北沙參活性成分與藥材質(zhì)量的動態(tài)監(jiān)測

張會敏，宋 健

(1.山東省中醫(yī)藥研究院，山東濟(jì)南250014;2.山東中醫(yī)藥大學(xué)，山東濟(jì)南250355)

北沙參為傘形科植物珊瑚菜Glehnia littoralis Fr.Schmidt ex Miq.的干燥根。山東為北沙參主產(chǎn)地，而萊陽為“道地”產(chǎn)區(qū)，素以產(chǎn)量大、質(zhì)量好、療效佳而馳名中外。目前，北沙參的引種區(qū)域不斷擴(kuò)大，河北安國與內(nèi)蒙古赤峰均有大面積種植，質(zhì)量不一［1］。北沙參根含歐前胡素、異歐前胡素、補(bǔ)骨脂素等多種香豆素類和糖類化合物，還有生物堿、揮發(fā)油、油酸、氨基酸等。在成分分析的研究方法中，文獻(xiàn)記載的主要有薄層－紫外、薄層掃描。目前2010年版《中國藥典》也未對其進(jìn)行含量測定分析。為保證北沙參的質(zhì)量，建立和完善北沙參的質(zhì)量控制關(guān)鍵技術(shù)和評價標(biāo)準(zhǔn)，我們采用HPLC方法對不同批次北沙參中歐前胡素、異歐前胡素的含量同時進(jìn)行了測定，并考察了其多糖、水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物的含量動態(tài)變化。

1 北沙參中歐前胡素、異歐前胡素含量的動態(tài)檢測

1.1 儀器與試藥、試驗材料

1.1.1 儀器與試藥 Agilent 1100 LC高效液相色譜儀;Agilent Chemstation工作站(美國安捷倫科技公司);檢測器:Agilent DAD;色譜柱:Phenomenex－C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm);KQ－250E型醫(yī)用超聲波清洗器(江蘇昆山市超聲儀器有限公司);歐前胡素(中國藥品生物制品檢定所，批號: 110826－200308);異歐前胡素(中國藥品生物制品檢定所，批號:0827－9502);甲醇(一級色譜純，天津市四友生物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司，批號:080907101)等。

1.1.2 試驗材料 產(chǎn)地均為山東萊陽胡城，詳見表1。

表1 不同批次北沙參藥材樣品

1.2 實驗方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱:Phenomenex－C18柱(4.6 mm× 250 mm，5 μm);柱溫:30℃;流動相:甲醇－水(65∶35);流速:1.0 mL·min－1;檢測波長:248 nm。

1.2.2 對照品溶液的制備 分別精密稱取干燥至恒重的歐前胡素、異歐前胡素對照品，加甲醇溶解，分別制成0.066 mg ·mL－1、0.060 mg·mL－1的對照品溶液。

1.2.3 供試品溶液的制備 取樣品，粉碎，過40目篩，精密稱取10 g，置具塞錐形瓶中，加乙醚100 mL，超聲提取30 min，提取2次，回收溶劑，殘渣用甲醇溶解并定容于5 mL容量瓶中，用0.45 μm濾膜過濾，作為供試品溶液。

1.2.4 線性試驗 分別精密吸取對照品溶液0.5、1、2、4、6、8、10、15、20 μL進(jìn)樣，按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:歐前胡素Y=104.04+485.35X，r=0.999 5，線性范圍:0.033～1.32 μg;異歐前胡素Y=44.25+181.69X，r=0.998 9，線性范圍:0.03～1.2 μg。結(jié)果表明，歐前胡素、異歐前胡素峰面積與進(jìn)樣量均有良好的線性關(guān)系。

1.2.5 精密度試驗 取同一對照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣5次，測其峰面積，歐前胡素RSD為0.83%、異歐前胡素RSD為1.23%。

1.2.6 重復(fù)性試驗 取北沙參藥材1號供試品5份，按1.2.3制備供試品溶液，測定，計算含量，歐前胡素RSD為1.70%、異歐前胡素RSD為1.67%。

1.2.7 回收率實驗 采用標(biāo)準(zhǔn)加入法，精密稱取已測知含量的樣品5份，分別加入一定量的對照品溶液，按樣品測定項下方法操作，計算回收率。歐前胡素和異歐前胡素平均回收率分別為98.23%、96.94%，RSD分別為1.36%、0.98%，見表2。

表2 歐前胡素、異歐前胡素加樣回收試驗結(jié)果(n=5)

1.3 樣品測定 按供試品溶液制備項下方法制備樣品溶液，用0.45 μm濾膜過濾后，進(jìn)樣20 μL，按上述色譜條件測定。山東道地藥材北沙參中歐前胡素異歐前胡素含量動態(tài)分析結(jié)果見表3。

表3 不同年份北沙參歐前胡素、異歐前胡素含量比較(n=3)

2 糖類成分、浸出物、灰分、水分分析

北沙參含有較多的糖類成分，藥理研究表明北沙參多糖對巨噬細(xì)胞(MΦ)吞噬功能有非常顯著促進(jìn)作用;對血清抗體產(chǎn)生有顯著增強(qiáng)作用;對細(xì)胞免疫功能和T、B細(xì)胞的增生均有抑制作用;對免疫系統(tǒng)有免疫調(diào)節(jié)作用。糖類成分可能是其滋陰作用的物質(zhì)基礎(chǔ)之一，本文按照文獻(xiàn)方法［2］對其可溶性糖和粗多糖進(jìn)行了含量測定。北沙參含香豆素類和糖類等多種化學(xué)成分，浸出物的含量測定也是質(zhì)量控制的重要指標(biāo)，尤其當(dāng)活性成分不明確時，更具有實際意義。對北沙參進(jìn)行水溶性、醇溶性和醚溶性浸出物測定，不同批次山東北沙參中多糖類成分、浸出物、灰分、水分含量的動態(tài)檢測結(jié)果見表4。

表4 不同批次北沙參多糖、浸出物、灰分、水分含量表(n=3)

3 小結(jié)與討論

3.1 實驗結(jié)果顯示，以2009年樣品中歐前胡素、異歐前胡素含量最高分別為0.021 2%和0.014 25%，兩種香豆素總含量平均值為0.034 77%。三批北沙參樣品總糖含量均值為77.38%，其中粗多糖含量均值為45.63%，可溶性糖均值為31.74%;水溶性浸出物含量均值為35.68%，醇溶性浸出物含量均值為18.02%，醚溶性浸出物含量均值為4.66%;灰分、水分含量均值分別為3.43%、9.12%。不同批次北沙參樣品中歐前胡素、異歐前胡素、多糖、浸出物、灰分及水分含量均呈現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性，表明山東道地藥材北沙參具有良好的質(zhì)量穩(wěn)定性，同時說明本研究采用的質(zhì)量評價方法穩(wěn)定可控。

3.2 目前，北沙參質(zhì)量評價的研究報道較多［3～5］，但藥典并未規(guī)定北沙參含量檢測指標(biāo)性成分，本研究同時以歐前胡素、異歐前胡素、多糖、浸出物、灰分及水分含量為指標(biāo)，較為系統(tǒng)的對不同批次山東北沙參進(jìn)行評價，并追蹤考察三年的北沙參藥材化學(xué)活性成分動態(tài)變化規(guī)律，對山東道地藥材北沙參的質(zhì)量評價有重要意義。

［1］ 李寶國，石俊英.近十年來北沙參的研究概況［J］.時珍國醫(yī)國藥，2002，13(5):309－311.

［2］ 石俊英，李寶國，牟彩萍.山東地產(chǎn)藥材北沙參多糖含量測定［J］.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2002，26(2):139－142.

［3］ 石俊英，張永清，李寶國，等.北沙參栽培品種與藥材質(zhì)量的相關(guān)性研究［J］.中藥材，2002，25(11):776－777.

［4］ 李寶國，石俊英.HPLC法測定不同產(chǎn)地北沙參藥材中香豆素的含量［J］.中藥材，2005，28(6):475－476.

［5］ 李寶國，石俊英.HPLC法同時測定不同部位中3種香豆素的含量［J］.山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2005，29(5): 383－384，409.