組織損耗[2-4]。

    基因組位于病毒粒子內(nèi)部,被核衣殼蛋白包裹,基因組全長(zhǎng)約16 kb,基因組呈線性排列。從3′端至5′端的基因順序依次為前導(dǎo)序列、N、P、M、F、H、L、前導(dǎo)(尾隨)序列。3′端前導(dǎo)序列由55個(gè)核苷酸組成,5′端前導(dǎo)(尾隨)序列由38個(gè)核苷酸組成。3′端前導(dǎo)序列和5′端前導(dǎo)(尾隨)序列,被認(rèn)為是啟動(dòng)、調(diào)節(jié)序列,指導(dǎo)基因的轉(zhuǎn)錄復(fù)制過程,同時(shí)又是CDV基因的轉(zhuǎn)錄終止、重起始序列。兩序列之間包括6個(gè)非重疊基因區(qū),編碼六種基因蛋白:核衣殼蛋白(N)、磷蛋白(P)、基質(zhì)膜蛋白(M)、融合蛋白(F)、血凝素蛋白(H)、大蛋白(L)。N、P和L蛋白形成核糖核蛋白復(fù)合體(RNP)包裹病毒RNA,三種蛋白與病毒復(fù)制過程相關(guān);兩種表面糖蛋白F和H蛋白黏附在囊膜表面,形成纖突在病毒感染侵入過程中發(fā)揮重要作用;M蛋白則嵌合到囊膜內(nèi),在糖蛋白與核衣殼連接中起橋連作用,同時(shí)與病毒的裝配和出芽有關(guān)。

    1 核衣殼(N)蛋白及其基因

    核衣殼(N)蛋白基因由1 683個(gè)核苷酸組成,有一個(gè)開放閱讀框起始于53位~55位的AUG起始密碼子,共編碼523個(gè)氨基酸,分子質(zhì)量為58 ku。N蛋白基因由中間保守區(qū)和N末端、C末端的可變區(qū)組成[5]。N蛋白具有較高的保守性,能誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫。N蛋白的C末端1 aa~80 aa、337 aa~358 aa為抗原識(shí)別不可或缺的抗原表位,能誘導(dǎo)體液免疫產(chǎn)生抗體[6];N蛋白的9氨基酸寡肽(281 aa~289 aa,Tyr-Pro-Ala-Leu-His-Glu-Phe)介導(dǎo)CTL反應(yīng),可能是CTL活性細(xì)胞作用靶細(xì)胞的抗原表位之一,對(duì)CDV引起的細(xì)胞免疫具有重要作用[7-8]。

    N蛋白和P、L蛋白與復(fù)制過程相關(guān),P和L蛋白具有RNA聚合酶活性,隨后N蛋白包裹病毒RNA,避免 RNA 降解[8-10],三者能夠構(gòu)成一個(gè)復(fù)制單位-核糖核蛋白復(fù)合體(RNP)。N蛋白上有特定的細(xì)胞核定位信號(hào)(NLS)和細(xì)胞核轉(zhuǎn)出信號(hào)(NES),NLS和NES為N蛋白核轉(zhuǎn)運(yùn)過程中所必需的[11]。Yoshida E等[6]通過間接免疫熒光實(shí)驗(yàn)(IFA)測(cè)得,缺失了N末端的1 aa~80 aa的N蛋白只在細(xì)胞質(zhì)中發(fā)現(xiàn),而缺失了C末端359 aa~523 aa的N蛋白分布在細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中,證明N末端的1 aa~80 aa是N蛋白從胞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)到核胞體所必需的。Sato H等[11]證明N蛋白的核定位信號(hào)(NLS)位于N末端高變區(qū),在CDV N蛋白的N末端1 aa~80 aa,分別建立了8個(gè)氨基酸(2~15、16~23、24~32、33~42、43~52、53~61、62~71和72~80)殘基缺失基因,經(jīng)轉(zhuǎn)染Cos-7細(xì)胞表達(dá),根據(jù)N蛋白病毒粒子在細(xì)胞中表達(dá)的分布情況,發(fā)現(xiàn)CDV N蛋白N末端33 aa~80 aa對(duì)蛋白的細(xì)胞核轉(zhuǎn)入起著重要的作用,繼續(xù)對(duì)N末端33 aa~81 aa進(jìn)行連續(xù)四個(gè)丙氨酸替換突變,IFA發(fā)現(xiàn)N(70~73)和N(74~77)核轉(zhuǎn)運(yùn)過程明顯被破壞,驗(yàn)證了NLS位于N末端70 aa~77 aa,該區(qū)域是一獨(dú)特的亮氨酸/異亮氨酸富集區(qū);同時(shí)發(fā)現(xiàn)N(Δ2~15)明顯地在細(xì)胞核內(nèi)聚集,研究發(fā)現(xiàn)NES位于N末端4和5的兩個(gè)亮氨酸殘基處,并具有獨(dú)自推動(dòng)細(xì)胞核轉(zhuǎn)出功能。另外,其他麻疹病毒屬病毒,麻疹病毒(MV)和牛瘟病毒(RPV)的NLS同樣位于N蛋白的N末端70 aa~77 aa;雖然RPV的NES位置與CDV相同,但是MV的NES則位于N蛋白C末端425 aa~440 aa。

    N蛋白除了調(diào)節(jié)病毒的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制外,還與CDV的毒力密切相關(guān),并且CDV的毒力能夠影響CDV對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的持續(xù)感染[12]。Keawcharoen J等[13]從臨床分離得到的13株犬瘟熱毒株,并將N蛋白的C末端部分基因進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增,經(jīng)序列分析分為兩簇,其中A簇的442和171株與Onderstepoort株核苷酸和氨基酸水平上的同源性分別為97.61%和97.30%、99.10%和99.10%,而與其它強(qiáng)毒株核苷酸和氨基酸水平上的同源性較低;B 簇的207、577、230、034、418、621、400、468、438、443和466株與其他強(qiáng)毒株核苷酸和氨基酸水平上的同源性為94.63%~99.40%和95.50%~99.10%,而與Onderstepoort株核苷酸和氨基酸水平上的同源性較低。由此可以推斷,N蛋白C末端的差異與病毒的毒力有關(guān);也有研究表明,該差異影響病毒的出芽過程和病毒持續(xù)感染的產(chǎn)生[12]。

    2 磷(P)蛋白及其基因

    磷蛋白(P)基因由1 655個(gè)核苷酸組成,有兩個(gè)部分重疊的開放閱讀框。第1個(gè)起始于P基因的42 nt~44 nt的AUG,止于1 564 nt~1 566 nt,編碼507個(gè)氨基酸為P蛋白,第2個(gè)起始于P基因第65 nt~67 nt,止于587 nt~589 nt,編碼174個(gè)氨基酸為C蛋白。P基因編碼三種蛋白,一是具有聚合酶活性的P蛋白,同時(shí)還編碼兩種非結(jié)構(gòu)蛋白V和C。其中在共轉(zhuǎn)錄時(shí),在P mRNA中插入一個(gè)額外的G殘基,產(chǎn)生的mRNA則編碼一個(gè)非結(jié)構(gòu)V蛋白,該蛋白與P蛋白有著共同的氨基酸端點(diǎn),但是終止于C末端的70 aa[14]。P蛋白分子量為66 ku,具有聚合酶活性;V蛋白是必不可少的干擾素頡頑蛋白和細(xì)胞因子反應(yīng)抑制蛋白;C蛋白可能是一種傳染性因子[15]。

    Von Messling V等[15]通過反向遺傳技術(shù)構(gòu)建V knockout CDV、C knockout CDV和V、C knockout CDV重組質(zhì)粒。經(jīng)研究表明,V蛋白是病毒在T細(xì)胞中迅速增殖所必需的,通過抑制IFN信號(hào)傳送和IFN轉(zhuǎn)錄,進(jìn)而完全抑制IFN反應(yīng)和細(xì)胞因子;C蛋白可能影響病毒的傳染性。Rothlisberger A等[16],進(jìn)一步研究表明,V蛋白不僅是干擾素頡頏蛋白,而且V蛋白基因N末端、C末端對(duì)于V蛋白抑制IFN-α/β反應(yīng)的活性是必不可少的。

    3 基質(zhì)膜(M)蛋白及其基因

    基質(zhì)膜(M)蛋白基因大約由1 442個(gè)核苷酸組成,3′端有一400個(gè)核苷酸的非編碼區(qū)序列(3′UTR),只有一個(gè)開放閱讀框,編碼335個(gè)氨基酸,M蛋白分子質(zhì)量為34 ku,是病毒粒子中最小的蛋白。M蛋白是所有結(jié)構(gòu)蛋白中最為保守的。M蛋白在病毒裝配過程中,起到協(xié)調(diào)病毒組件和膜骨架結(jié)構(gòu)關(guān)系的作用。M蛋白還與病毒出芽相關(guān),同時(shí)在囊膜糖蛋白與囊膜表面連接中起橋連作用,影響囊膜表面糖蛋白的融合功能[17]。

    研究表明,病毒復(fù)制時(shí)需要完整的肌動(dòng)蛋白纖維[18]。利用激光共聚焦掃描顯微鏡技術(shù)在有無經(jīng)過La-B、C-D肌動(dòng)蛋白纖維抑制劑處理的情況下,觀察M蛋白在細(xì)胞內(nèi)的分布情況。研究發(fā)現(xiàn)M蛋白沿著肌動(dòng)蛋白纖維對(duì)齊成一條線,而肌動(dòng)蛋白纖維抑制劑能夠顯著地降低病毒的傳染性[19]。經(jīng)La-B處理后轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞,M蛋白主要分布在質(zhì)膜上,經(jīng)C-D處理后的M蛋白主要分布在細(xì)胞質(zhì)中,然而F蛋白的分布則沒有發(fā)現(xiàn)明顯地變化,說明肌動(dòng)蛋白纖維阻斷劑特異地影響M蛋白,使其在細(xì)胞內(nèi)的分布發(fā)生顯著地改變。由此可以推測(cè)M蛋白是沿著肌動(dòng)蛋白纖維運(yùn)輸?shù)劫|(zhì)膜,然后完成病毒的出芽過程。這說明M蛋白和肌動(dòng)蛋白纖維的相互作用可能對(duì)產(chǎn)生傳染性的CDV至關(guān)重要。

    4 融合(F)蛋白及其基因

    融合(F)蛋白基因長(zhǎng)為2 205個(gè)核苷酸,F(xiàn)蛋白分子質(zhì)量為62 ku,由F1和F2由兩個(gè)亞單位蛋白組成,翻譯時(shí)起始于461~463位的AUG到757位核苷酸,編碼99個(gè)氨基酸為F2蛋白,分子質(zhì)量為23 ku,從758至2 071位核苷酸,編碼438個(gè)核苷酸為F1蛋白。F1蛋白嵌入囊膜,而F2蛋白位于囊膜外側(cè),F(xiàn)1蛋白和F2蛋白通過二硫鍵連接。F蛋白經(jīng)蛋白酶裂解分為三個(gè)部分,縮氨酸信號(hào)肽、F2蛋白和F1蛋白[20]。裂解位點(diǎn)AQIHW在縮氨酸信號(hào)肽的C端,而RRQRR在F1蛋白的 N 端[21-23],這兩個(gè)裂解位點(diǎn)是高度保守的??s氨酸信號(hào)區(qū)在前體蛋白F0被裂解成F1蛋白和F2蛋白的過程中起到至關(guān)重要的作用[24]。將Asia 1型和Asia 2型CDV的縮氨酸信號(hào)區(qū)分別與Ondestepoort株進(jìn)行比對(duì),氨基酸差異性分別為30%~32%和34%~35%,核苷酸序列差異性分別為15%~16%和18%~19%,說明該信號(hào)肽序列的多樣性。F1蛋白具有融合功能,它包括 N端的縮氨酸融合區(qū)(FP)、穿膜區(qū)(TM)和C端的cytoplasmic tail區(qū)(CT);F2蛋白具有附著功能。Asia型CDV的F蛋白上有7個(gè)潛在的糖基化位點(diǎn),其中4個(gè)分別在F2蛋白區(qū)的141位~143、173位~175和179位~181位和F1蛋白區(qū)的517位~519位[25]。另外3個(gè)潛在糖基化位點(diǎn)具有一致的氨基酸序列(N-X-S/T),而且只在 Asia 1型CDV中被發(fā)現(xiàn)。其中2個(gè)在縮氨酸信號(hào)區(qū)的62位~64位和108位~110位,最后一個(gè)則在個(gè)別Asia 1型CDV F1蛋白區(qū)的605位~607位[26]。

    F蛋白是位于CDV囊膜上的I型糖蛋白,以非共價(jià)鍵連接的同源三聚體形式存在,介導(dǎo)囊膜和細(xì)胞膜融合,使病毒具有在宿主體內(nèi)擴(kuò)散的能力,是感染性病毒粒子進(jìn)入宿主細(xì)胞所必需的。von Messling V等[15]構(gòu)建了3種重組質(zhì)粒58utr MFNP、58ΔF106和58utr MF-NPΔF106。研究表明只缺失F蛋白縮氨酸信號(hào)(Fsp)區(qū)不影響病毒感染的進(jìn)程和結(jié)果;將M-F UTR替換成N-P UTR能夠延長(zhǎng)病毒在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的感染進(jìn)程;縮短 M-F UTR能夠提高F蛋白轉(zhuǎn)錄水平,進(jìn)而促進(jìn)F蛋白的翻譯和成熟病毒的產(chǎn)生。結(jié)果證明,麻疹病毒屬病毒M-F基因區(qū)通過控制F基因表達(dá)的轉(zhuǎn)錄過程來調(diào)節(jié)病毒的抗原性[27]。

    5 血凝素(H)蛋白及其基因

    血凝素(H)蛋白基因長(zhǎng)為1 946個(gè)核苷酸,有一個(gè)開放閱讀框,起始于21位~23位ATG,終止于1 833位~1 835位的TAA,編碼604個(gè)氨基酸,分子質(zhì)量為76 ku。在麻疹病毒屬所有的結(jié)構(gòu)蛋白基因中,H蛋白基因變異性最大。H蛋白是CDV囊膜表面主要的糖蛋白之一,為Ⅱ型糖蛋白,是構(gòu)成囊膜纖突的主成分,決定了CDV的宿主特異性,并協(xié)助F蛋白使病毒囊膜與宿主細(xì)胞發(fā)生膜融合侵入宿主細(xì)胞。CDV的H蛋白首先吸附于宿主細(xì)胞SLAM受體上,隨后H蛋白的構(gòu)象發(fā)生改變,產(chǎn)生信號(hào)給F蛋白使病毒囊膜和宿主細(xì)胞發(fā)生膜融合,進(jìn)而入侵宿主細(xì)胞。而且膜融合的程度和效率也依賴于H蛋白[28-30]。H蛋白還決定CDV的生長(zhǎng)特性和趨向性[29]。也是誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體的主要蛋白之一,而且抗CDV H蛋白單克隆抗體(Mc Ab)保護(hù)力強(qiáng)于抗F蛋白Mc Ab[31]。

    CDV H蛋白有廣泛的糖基化位點(diǎn),但是野毒株與疫苗株H蛋白的潛在糖基化位點(diǎn)不同,野毒株為8個(gè)~9個(gè),而 Onderstepoort株為4個(gè)[32-33]。形成大蝕斑的Onderstepoort(OL)株的H蛋白在60位氨基酸殘基處與野毒株5804P的H蛋白存在差別,可能是5804P株多了幾個(gè)潛在N-糖基化位點(diǎn),而且疫苗株H蛋白的分子量小于野毒株的H蛋白。由此可以推測(cè)減少的N-糖基化位點(diǎn)可能對(duì)病毒感染性減弱起到關(guān)鍵作用,如果增加N-糖基化位點(diǎn)可能最終導(dǎo)致疫苗免疫失?。?5,33-34]。OL疫苗株的 H 蛋白較5804P強(qiáng)毒株的H蛋白少了3個(gè)潛在連接N-糖基化位點(diǎn),導(dǎo)致了在309(N~S)、393(T~A)和456(N~D)氨基酸序列的改變。von Messling V等[29],研究證明了野毒株5804P的 H蛋白上的7個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的膜外N-糖基化位點(diǎn)和一個(gè)非標(biāo)準(zhǔn)的N-糖基化位點(diǎn),其中5個(gè)可能被利用。將5804P H蛋白N-糖基化位點(diǎn)突變,保留與OL株相同的3個(gè)糖基化位點(diǎn),構(gòu)建p5804P-HOL-like重組質(zhì)粒,經(jīng)轉(zhuǎn)染細(xì)胞表達(dá),發(fā)現(xiàn)重組病毒致病性減弱,證明H蛋白的糖基化影響病毒的毒力;再使其H蛋白上的N-糖基化位點(diǎn)全部缺失,構(gòu)建p5804P-H5ko和p5804P-H6ko重組質(zhì)粒,發(fā)現(xiàn)重組病毒不再引起發(fā)病,但是仍然具有引起免疫抑制的能力,這就證明了H蛋白N-糖基化位點(diǎn)的減少,能夠引起病毒感染性減弱而不影響免疫抑制反應(yīng)。所以H蛋白的N-糖基化位點(diǎn)對(duì)于病毒感染進(jìn)程是必不可少的,并且影響病毒的感染性。

    6 大(L)蛋白及其基因

    大(L)蛋白基因長(zhǎng)為6 573個(gè)核苷酸,有一個(gè)開放閱讀框起始于23位的AUG,編碼2 161個(gè)氨基酸,5′端有一22個(gè)核苷酸的非編碼區(qū)序列(5′UTR),3′端有一69個(gè)核苷酸的非編碼區(qū)序列(3′UTR)。L蛋白分子質(zhì)量為246 ku,是病毒粒子中最大的蛋白,具有聚合酶活性。

    Mcllhatton M A 等[14]通過對(duì) MV、RPV、CDV和PDV 4種麻疹病毒L基因序列分析比對(duì),說明L基因上有3個(gè)保守區(qū)域,1 aa~606 aa、650 aa~1 694 aa和1 717 aa~2 183 aa,其中1 aa~606 aa和1 717 aa~2 183 aa兩個(gè)保守區(qū)具有與黏合RAN的功能,保守區(qū)650 aa~1 694 aa則與RNA聚合酶活性有關(guān)。

    7 結(jié)語(yǔ)

    利用反向遺傳學(xué)技術(shù)能夠讓我們?cè)诜肿铀綄?duì)CDV進(jìn)行研究。通過對(duì)強(qiáng)、弱毒株基因進(jìn)行點(diǎn)突變或部分缺失,研究是否改變其致病性和能否在宿主體內(nèi)形成持續(xù)感染。CDV6個(gè)蛋白基因中,N蛋白基因具有較高的保守性,能夠誘導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫,并在病毒的復(fù)制的過程中起到重要的作用。研究表明,N蛋白N末端1 aa~80 aa的NLS和NES是N蛋白核轉(zhuǎn)運(yùn)所必需的。將NLS和NES兩個(gè)亮氨酸/異亮氨酸富集區(qū)同時(shí)進(jìn)行突變,破壞N蛋白的細(xì)胞核轉(zhuǎn)運(yùn)過程,進(jìn)而研究這兩個(gè)區(qū)域是否跟病毒的復(fù)制效率有關(guān)。

    P基因編碼的非結(jié)構(gòu)蛋白V蛋白,其C、N末端具有抑制IFN反應(yīng)的活性。有研究表明,IFN的抑制與STAT1/STAT2的核轉(zhuǎn)入破壞過程相關(guān)聯(lián),然而這些蛋白的磷酸化過程沒有受到影響。V蛋白的N末端(VNT)的靶蛋白是STAT1,能夠抑制IFN反應(yīng)的抗病毒活性。同時(shí),C末端(VCT)自身并不具有抑制功能,需要與VNT結(jié)合一起作用STAT2,隨后抑制IFN信號(hào)傳遞路徑[16]。我們可以在P基因上進(jìn)行點(diǎn)突變,使V蛋白不能翻譯表達(dá),來進(jìn)一步研究V蛋白與病毒復(fù)制的關(guān)系。

    F蛋白在病毒囊膜和宿主細(xì)胞膜融合過程中起到介導(dǎo)作用。F蛋白經(jīng)蛋白酶裂解成F1和F2亞單位蛋白,在膜融合過程中扮演不同重要的角色。F蛋白上有兩個(gè)裂解位點(diǎn),人為的將這兩個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行突變或缺失,使F蛋白不能被蛋白酶裂解其膜融合和侵染過程可能受到影響。

    H蛋白上具有廣泛的糖基化位點(diǎn),這些糖基化位點(diǎn)可能與病毒的致病性密切相關(guān)。疫苗株H蛋白上的N-糖基化位點(diǎn)較強(qiáng)毒株少。所以,可以在弱毒株H蛋白上插入幾個(gè)額外的糖基化位點(diǎn),使其致病性增強(qiáng),并引起犬瘟熱臨床癥狀和在宿主體內(nèi)形成持續(xù)感染。也可以將強(qiáng)毒株H蛋白上的糖基化位點(diǎn)缺失,從而獲得具有良好免疫保護(hù)性且低毒力的弱毒株。

    針對(duì)犬瘟熱的預(yù)防免疫主要采用滅活苗和弱毒苗免疫。但是CDV滅活疫苗不能提供持久的免疫力,弱毒疫苗對(duì)動(dòng)物機(jī)體具有一定程度的免疫抑制和損傷神經(jīng)系統(tǒng)的潛在危害。新型的基因工程疫苗與傳統(tǒng)疫苗相比更有安全性。所以研發(fā)更安全、有效地基因工程疫苗對(duì)預(yù)防犬瘟熱具有重大的意義。當(dāng)今國(guó)內(nèi)對(duì)CDV分子水平上的研究雖然取得了一定的進(jìn)展,但還是處于研究的初級(jí)階段。需盡快構(gòu)建反向遺傳學(xué)操作平臺(tái),為深入研究CDV的致病機(jī)理、病毒弱化和疫苗開發(fā)研制提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。

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    Progress on Canine Distemper Virus

    HU Jia-xin1,2,WEN Yong-jun2,HUO Zhi-yun1,2,WU Hua2,GAO Wei-fan1
    (1.ShenyangAgriculturalUniversity,Shenyang,Liaoning,110866,China;2.DivisionofZoonosis,InstituteofSpecial EconomicAnimalandPlantSciences,ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Changchun,Jiling,130122,China)

    Canine distemper(CD),an acute and highly contagious disease,caused by canine distemper virus(CDV).CD has epidemic wide range,high morbidity and mortality,and variety of clinical symptoms.CDV has wide host range,and all-day-old dogs can be infected.CDV is a member ofMorbillivirusinParamyxovirusfamily.CDV,an enveloped,linear single-stranded negative strand RNA virus.CDV genome encodes six protein:nuclearcapsid(N)protein,phosphorus(P),substrate membrane(M)protein,fusion(F)protein,hemagglutinin(H)protein and big(L)protein.N,P and L proteins are concerned with virus duplicate;M protein is associated with the virus of the assembly and budding;F,H proteins play an important role in virus infection process.With the rapid development of the pet industry and the fur farming industry,the incidence of CD was in a upward trend in China in recent years.In this paper recent progress in molecular biology of canine distemper virus was summarized,for the further study of canine distemper virus.

    CDV;molecular biology;pathogenic mechanism

    S852.655

    B

    1007-5038(2012)06-0134-06

    2012-02-22

    胡嘉欣(1986-),男,遼寧沈陽(yáng)人,碩士研究生,主要從事微生物和免疫學(xué)研究。*通訊作者

    研究論文

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