精甲霜靈對大豆根腐病菌的毒力研究

楊明秀，張艷菊，張齊鳳，葉 楠

（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，哈爾濱 150030）

大豆根腐病是一種全球性的大豆根部病害，也是黑龍江省大豆產(chǎn)區(qū)的主要病害，常年發(fā)病面積達(dá)70萬hm2，占大豆播種面積1/3以上。傳播方式為土傳，危害較重，一般減產(chǎn)10%～30%，重病地區(qū)可減產(chǎn)60%，甚至絕產(chǎn)[1]。在三江平原的大豆產(chǎn)區(qū)危害尤為嚴(yán)重，近年在黑龍江省松嫩平原大豆產(chǎn)區(qū)危害較為嚴(yán)重[2]。大豆根腐病是由多種土傳真菌單一或復(fù)合侵染引起，病原種類包括鐮孢菌、絲核菌、疫霉菌、腐霉菌等多個屬的病原真菌[3-6]。由于致病病原菌種類繁多，導(dǎo)致大豆根腐病的防治較為困難。目前生產(chǎn)上對大豆根腐病的防治主要依賴于化學(xué)農(nóng)藥，但長期使用化學(xué)農(nóng)藥帶來的環(huán)境污染和農(nóng)藥殘留問題已引起關(guān)注，尋找環(huán)境相容性好、防效高替代農(nóng)藥產(chǎn)品迫在眉睫。精甲霜靈（[R）-metalaxyl-M]由Novartis公司開發(fā)生產(chǎn)，是世界上第一個商品化的具有立體旋光活性的殺菌劑。

本文采用生長速率法及苗期盆栽試驗測定35%精甲霜靈（Mefenoxam）種子處理乳劑對大豆根腐病主要致病菌的毒力，為大豆根腐病的有效防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試病原菌：瓜果腐霉菌（Pythium aphani dermatum）、立枯絲核菌（Rhizoctonia solani）、尖孢鐮孢菌（Fusarium oxysporum）和大豆疫霉根腐病菌（Phytophthora sojae）由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理室提供。

供試大豆品種：合豐25。

供試藥劑及使用濃度：35%精甲霜靈種子處理乳劑（山東省聯(lián)合農(nóng)藥工業(yè)有限公司生產(chǎn)）；53%精甲霜靈·錳鋅（Mefenoxam-mancozeb）可分散粒劑（瑞士先正達(dá)作物保護(hù)有限公司生產(chǎn)）；25%甲霜靈（Metalaxyl）可濕性粉劑（江蘇寶靈化工股份有限公司）；70%代森錳鋅（Mancozeb）可濕性粉劑（利民化工有限責(zé)任公司生產(chǎn)）；50%福美雙（Thiram）可濕性粉劑（佳木斯農(nóng)藥廠生產(chǎn)）；50%多菌靈（Carbendazim）可濕性粉劑（河南省孟州市平原農(nóng)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)）。

供試培養(yǎng)基：PDA培養(yǎng)基和高粱粒培養(yǎng)基用于培養(yǎng)瓜果腐霉菌、立枯絲核菌和尖孢鐮孢菌，CA培養(yǎng)基用于培養(yǎng)大豆疫霉根腐病菌。

1.2 方法

1.2.1 供試藥劑對病原菌菌絲生長抑制作用的測定

對大豆根腐病原菌的抑制作用測定采用生長速率法。從新培養(yǎng)的菌落邊緣用直徑為9 mm打孔器制備菌碟，接種于不同藥劑的培養(yǎng)基上，每皿一片。以不加藥劑的培養(yǎng)基為空白對照，每處理設(shè)3次重復(fù)。置于25℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)至對照菌菌落直徑大于6 cm時測量各處理的菌落直徑，計算生長抑制率。

生長抑制率(%)=[（對照菌落直徑-菌碟直徑）-（處理菌落直徑-菌碟直徑）]/（對照菌落直徑-菌碟直徑）×100%

1.2.2 供試藥劑對大豆根腐病菌卵孢子形成的影響

大豆疫霉根腐病菌用CA培養(yǎng)基培養(yǎng)5 d，瓜果腐霉菌用PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)3 d后均用9 mm打孔器制備菌碟，置于用滅菌水配制的不同藥劑中，3次重復(fù)，7 d后調(diào)查卵孢子的數(shù)量。

1.2.3 供試藥劑對大豆根腐病原菌的苗期防治效果

1.2.3.1 大豆根腐病病原菌的擴(kuò)繁

瓜果腐霉菌、立枯絲核菌和尖孢鐮孢菌采用高粱培養(yǎng)基培養(yǎng)，取高粱100 g放入250 mL的三角瓶中，用水浸泡12 h，然后除去水分，高壓滅菌。每瓶中接入直徑為9 mm的菌塊5塊，25℃培養(yǎng)7～10 d，備用。大豆疫霉根腐病菌用CA培養(yǎng)基培養(yǎng)，25℃培養(yǎng)1周備用。

1.2.3.2 精甲霜靈對大豆根腐病菌的苗期防效試驗

于大豆播種前1 d各處理分別稱取一定量的種子，按藥劑用藥量為種子重量的2%比例進(jìn)行種子包衣，使藥劑與種子充分混拌，拌勻后晾干。將10 g高粱粒培養(yǎng)的瓜果腐霉菌、立枯絲核菌、尖孢鐮孢菌和10 g CA培養(yǎng)基培養(yǎng)的大豆疫霉根腐病菌與滅菌蛭石充分混勻后裝入直徑為10 cm的營養(yǎng)缽中，每缽播種12粒，每個處理3盆，即3次重復(fù)。1個月后調(diào)查病情指數(shù)，每個處理調(diào)查30株，計算防治效果。試驗數(shù)據(jù)采用鄧肯氏新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較，大豆根腐病的分級標(biāo)準(zhǔn)參照郭永霞等方法[7]。

2 結(jié)果與分析

2.1 精甲霜靈對大豆根腐病菌菌絲生長抑制作用的測定結(jié)果

由表1可以看出，35%精甲霜靈種子處理乳劑對鞭毛菌亞門的瓜果腐霉菌、大豆疫霉根腐病菌的菌絲生長抑制率均達(dá)100%，高于或與對照藥劑防治效果相同。對半知菌亞門的立枯絲核菌和尖孢鐮菌的菌絲生長抑制率分別達(dá)84.82%和59.99%，均高于對照藥劑53%精甲霜靈·錳鋅可分散粒劑、25%甲霜靈可濕性粉劑和70%代森錳鋅可濕性粉劑的防治作用；但都低于對照藥劑50%多菌靈可濕性粉劑和50%福美雙可濕性粉劑。

表1 不同藥劑處理對大豆根腐病菌菌絲生長的抑制作用Table 1 Inhibitory effects of different medicine treatments on mycelium growth of soybean root rot pathogens

2.2 精甲霜靈對大豆根腐病菌卵孢子形成的影響

由表2可知，35%精甲霜靈種子處理乳劑對大豆疫霉根腐病菌卵孢子的形成有促進(jìn)作用，在25倍物鏡下平均每視野孢子比對照卵孢子數(shù)量多31個；50%氟啶胺可濕性粉劑對大豆疫霉菌卵孢子形成影響最大，25倍物鏡下平均每視野孢子比對照卵孢子數(shù)量多100個。瓜果腐霉菌為10倍物鏡下平均每視野卵孢子數(shù)量，35%精甲霜靈種子處理乳劑對瓜果腐霉菌卵孢子的形成有抑制作用，卵孢子數(shù)量為0。

表2 不同藥劑處理對大豆根腐病菌卵孢子產(chǎn)生的影響Table 2 Inhibitory effects of different medicine treatments on thallospore of soybean root rot pathogens

2.3 精甲霜靈對大豆根腐病菌的苗期防效試驗結(jié)果

由表3可知，35%精甲霜靈SD在包衣量為0.2%時對尖孢鐮孢菌、立枯絲核菌、瓜果腐霉菌和大豆疫霉根腐病的防效分別為70.93%、65.63%、63.71%和76.54%。方差分析表明，35%精甲霜靈SD在包衣量為0.2%時對大豆根腐病菌的主要病原菌的防效均高于或與對照藥劑防治效果相同。

表3 不同藥劑處理對大豆根腐病菌的苗期防治效果Table 3 Control effects of different medicine treatments on soybean root rot pathogens at seeding period

3 討論與結(jié)論

35%精甲霜靈種子處理乳劑對大豆根腐病主要病原菌均具有較好的防治作用，其中對大豆疫霉根腐病菌的防治效果較為顯著，研究表明，35%精甲霜靈種子處理乳劑對大豆疫霉菌的卵孢子產(chǎn)生有促進(jìn)作用，因此對大豆疫霉根腐病翌年的發(fā)生是否產(chǎn)生影響，有待進(jìn)一步研究。甲霜靈（Metalaxyl，商品名Ridomil）屬于苯烯酰胺類殺菌劑，具有低毒、高效和持效期長等特性，1977年推廣應(yīng)用。國外研究表明，甲霜靈具有優(yōu)良的保護(hù)、治療和鏟除作用，尤其對卵菌綱中的霜霉屬、疫霉屬和腐霉屬的病原菌具有很強(qiáng)活性[8]。由于甲霜靈對病菌的作用位點單一，病菌容易對其產(chǎn)生抗性突變，已知有許多研究報道多種疫霉菌對甲霜靈的抗性[9]。如甘肅蘭州、天水、武威等地區(qū)辣椒疫霉菌對甲霜靈普遍產(chǎn)生較高抗性，抗性水平最高可達(dá)388.0倍[10]。精甲霜靈是甲霜靈兩個異構(gòu)體中的一個，不僅具備甲霜靈等苯甲酰胺類殺菌劑的抑菌作用機(jī)制，可能還因其獨特的手性結(jié)構(gòu)，增強(qiáng)殺菌劑與靶標(biāo)位點的親和性以及對病原菌細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的影響。所以在相同的用藥濃度下，精甲霜靈在田間表現(xiàn)出的防病效果明顯高于甲霜靈[11]。因此，對甲霜靈產(chǎn)生抗藥性的地區(qū)不適宜再使用此種藥劑，未產(chǎn)生抗藥性的地區(qū)也應(yīng)與其他殺菌劑交替使用或與其他殺菌劑混用以減緩抗藥性菌株的產(chǎn)生。本研究表明，35%精甲霜靈種子處理乳劑是甲霜靈理想的替代殺菌劑。

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